Human olfactory mesenchymal stromal cells co-expressing horizontal basal and ensheathing cell proteins in culture / Las células mesenquimales del estroma olfatorio humano coexpresan proteínas de las células basales horizontales y de recubrimiento neural en cultivo

Introduction: The olfactory neuro-epithelium has an intrinsic capability of renewal during lifetime provided by the existence of globose and horizontal olfactory precursor cells. Additionally, mesenchymal stromal olfactory cells also support the homeostasis of the olfactory mucosa cell population. Under in vitro culture conditions with Dulbecco modified eagle/F12 medium supplemented with 10% fetal bovine serum, tissue biopsies from upper turbinate have generated an adherent population of cells expressing mainly mesenchymal stromal phenotypic markers. A closer examination of these cells has also found co-expression of olfactory precursors and ensheathing cell phenotypic markers. These results were suggestive of a unique property of olfactory mesenchymal stromal cells as potentially olfactory progenitor cells. Objective: To study whether the expression of these proteins in mesenchymal stromal cells is modulated upon neuronal differentiation. Materials and methods: We observed the phenotype of olfactory stromal cells under DMEM/F12 plus 10% fetal bovine serum in comparison to cells from spheres induced by serum-free medium plus growth factors inducers of neural progenitors. Results: The expression of mesenchymal stromal (CD29+, CD73+, CD90+, CD45-), horizontal basal (ICAM-1/CD54+, p63+, p75NGFr+), and ensheathing progenitor cell (nestin+, GFAP+) proteins was determined in the cultured population by flow cytometry. The determination of Oct 3/4, Sox-2, and Mash-1 transcription factors, as well as the neurotrophins BDNF, NT3, and NT4 by RT-PCR in cells, was indicative of functional heterogeneity of the olfactory mucosa tissue sample. Conclusions: Mesenchymal and olfactory precursor proteins were downregulated by serum-free medium and promoted differentiation of mesenchymal stromal cells into neurons and astroglial cells.

Introducción. El recambio celular del neuroepitelio olfatorio ocurre durante la vida del individuo gracias a precursores olfatorios. Además, las células mesenquimales del estroma también contribuyen a la homeostasis de la mucosa. Cuando un explante de una biopsia de mucosa se cultiva en un medio esencial mínimo, se genera una población predominante de células adherentes que expresan proteínas típicas de las células mesenquimales del estroma. La coexpresión de marcadores fenotípicos de precursores olfatorios y de células del recubrimiento del nervio olfatorio constituiría una propiedad única de las células mesenquimales del estroma. Objetivo. Determinar si la diferenciación celular de las células mesenquimales hacia fenotipos neurales modula la expresión de los marcadores mesenquimales característicos. Materiales y métodos. Se compararon las células aisladas de la mucosa olfatoria en un medio de cultivo con suplemento de 10 % de suero fetal bovino con esferas generadas en un medio sin suero más factores de crecimiento. Resultados. Se determinó la expresión de proteínas de las células mesenquimales del estroma (CD29+, CD73+, CD90+, CD45-), de las basales horizontales (ICAM-1/CD54+, p63+, p75NGFr+), y de las del recubrimiento del nervio olfatorio (nestin+, GFAP+) en la misma población cultivada. La determinación de Oct 3/4, Sox-2 y Mash-1, así como de las neurotrofinas BDNF, NT3 y NT4, sugirió que las células del estroma son funcionales. La expresión de las proteínas de las células mesenquimales y los precursores olfatorios, disminuyó en las células de las mesenesferas inducidas por ausencia de suero en el medio de cultivo. Conclusión. Las células mesenquimales del estroma de la mucosa olfatoria presentan una tendencia dominante hacia la diferenciación neural.

