Induction and growth pattern of callus from Piper permucronatum leaves / Indução e padrão de crescimento de calos de folhas de Piper permucronatum

ABSTRACT Piper permucronatum is a perennial shrub, a medicinal plant native to the Amazon Rainforest. Traditionally, the tea of its leaves is used to combat menstrual and intestinal cramps, stomach pain, digestive problems, diarrhea, hemorrhage, and nausea. Its leaf’s essential oil is effective against Aedes aegypti larvae; its flavones and flavanones have a fungicidal effect against Clamidosporium cladosporioides and C. sphaerospermum; its hexanic extract is effective against Leishmania amazonensis. The objective of this study was to provide a protocol for callus induction from P. permucronatum leaves and an identification of the callus growth pattern, focusing on the deceleration phase, when the callus cells must be subcultured into liquid medium in order to produce a cell suspension cultures. Leaf explants were inoculated in a solid MS medium supplemented with factorial combinations of 2,4-D, BA, NAA and GA3. Callus formation was evaluated weekly until the 49th day. Subsequently, new explants were inoculated at the hormonal combination that resulted in the highest callus cell proliferation and, every seven days during a period of 70 days, samples were dried and weighed to determine the callus growth pattern. NAA and GA3 were not effective for callus induction. Combinations of 2,4-D and BA resulted in callus induction and proliferation. The highest percentage of callus induction was observed with the combination of 4.52 µM 2,4-D and 4.44 µM BA. The calluses thereby produced were friable and whitish. The callus growth pattern followed a sigmoid shape. The deceleration phase started on the 56th day of culture.

RESUMO Indução e padrão de crescimento de calos de folhas de Piper permucronatum. Piper permucronatum é um arbusto perene, uma planta medicinal native da Floresta Amazônica. Tradicionalmente, o chá de suas folhas é usado em casos de cólicas menstruais e intestinais, dores de estômago, problemas digestivos, diarreia, hemorragia e náusea. O óleo essencial das folhas é efetivo contra a larva de Aedes aegypti; suas flavonas e flavanonas têm efeito fungicida contra Clamidosporium cladosporioides e C. sphaerospermum; seu extrato hexânico é efetivo contra Leishmania amazonensis. O objetivo deste trabalho foi determinar um protocolo para indução de calos em folhas de P. permucronatum e identificar o padrão de crescimento dos calos, com foco na fase de desaceleração, quando as células de calo devem ser subcultivadas em meio líquido para produzir culturas de células em suspensão. Explantes foliares foram inoculados em meio MS sólido suplementado com combinações fatoriais de 2,4-D, BAP, ANA e GA3. A formação de calos foi avaliada semanalmente até o 49º dia. Posteriormente, novos explantes foram inoculados na combinação hormonal que resultou na maior proliferação de células de calo e, a cada sete dias durante 70 dias, amostras foram secas e pesadas para determinar o padrão de crescimento dos calos. ANA e GA3 não foram efetivas para a indução de calos. Combinações de 2,4-D e BAP resultaram em indução e proliferação de calos. A maior porcentagem de indução de calos foi observada com a combinação de 4,52 µM de 2,4-D e 4,44 µM de BAP. Os calos produzidos eram friáveis e esbranquiçados. O crescimento dos calos seguiu um padrão sigmoide. A fase de desaceleração iniciou no 56º dia de cultivo.

Callogenesis in leaves of Kalanchoe pinnata Lam. by 2, 4-D and BA action / Calogênese em folhas de Kalanchoe pinnata Lam. pela ação de 2, 4-D e BAP

The Kalanchoe pinnata Lam. is a bush species of the Crassulaceae that is distinguished by its important medicinal properties. Its leaves are used as cataplasm to treat headaches and wounds. There is evidence for a hypotensive and anti-inflammatory effect. Techniques of plant tissue culture have been applied to plant species that produce substances likely to be explored in pharmacology, cell suspension being the main technique. At the industrial level, this method utilizes bioreactors in order to produce secondary metabolites on a large scale. The objective of this study was to evaluate the effects of in vitro combinations of 2,4-dichlorophenoxiacetic acid (2,4-D) and benzylaminopurine (BA) on callus induction in leaf explants of K. pinnata. Leaf fragments were inoculated in MS medium supplemented with 3.0% sucrose, 0.8% agar and factorial combinations of 2,4-D (0.00, 4.52, 9.06, 18.12 µM) and BA (0.00, 4.44, 8.88, 17.76 µM). The cultures were kept in the darkness at 24±2ºC for 50 days. The percentage of callus induction and the area of explants covered by callus cells were evaluated. In the absence of growth regulators, callus induction did not occur, with necrosis of all explants. The highest percentage of callus induction was 100%, obtained with the combination of 9.06 µM 2,4-D and 8.88 µM BA, but the calluses covered only 25% of the leaf area. The most efficient combination was 4.52 µM 2,4-D and 8.88 µM BA, resulting in 91% callus induction with 50 to 100% of the explants being covered by callus cells.

