PCR múltiplex para el diagnóstico de microorganismos atípicos transmitidos sexualmente / Multiplex PCR testing for the atypical microorganisms diagnosis sexually transmitted

Resumen Antecedentes: Las infecciones de transmisión sexual son un problema de salud pública mundial. El análisis rutinario incluye solo pruebas microbiológicas y serológicas para el diagnóstico de patógenos. Los microorganismos atípicos como Chlamydia trachomatis y micoplasmas no son identificados debido a los requerimientos. Además, no es incluida Gardnerella vaginalis, aunque se asocia a la vaginosis bacteriana. Objetivo: Desarrollar una PCR múltiplex para el diagnóstico de C. trachomatis, micoplasmas y G. vaginalis. Método: Se estandarizó la PCR múltiplex utilizando oligonucleótidos para C. trachomatis (gen ompA, orf6 plasmídico), Mycoplasma/Ureaplasma y G. vaginalis (genes rRNA16s). Resultados: Se estandarizaron pruebas de PCR múltiplex para los microorganismos estudiados, optimizándose las concentraciones y condiciones de las reacciones múltiplex. Se obtuvieron PCR dúplex para C. trachomatis (ompA, orf6), Chlamydia/Gardnerella y Chlamydia/micoplasmas y tríplex para Chlamydia/Mycoplasma/Ureaplasma. También un cuádruplex para Chlamydia/Mycoplasma/Ureaplasma/Gardnerella. Los resultados fueron verificados por PCR e hibridación automática (HybriSpot 12) y análisis in silico. Conclusión: Se desarrollaron pruebas de PCR múltiplex con una alta sensibilidad y especificidad para la identificación de C. trachomatis, micoplasmas y G. vaginalis.

Abstract Background: Sexually transmitted infections are a global public health problem. Routine analysis includes microbiological and serological tests for the diagnosis of pathogens. Atypical microorganisms such as Chlamydia trachomatis and mycoplasmas are not determined due to the requirements for their identification. Furthermore, Gardnerella vaginalis is not included despite being associated with bacterial vaginosis. Objective: To develop a multiplex PCR to diagnose Chlamydia, mycoplasmas, and Gardnerella. Method: Standardization of multiplex PCR tests was carried out using oligonucleotides for the identification of Chlamydia (ompA gene, plasmid orf6), Mycoplasma/Ureaplasma and Gardnerella (rRNA16s genes). Results: Multiplex PCR tests were standardized for the microorganisms studied, optimizing the concentrations and conditions of the multiplex reactions. Duplex PCR was obtained for Chlamydia (ompA, orf6), Chlamydia/Gardnerella, and Chlamydia/mycoplasmas, and triplex PCR for Chlamydia/mycoplasmas. Also, a quadruplex for Chlamydia, Mycoplasma/Ureaplasma and Gardnerella. PCR and automatic hybridization verified the results obtained (HybriSpot 12) and in silico analysis. Conclusion: Multiplex PCR tests with high sensitivity and specificity were developed to identify C. trachomatis, mycoplasmas, and G. vaginalis.

Prevalencia de Chlamydia trachomatis en mujeres del Hospital General de Zona No. 29 / Chlamydia trachomatis prevalence in women from the Hospital General de Zona No. 29

Introducción: la Chlamydia trachomatis es la principal causa de infecciones bacterianas de transmisión sexual a nivel mundial. Se estima que cada año se producen 131 millones de casos. Cursa de manera asintomática, pero la infección ascendente en mujeres puede conducir a la enfermedad inflamatoria pélvica, embarazo ectópico e infertilidad. Objetivo: determinar la prevalencia de C. trachomatis en mujeres de población abierta que acuden al Hospital General de Zona No. 29. Material y métodos: se realizó la identificación de C. trachomatis por pruebas de PCR a 200 muestras de exudado vaginal y se determinó su genotipo. Paralelamente, se realizó el diagnóstico microbiológico de rutina. Resultados: la prevalencia de C. trachomatis fue del 8.5% (17/200) con una concomitancia significativa de p = 0.006 con Gardnerella vaginalis (riesgo relativo de 2.871, IC95%: 1.574-5.236). Asimismo, se identificó C. trachomatis en cinco muestras como el único agente etiológico. Dieciséis cepas de C. trachomatis pertenecieron al genotipo F. Una cepa identificada de C. trachomatis presentó motivos genéticos similares a la variante mexicana reportada en 2019. Conclusiones: la prevalencia de C. trachomatis en la población estudiada nos indica la necesidad de implementar técnicas de diagnóstico para esta bacteria. El uso de la PCR permite realizar una determinación genotípica rápida, que explicaría el comportamiento epidemiológico de la C. trachomatis y representaría una mejora significativa de la calidad de vida de la paciente.