Production and characterization of alginate microparticles obtained by ionic gelation and electrostatic adsorption of concentrated soy protein / Produção e caracterização de micropartículas de alginato obtidas por gelificação iônica e adsorção eletrostática de concentrado proteico de soja

ABSTRACT: Microencapsulation is used for protection and release of bioactive compounds. Combination of encapsulation methods allows the production of matrices with better technological properties compared to the application of one of the methods alone. Use of ionic gelation produces porous microparticles, and coating it with a protein, by electrostatic interaction, may contribute to a better protection of the active compound. The objective of the research was to produce alginate microparticles (AG) through ionic gelation and to coat them with soluble protein from soy protein concentrate. Two factors were studied, calcium concentration during ionic gelation (0.8, 1.6 and 2.4% w/w) and pH (3.5 and 7.0) of the protein solution for electrostatic interaction. Zeta potential (ZP) of biopolymers and microparticles were determined. Microparticles were characterized according to its morphology, average size and size distribution, as well as protein adsorption. Microparticles presented (154-334μm) multinuclear distribution of active compound, continuous and smooth surface, with a great standard deviation considering average size. The calcium concentration did not influence the protein adsorption on microparticles.The pH used in protein adsorption showed significant effect, with higher adsorption occurring at pH 3.5 (6.5 to 6.7% w/w, dry basis,db, of adsorbed protein) compared to pH 7.0 (<2.0% w/w, db, of adsorbed protein) indicating that electrostatic interaction was determinant for the protein coating. At this situation, ionic gelation microparticles and proteins presented ZP with opposite charges (pH>pKa AG<Isoelectric point, IP).

RESUMO: A microencapsulação é utilizada para a proteção de compostos bioativos e controle de sua liberação. A combinação de métodos de encapsulação permite a obtenção de matrizes com melhores propriedades tecnológicas em relação às técnicas utilizadas individualmente. Na gelificação iônica são produzidas micropartículas porosas, e o recobrimento por interação eletrostática com uma proteína permite a obtenção de micropartículas mais protetivas. O objetivo do trabalho foi produzir micropartículas de alginato (AG) através da gelificação iônica e recobri-las com proteínas solúveis de concentrado proteico de soja. Dois fatores foram estudados, o teor de cálcio utilizado na gelificação iônica (0,8,1,6 e 2,4% m/m) e o pH (3,5 e 7,0) para o recobrimento eletrostático com uma camada proteica. Os potenciais zeta (PZ) dos biopolímeros e das micropartículas foram determinados. As micropartículas foram caracterizadas quanto a morfologia, tamanho médio e sua distribuição e quanto ao teor de proteína adsorvida nas situações estudadas. As micropartículas obtidas apresentaram-se (154-334μm) com recheio distribuído de forma multinuclear, com superfície continua e visualmente lisas, porém com variação grande no tamanho médio. A variação do teor de cálcio não foi significativa na adsorção proteica. O pH utilizado na adsorção proteica foi significativo, com adsorções muito maiores em pH 3,5 (6,5 - 6,7% m/m de proteína adsorvida, base seca) comparado ao pH 7,0 (<2,0% m/m de adsorção proteica, base seca), indicando que a interação eletrostática foi determinante no recobrimento proteico. Nesta situação, micropartículas AG e a proteína apresentam PZ com cargas opostas (pH>pKa AG<ponto isoeletrico, PI).

Tuberculosis mamaria / Mammary tuberculosis

Se presentan dos casos de tuberculosis mamaria de presentación nodular. El primer caso es una paciente de 53 años a la que se diagnostica tuberculosis (TBC) por biopsia mamaria y luego se observa foco pulmonar (tuberculosis secundaria). El segundo caso es una mujer de 29 años que su única manifestación de TBC es un nódulo de mama (tuberculosis primaria). La tuberculosis es una entidad rara, de difícil diagnóstico. La PPD (prueba tuberculínica positiva), la presencia de Mycobacterium tuberculosis en el cultivo específico y la respuesta al tratamiento antituberculoso certifican la enfermedad.

