ABSTRACT
As micoses endêmicas podem ser um desafio com relação ao diagnóstico e a interpretação acurada dos dados laboratoriais é importante para garantir um tratamento mais apropriado para os pacientes. Embora o diagnóstico definitivo da histoplasmose (HP), uma das micoses endêmicas no mundo, seja determinado pelo exame direto com a observação de micro e macroconídeos do Histoplasma capsulatum (H. capsulatum), evidências sorológicas da infecção fúngica se torna importante uma vez que o isolamento dos agentes etiológicos é um procedimento demorado e com baixa sensibilidade. Uma variedade de imunoensaios tem sido usada para detectar anticorpos específicos contra o H. capsulatum. A técnica mais aplicada para a detecção de anticorpos é a imunodifusão, apresentando uma sensibilidade entre 70 a 100 por cento e especificidade de dependendo da forma clínica. A fixação de complemento (CF), uma metodologia que foi extensivamente usada no passado, apresenta uma menor especificidade (60 to 90 por cento). A detecção de antígenos fúngicos pelos imunoensaios é valiosa para indivíduos imunocomprometidos onde cada ensaio garante valores preditivos positivos variando de 96-98 por cento. A maioria dos testes atual ainda utiliza antígenos complexos não-purificados obtidos de parede celular fúngica ou filtrados de cultura. Contudo, importância tem sido dada a imunoensaios clínicos utilizando antígenos altamente purificados e caracterizados, incluindo antígenos recombinantes. Neste manuscrito, nós revisamos as ferramentas atuais utilizadas no diagnóstico, como fixação de complemento e imunodifusão, sumarizando o desenvolvimento de novas tecnologias, reagentes e métodos, e discutiremos aqui os seus méritos relativos e desvantagens no imunodiagnóstico desta micose.
Subject(s)
Clinical Laboratory Techniques , Histoplasma , Histoplasmosis , Mycoses , Serology , Culture Media , Methods , MethodsABSTRACT
A histoplasmose é causada pelo fungo dimórfico Histoplasma capsulatum. A infecção por este organismo é frequentemente diagnosticada pela determinação de anticorpos para a proteína M, imunodominante, mas o papel deste antígeno na patogênese da histoplasmose ainda permanece obscuro. A função do antígeno M não é conhecida, mas geneticamente é homóloga a catalases fúngicas. Em nosso estudo, nós procuramos determinar regiões imunodominantes do antígeno M, produzir um painel de anticorpos monoclonais contra esta proteína, caracterizá-los, usá-los para o mapeamento de epítopos, mostrar a localização do antígeno M na levedura do H. capsulatum, demonstrar a atividade de catalase desta proteína e desenvolver imunoensaios para a detecção de anticorpos contra esta proteína e antígeno M circulante nos fluidos corporais. Foi possível determinar peptídeos com maior atividade antigênica e suas localizações na molécula e caracterizá-los de acordo com as suas propriedades bioquímicas. Nós geramos três fragmentos que continham estes peptídeos e os utilizamos para avaliar a ligação dos anticorpos monoclonais e reconhecimento a cada fragmento separadamente. Um dos fragmentos, F3, mostrou maior ligação aos anticorpos monoclonais que os outros avaliados, entretanto estudos adicionais devem ser avaliados para um complete mapeamento. Para avaliar o papel do antígeno M na patogênese da histoplasmose, usando análise por imunoblot de um extrato de parede celular e membrana (CW/M) obtido de levedura, provamos que os mAbs gerados contra o antígeno M recombinante puderam reconhecer este antígeno no extrato utilizado...