Background: Chlamydia trachomatis is the main cause of sexually transmitted bacterial infections worldwide. An estimated of 131 million cases occur each year. It is asymptomatic, but ascending infection in women can lead to pelvic inflammatory disease, ectopic pregnancy, and infertility. Objective: To determine the prevalence of C. trachomatis in open population women who attend the Hospital General de Zona No. 29. Material and methods: Identification of C. trachomatis was carried out by PCR testing of 200 vaginal exudate samples and its genotype was determined. In parallel, a routine microbiological diagnosis was carried out. Results: The prevalence of C. trachomatis was 8.5% (17/200) with a significant concomitance of p = 0.006 with Gardnerella vaginalis (relative risk of 2.871, 95%CI: 1.574- 5.236). Likewise, C. trachomatis was identified in 5 samples as the only etiological agent. Sixteen strains of C. trachomatis belong to genotype F. An identified strain of C. trachomatis presented genetic motifs similar to the Mexican variant repor- ted in 2019. Conclusions: The prevalence of C. trachomatis in the studied population indicates the need to implement diagnostic techniques for this bacterium. The use of PCR allows a rapid genotypic determination that would explain the epidemiological behavior of C. trachomatis and would represent a sig- nificant improvement in the quality of life of the patient.

Detección atípica de Chlamydia pneumoniae no humana en una muestra endocervical. Reporte de caso / Atypical detection of non-human Chlamydia pneumoniae in an endocervical sample. Case Report

Resumen ANTECEDENTES: Chlamydia trachomatis es uno de los principales microorganismos de trasmisión sexual asociado de manera importante con infertilidad femenina. La detección de genotipos y nuevas variantes de Chlamydia trachomatis permite conocer su prevalencia, distribución geográfica, identificar la aparición de resistencia antimicrobiana y las asociaciones clínicas o comportamientos sexuales y desarrollar vacunas. Este caso clínico es el primer informe de infección endocervical por una cepa diferente a C trachomatis. CASO CLÍNICO: Paciente de 25 años, con diagnóstico de infertilidad primaria de 2 años de evolución por factor endocrino-ovárico (sobrepeso e hipotiroidismo subclínico) y por factor masculino de hipospermia y teratozoospermia. El cultivo microbiológico endocervical detectó la infección por Ureaplasma spp y Chlamydia spp. La identificación de la cepa de Chlamydia mediante secuenciación del gen 16S del ARNr informó que era Chlamydia pneumoniae. La existencia de un plásmido en esta cepa de C pneumoniae confirmó que la infección endocervical fue por una cepa de Chlamydia pneumoniae no humana. CONCLUSIÓN: Este caso clínico sugiere la posibilidad de que una cepa de C pneumoniae no humana sea capaz de trasmitirse sexualmente a los humanos, estar circulando en la población mexicana y causar infertilidad, aunque aún se desconocen el origen y la dirección de la trasmisión.

Abstract BACKGROUND: Chlamydia trachomatis is one of the leading sexually transmitted microorganisms that is significantly associated with the development of female infertility. The detection of genotypes and new variants ofChlamydia trachomatisallows us to know their prevalence and geographic distribution, identify the appearance of antimicrobial resistance, clinical associations, or sexual behaviors, and develop vaccines. This clinical case reports for the first time endocervical infection by a strain other thanC. trachomatis. CLINICAL CASE: A 25-year-old woman with primary infertility of 2 years of evolution due to endocrine-ovarian factor (overweight and subclinical hypothyroidism) and male factor characterized by hypospermia and teratozoospermia. Endocervical microbiological culture detected infection byUreaplasma urealyticumandChlamydiaspp. Identification of theChlamydiastrain by sequencing the 16S rRNA gene reported that it wasChlamydia pneumoniae. The presence of plasmid in this strain ofC. pneumoniaeconfirmed that the endocervical infection was by a non-humanChlamydia pneumoniaestrain. CONCLUSION: This clinical case suggests that a non-human strain ofC. pneumoniaecan be sexually transmitted to humans, circulating in the Mexican population, and causing infertility, although the origin and direction of transmission are still unknown.