El género femenino como factor predictivo en los resultados de la endarterectomía carotídea / Female gender as a predictive factor in the outcome of carotid endarterectomy

Introducción: Existe evidencia contradictoria acerca del beneficio de la endarterectomía carotídea (EC) en la mujer. Objetivo: Evaluar si el género femenino afecta los resultados inmediatos y alejados de la EC. Material y método: Estudio retrospectivo de 346 EC realizadas entre Enero de 1990 y Julio de 2008 en el Hospital Guillermo Grant Benavente de Concepción. Del total, 137 EC fueron realizadas en mujeres. Como grupo control se consideró a los hombres operados en el mismo período, quienes presentaron características demográficas y otras variables potencialmente adversas en proporción similar a las mujeres. Todas las variables se analizaron en un estudio bivariado y multivariado. Se comparó la morbimortalidad operatoria AVC/muerte), la sobrevida global a 5 y 10 años, el intervalo libre de eventos neurológicos y de reestenosis a 5 años. Se utilizó el método de Kapplan-Meier para la sobrevida actuarial, el Test de Log Rank y Chi Cuadrado para la significación estadística y la regresión logística (Backward Stepwise) para el análisis multivariado. Los resultados alejados se expresan en sobrevida promedio + error estándar. Resultados: El género femenino no mostró ser una variable independiente negativa para los resultados de la EC. La incidencia de AVC/muerte en las mujeres fue 1,5 por ciento.(hombres: 1,4 por ciento) (p= NS). La sobrevida global a 5 y 10 años fue 82,5 por ciento +/- 4,1 y 49,7 por ciento +/- 9,7, respectivamente (hombres: 73,5por ciento + 4,0 y 45 por ciento +/- 7,8) (p= NS). A 5 años, el intervalo libre de eventos neurológicos fue 97 por ciento +/- 1,8 (hombres: 98,3 por ciento +/- 1,0) (p= NS) y el de reestenosis fue 93,9 por ciento +/- 3,6 (hombres: 98,5 por ciento +/- 1,1) (p= NS). Conclusión: El género femenino no afecta los resultados de la EC por lo que no se debe considerar un factor predictivo adverso.

Background: The benefits of carotid endarterectomy (CE) in women have been questioned Aim: to evaluate whether female gender influences the results of CE Methods: 346 procedures of CE performed between January 1990 and July 2008 at Hospital Guillermo Grant Benavente in Concepcion were restrospectively analyzed. 137 CE were performed in women. Demographic characteristics were similar between males and females. A university and multi variate analysis including other adverse factors influencing the results of surgery was performed. Operative morbidity and mortality, global survival, neurologic events free survival and the re stenosis rate at 5 years were analyzed. Actuarial survival was analyzed by the Kapplan-Meir procedure using the Log-rank and Chi square tests; Backward stepwise logistic regression was used in multivariate analysis. Results: Female gender was not found to be an independent risk factor for poorer outcomes of CE. Stroke plus total death in woman was 1,5 percent, versus 1,4 percent in man (P=NS). Survival in woman at 5 and 10 years was 82,5 percent +/- 4,1 and 49,7 percent +/- 9,7, respectively, whereas in man it was 73,5 percent +/- 4,0 and 45 percent +/- 7,8) (p NS). At 5 years follow-up 97 percent +/- 1,8 of woman versus 98,3 percent +/- 1,0 of men were free of neurological events; free of having restenosis were 93,9 percent +/- 3,6 of woman versus 98,5 percent +/- 1,1 of man (p= NS). Conclusion: female gender did not result in poorer results following CE and, therefore, should not be considered an adverse predictive factor for this surgical procedure.

Stability of free and immobilized Lactobacillus acidophilus and Bifidobacterium lactis in acidified milk and of immobilized B. lactis in yoghurt