Prevalencia de la infección genital por Chlamydia trachomatis en mujeres que asisten al Instituto Nacional de Perinatología de la Ciudad de México / Prevalence of genital Chlamydia trachomatis infection in women attending in the National Institute of Perinatology from Mexico City

Resumen Introducción: La infección endocervical por Chlamydia trachomatis es considerada una de las principales causas de infertilidad en todo el mundo. Durante el embarazo puede conducir a complicaciones graves como la ruptura prematura de membranas y los partos prematuros. Objetivo: Determinar la prevalencia de infección genital por C. trachomatis en mujeres embarazadas e infértiles de la Ciudad de México. Métodos: La detección de C. trachomatis fue mediante reacción de polimerasa en cadena tiempo real (RPC-TR) con el kit comercial COBAS® TaqMan CT Test v2,0 (Roche Molecular System). Resultados: Se analizaron 2.352 muestras; 102 fueron positivas (4,3%). La prevalencia por edad mostró que las adolescentes embarazadas (15 a 19 años) fueron las de mayor riesgo de infección (10,9%, RR = 3,23 [IC 95%: 1,79-5,84]), seguido de mujeres jóvenes de 20 a 24 años, con prevalencia de 5,6% (RR = 1,65 [IC 95%: 0,82-3,34]). Discusión: Los resultados indican que la prevalencia está dentro del rango reportado en el concierto mundial. Sin embargo, las adolescentes embarazadas tuvieron mayor prevalencia que las mujeres infértiles. Conclusión: Es imperioso realizar un rastreo sistemático de infección por C. trachomatis en mujeres bajo 24 años de edad, y en mujeres embarazadas para disminuir los casos de infertilidad y las complicaciones perinatales.

Background: Endocervical infection by Chlamydia trachomatis is considered one of the leading causes of infertility worldwide. During pregnancy, it can lead to serious complications such as premature rupture of membranes and premature births. Aim: To determine the prevalence of genital infection by C. trachomatis in pregnancy and infertile women from Mexico City. Methods: The detection of C. trachomatis was performed by real-time PCR with the commercial kit COBAS® TaqMan CT Test v2.0 (Roche Molecular System). Results: We analyzed 2,352 endocervical swabs; 102 were positive (4.3%). Age prevalence showed that pregnant adolescents (15 to 19 years of age) had the highest risk of infection (10.9%, RR = 3.23 [95% IC: 1.79-5.84]), followed by young women aged 20 to 24 years, with a prevalence of 5.6% (RR = 1.65 [95% IC: 0.82-3.34]). Discussion: The results indicate that the prevalence is within the range reported worldwide. However, pregnant adolescents were those with a higher prevalence than infertile women were. Conclusion: A systematic screening of C. trachomatis infection in women younger than 24 years of age, and in pregnant women is necessary to reduce the incidence of infertility and perinatal complications.

Reporting detection of Chlamydia trachomatis DNA in tissues of neonatal death cases / Relato de detecção de DNA de Chlamydia trachomatis em tecidos de casos de óbito neonatal

OBJECTIVE: to determine whether C. trachomatis was present in neonates with infection, but without an isolated pathogen, who died during the first week of life. METHODS: early neonatal death cases whose causes of death had been previously adjudicated by the institutional mortality committee were randomly selected. End-point and real-time polymerase chain reaction of the C. trachomatis omp1 gene was used to blindly identify the presence of chlamydial DNA in the paraffinized samples of five organs (from authorized autopsies) of each of the dead neonates. Additionally, differential diagnoses were conducted by amplifying a fragment of the 16S rRNA of Mycoplasma spp. RESULTS: in five cases (35.7%), C. trachomatis DNA was found in one or more organs. Severe neonatal infection was present in three cases; one of them corresponded to genotype D of C. trachomatis. Interestingly, another case fulfilled the same criteria but had a positive polymerase chain reaction for Mycoplasma hominis, a pathogen known to produce sepsis in newborns. CONCLUSION: the use of molecular biology techniques in these cases of early infant mortality demonstrated that C. trachomatis could play a role in the development of severe infection and in early neonatal death, similarly to that observed with Mycoplasma hominis. Further study is required to determine the pathogenesis of this perinatal infection. .

OBJETIVO: determinar se a C. trachomatis está presente em neonatos com infecção, porém sem patógeno isolado, que morreram durante a primeira semana de vida. MÉTODOS: casos de óbito neonatal precoce cujas causas de óbito haviam sido anteriormente determinadas pelo Comitê de Mortalidade da instituição foram aleatoriamente selecionados. Foram utilizadas as reações em cadeia da polimerase convencional e em tempo real do gene omp1 da C. trachomatis, para identificar, às cegas, a presença de DNA de clamídia nas amostras desparafinizadas de cinco órgãos (de autópsias autorizadas) de cada um dos neonatos mortos. Além disso, foram realizados diagnósticos diferenciais por amplificação de um fragmento do rRNA 16S de Mycoplasma ssp. RESULTADOS: em cinco casos (35,7%) a presença de DNA de C. trachomatis foi detectada em um ou mais órgãos. Havia infecção neonatal grave em três casos; um deles correspondente ao genótipo D de C. trachomatis. Curiosamente, outro caso preencheu os mesmos critérios, porém possuía uma reação em cadeia da polimerase positiva para Mycoplasma hominis, um patógeno conhecido por causar sepse em recém-nascidos. CONCLUSÃO: a utilização de técnicas de biologia molecular nos casos de mortalidade infantil precoce mostrou que a C. trachomatis poderia desempenhar um papel no desenvolvimento de infecção grave e no óbito neonatal precoce semelhante ao observado com a Mycoplasma hominis. São necessários estudos adicionais para determinar a patogênese dessa infecção perinatal. .

Factores clínicos-patológicos en cáncer de mama: relación con metástasis en ganglios no centinelas: axilares cuando el centinela es positivo / Clinic pathologic factors in breast cancer: associated with involment in no sentinel: axillaries nodes when the sentinel node is positive

Analizar factores clínico-patológicos en pacientes con biopsia del ganglio centinela positiva, para predecir afectación de ganglios no centinelas, y omitir la disección axilar. Datos de todas las pacientes con diagnóstico de carcinoma infiltrante de la mama entre año 2000 y abril de 2010, sometidas a biopsia ganglio centinela. Se excluyeron las que recibieron neoadyuvancia quedando 219 pacientes. En aquellas con biopsia positiva se estableció relación entre factores clínico-patológicos evaluados y presencia de ganglios no centinelas positivos en disección axilar, utilizando análisis univariable conprueba de Chi cuadrado de Pearson y multivariable através de modelo de regresión logística. Positiva (20%). Se encontraron ganglios no centinelas positivos en 22 (50%). En el análisis univariable grado nuclear III, presencia de invasión linfovascular y número de ganglios centinelas positivos (2 o más) se asociaron a enfermedad axilar residual. Solo la presencia de invasión linfovascular fue predictor independiente de metástasis en ganglios no centinelas. Presencia de invasión linfovascular aumenta significativamente posibilidad de enfermedad axilar residual luego de biopsia ganglio centinela positiva. La presencia de enfermedad adicional luego de biopsia positiva es considerable (50%). No pudimos establecer ningún grupo de factores que proporcionara un punto de corte para omitir la disección axilar. A pesar de la evidencia analizada del posible control de la enfermedad residual axilar por parte de la quimioterapia y la radioterapia, toda paciente con biopsia positiva de ganglio centinela debe ser sometida a disección axilar.

Our aim was to determine which clinic pathologic factors can predict involve of non sentinel lymph nodes when the sentinel lymph node biopsy is positive, soto omit the axillaries lymph node dissection. The data of all patients with invasive breast carcinoma, between 2000 and April 2010, who underwent (271), was reviewed. We excluded the patients who received neo adjuvant therapy, remaining 219 patients. Univariate (Chi square test), and multivariate analysis in a logistical regression model was used to establish the association within some clinic pathologic factors and involve of non sentinel nodes in the group of patients with positive. Positive sentinel was found in 44 patients (20%). Non sentinel positive lymph nodes were recorded in 22 (50%). Nuclear grade III, lymph vascular invasion and number of positive sentinel nodes (2 or more) were associated with residual axillaries disease in the univariate analysis. In the multivariate analysis only lymph vascular invasion was an independent predictor of metastases in non sentinel lymph nodes. Lymph vascular invasion enhances the chance of axillaries residual disease in patients with positive biopsy. The residual disease after positive biopsy is significant (50%). We can´t find a group of factors that could help to decide in which patients we can omit the axillaries dissection. There is some evidence that chemotherapy and radiotherapy can control axillaries residual disease. Even in this context all patients with positive sentinel biopsy must undergo axillaries dissection.