Este trabalho avaliou a estabilidade de Bifidobacterium lactis (Bb-12) e de Lactobacillus acidophilus (La-05) nas formas livre e imobilizada em alginato de cálcio, em leite e leite acidificado (pHs 5.0, 4.4 e 3.8), e a estabilidade de B. lactis imobilizado em iogurte (fermentado até pH 4.2), durante 28 dias de estocagem refrigerada. Também foi estudada a eficiência de dois meios de cultura (ágar MRS modificado e Reinforced Clostridial Agar, acrescido de Prussian Blue) para enumerar B. lactis em iogurte. Agar Lee foi usado para enumeração de Streptococcus thermophilus e Lactobacillus delbrueckii ssp. bulgaricus quando B. lactis era enumerado no meio MRS. Ambos os microrganismos, nas formas livre e imobilizada, apresentaram uma taxa de sobrevivência adequada nos leites acidificados, uma vez que houve redução de apenas um ciclo log, após 21 dias de estocagem refrigerada. O número de células viáveis de B. lactis imobilizado mostrou um declínio gradual durante o período de armazenamento do iogurte, passando de 108 ufc/ml até não ter mais contagem na diluição 10-1. Quando as culturas não estavam em equilíbrio, o meio MRS modificado foi mais eficiente para a contagem de B. lactis em iogurte. Em vista destes resultados pode-se concluir que ambos os microrganismos podem ser incorporados em leite e leite acidificados, haja visto que a redução na população foi pequena durante o período de armazenagem estudado. A presença da cultura tradicional de iogurte parece ter afetado negativamente a sobrevivência de B. lactis e a imobilização não proveu proteção às células, em nenhum dos tratamentos estudados.

Stability of free and immobilized Lactobacillus acidophilus and Bifidobacterium lactis in acidified milk and of immobilized B. lactis in yoghurt

This study evaluated the stability of Bifidobacterium lactis (Bb-12) and of Lactobacillus acidophilus (La-05) both free and immobilized in calcium alginate, in milk and in acidified milk (pH 5.0, 4.4 and 3.8). The stability of immobilized B. lactis in yoghurt (fermented to pH 4.2), during 28 days of refrigerated storage was also evaluated. The efficiency of two culture media (modified MRS agar and Reinforced Clostridial Agar plus Prussian Blue) for counting of B. lactis in yoghurt was determined. Lee's agar was used to count Streptococcus thermophilus and Lactobacillus delbrueckii ssp. bulgaricus when B. lactis were counted in the MRS medium. B. lactis and L. acidophilus in both free and immobilized forms presented satisfactory rates of survival in milk and acidified milk because the average reduction of the population was only one log cycle after 21 days of storage. The number of viable cells of immobilized B. lactis in yoghurt presented a gradual decline throughout the storage period, passing from 10(8) cfu/ml to no count after 28 days of storage. When the cultures were not in equilibrium just the selective medium was efficient in counting B. lactis in yoghurt. The results showed that both microorganisms can be added to milk and acidified milk, because their population was only slightly affected during storage. The presence of traditional culture of yoghurt seems to be harmful for survival of immobilized B. lactis and the immobilization in calcium alginate failed as an effective barrier to protect the cells in all analysed treatments.

Este trabalho avaliou a estabilidade de Bifidobacterium lactis (Bb-12) e de Lactobacillus acidophilus (La-05) nas formas livre e imobilizada em alginato de cálcio, em leite e leite acidificado (pHs 5.0, 4.4 e 3.8), e a estabilidade de B. lactis imobilizado em iogurte (fermentado até pH 4.2), durante 28 dias de estocagem refrigerada. Também foi estudada a eficiência de dois meios de cultura (ágar MRS modificado e Reinforced Clostridial Agar, acrescido de Prussian Blue) para enumerar B. lactis em iogurte. Ágar Lee foi usado para enumeração de Streptococcus thermophilus e Lactobacillus delbrueckii ssp. bulgaricus quando B. lactis era enumerado no meio MRS. Ambos os microrganismos, nas formas livre e imobilizada, apresentaram uma taxa de sobrevivência adequada nos leites acidificados, uma vez que houve redução de apenas um ciclo log, após 21 dias de estocagem refrigerada. O número de células viáveis de B. lactis imobilizado mostrou um declínio gradual durante o período de armazenamento do iogurte, passando de 10(8) ufc/ml até não ter mais contagem na diluição 10-1. Quando as culturas não estavam em equilíbrio, o meio MRS modificado foi mais eficiente para a contagem de B. lactis em iogurte. Em vista destes resultados pode-se concluir que ambos os microrganismos podem ser incorporados em leite e leite acidificados, haja visto que a redução na população foi pequena durante o período de armazenagem estudado. A presença da cultura tradicional de iogurte parece ter afetado negativamente a sobrevivência de B. lactis e a imobilização não proveu proteção às células, em nenhum dos tratamentos estudados.