Grupos de hipertensos e diabéticos inovando a cada dia / Hypertensive and diabetic groups innovating day-by-day

As doenças cardiovasculares representam a quinta causa de óbito em todo o mundo. No Brasil, såo responsáveis por 300 mil mortes por ano, ou 820 por dia, números que já nos fornecem subsídios para afirmar que se trata de uma epidemia. Segundo boletins informativos do Ministério da Saúde, as três doenças que mais matam no Brasil såo: o infarto do miocárdio, os acidentes vasculares encefálicos e a insuficiência cardíaca. A mortalidade por cardiomiopatias é determinada, em forte intensidade, pela hipertensåo arterial sistêmica, fato que geralmente nåo é mencionado como causa nos atestados de óbito, sendo atribuído, entåo, às seqüelas de insuficiência cardíaca ou aos acidentes vasculares encefálicos.

Prevençåo de câncer cérvico-uterino: buscando um atendimento de excelência / Uterine-cervical cancer prevention: searching for excellence in assistance

O câncer invasor do colo uterino continua sendo o segundo tipo mais freqüente entre as mulheres de todo o mundo e o mais comun em países em desenvolvimento. No Brasil, é a neoplasia maligna que mais acomete o trato genital feminino, apresentando as seguintes estimativas nacionais, no ano de 2003, para cada 100 mil mulheres: 18,3 por cento de incidência e 4,6 por cento mortalidade. Em Pernambuco, esses índices chegaram a 22,3 por cento e 5,52 por cento respectivamente, constituindo-se um grande problema de saúde pública. A prevençåo do câncer de colo de útero tem sido objeto de açåo de profissionais de saúde e cientistas há, pelo menos, duas décadas. No entanto, principalmente no Nordeste do Brasil, estamos longe de perder a liderança nas estatísticas de mortalidade por ese tipo de câncer. Tal quadro se deve, em parte, à ineficiência de estratégias de controle da enfermidade. Muitas mulheres ainda nåo realizam a citologia cérvico-uterina anualmente, e há várias razões para isso: acesso limitado aos serviços de saúde, experiências negativas com profissionais de saúde, medo da opiniåo ou reaçåo do companheiro e priorizaçåo da saúde da família em detrimento da de si própria. Além disso, os serviços de saúde nåo fazem a busca ativa das mulheres cujos exames apresentam alterações; mesmo quando eståo com o resultado na måo, elas nåo têm garantias de que o tratamento será feito. Visando avaliar e melhorar as práticas de promoçåo à saúde da mulher, as Equipes de Saúde da Família (ESF) Jardim Primavera I e II rediscutiram o fluxo de atendimento para coleta do exame preventivo de colo uterino.

Sexualidade com responsabilidade: superando barreiras / Sexuality with responsability: overcoming barriers

O ser humano tem como maior aspiraçåo a busca pelo prazer, a qual varia de pessoa para pessoa e recebe decisiva influência da história pessoal e social de cada uma. A adolescência é um período de transiçåo entre a infância e a vida adulta, no qual ocorrem, além de modificações hormonais importantes - que resultam em transformações físicas -, mudanças psicológicas e sociais. Trata-se de um momento ímpar em que tantos se adquire como se fornece informações corretas que influiråo nas escolhas mais seguras. Abordar sexualidade, seja em qualquer faixa etária, é tarefa árdua aos grupos que se propõem. Isso se torna um pouco mais difícil quando a escolha recai em discutir com adolescentes nåo só o autoconhecimento do corpo, suas reações e seus sentimentos, como também, a responsabilidade e a influência que os seus atos, certamente, teråo sobre o futuro.

Detección de patologías anorectales en pacientes asintomáticos mayores de 40 años / Anorectal pathologies detection in asymptomatic patients above 40 year old

Se seleccionaron 70 pacientes al azar, en el Hospital Dr. Salvador B. Gautier del Instituto Dominicano de Seguros Sociales, Santo Domingo, República Dominicana. Se les realizó tacto rectal y sigmoidoscopía a cada uno de los pacientes, se encontró con relación al tacto rectal 70 por ciento el esfinter anal era autónico; en 4.29 por ciento se detectaron masas móviles; y 8.5 por ciento refería dolor al tacto rectal. Rectosigmoidoscopía: Color mucosa normal 98.5 por ciento vascularidad normal en todos casos. Se detectaron colitis inespecíficas y colitis ulcerativa