Kalanchoe pinnata Lam. é uma espécie arbustiva da família Crassulaceae que apresenta interessantes propriedades medicinais. Suas folhas são utilizadas em cataplasma para tratar enxaqueca e ferimentos. Há evidência de seu efeito como hipotensiva e anti-inflamatória. Técnicas de cultura de tecidos vegetais têm sido aplicadas para espécies que possuem substâncias passíveis de exploração na farmacologia, sendo a suspensão celular a principal técnica utilizada. A nível industrial, este método utiliza biorreatores para produzir metabólitos secundários em larga escala. Este estudo teve como objetivo avaliar os efeitos in vitro de combinações do ácido 2,4-diclorofenoxiacético (2,4-D) e de benzilaminopurina (BAP) na indução de calos em explantes foliares de K. pinnata. Fragmentos foliares foram inoculados em meio MS contendo 3% de sacarose, 0,8% de ágar e combinações fatoriais de 2,4-D (0,00; 4,52; 9,06 e 18,12 µM) e BAP (0,00; 4,44; 8,88 e 17,76 µM). Os cultivos foram mantidos no escuro, a 24±2ºC por 50 dias. A porcentagem de indução de calos e a área dos explantes coberta por células de calos foram avaliadas. Na ausência de reguladores de crescimento não ocorreu indução de calos, com necrose de todos os explantes. A porcentagem mais alta de indução de calos foi de 100%, obtida com a combinação de 9,06 µM de 2,4-D e 8,88 µM de BAP, mas estes calos cobriram apenas 25% da área foliar. A combinação mais eficiente foi de 9,06 µM de 2,4-D e 8,88 µM de BAP, que resultou em 91% de indução e 50 a 100% da área dos explantes coberta por células de calos.

Evaluation of Leishmania antigens preparation and storage for use in enzyme immunoassays

The influence of time and temperature on the storage of an alkaline antigen of L. major-like and L.(V.) braziliensis promastigotes added or not of a proteases inhibitor (PMSF) was evaluated by means of an IgG-ELISA. Antibodies in assays using L. major-like antigen stored at -20 degrees C for 6 months had a statistically lower geometric mean titer (GMT) and different 95% confidence interval limits (CL) than antigens stored otherwise, as assessed by the [quot ]t[quot ] statistic. The PMSFL. major-like antigen after storage for 6 months at a temperature of 4 degrees C had the same GMT and 95% CL displayed at time zero as well as when storage for 4 and 6 months at -20 degrees C. Significant differences were not found when L.(V.) braziliensis antigens were stored at times and temperatures mentioned; the PMSF antigen stored for 2 months at -70 degrees C resulted in a lower serum GMT and 95% CL than any other, as assessed by the [quot ]t[quot ] statistic. Antigen performance did not show any statistical difference associated to the addition of PMSF within the same species; the largest difference between antigens was that between PMSF-L. (V.) braziliensis and L. major-like without PMSF.

A influência do tempo e temperatura de estocagem de antígenos alcalinos de promastigotas de L. major-like e L. (V.) braziliensis adicionados ou não de um inibidor de proteases foi avaliada por meio de reações de IgG-ELISA. A reação que empregava o antígeno de L. major-like estocado por 6 meses a -20oC mostrou que médias geométricas dos títulos (MGT)e intervalos de confiança 95% (IC 95%) eram estatisticamente inferiores àquelas obtidas com antígenos estocados em outros intervalos de tempo, medido pela estatística "t". O antígeno PMSF-L. major-like depois de 6 meses de estocagem à temperatura de 4oC tinha a mesma MGT e IC 95% do tempo zero assim como quando ele foi estocado a -20oC por 4 e 6 meses. Não foram observadas diferenças estatisticamente diferentes com os antígenos de L. (V.) braziliensis estocados nas mesmas condições de tempo e temperatura exceto o antígeno PMSF estocado por 2 meses a -70oC que apresentou MGT e IC 95% inferiores a quaisquer outras como aferido pela estatísitca "t". Quando comparados os desempenhos dos antígenos não houve direrenças estatisticamente significantes entre a adição ou não de PMSF para qualquer dos parasitas. A análise do cruzamento entre antígenos mostrou que a maior diferença netre eles foi a do contraste entre L. (V.) braziliensis adicionado de PMSF e L. major-like sem adição de PMSF.

Rendimiento diagnostico de la inmunodeficiencia y el ensayo inmunoenzimatico en sueros de pacientes con leishmaniasis del norte y del nordeste de Brasil / Diagnostic performance índices for immunofluorescent tests and enzyme immunoassays of leishmaniasis sera from northern and northeastern Brazil

Se examino un total de 341 muestras de suero para detectar anticuerpos IgA, IgG e IgM anti-Leishmania mediante pruebas de inmunofluorescencia (IF) y ensayos inmunoenzimaticos (ELISA). En conjunto, 292 de los sueros pertenecian a pacientes con diagnosticos clinicos y parasitologicos de leishmaniasis cutanea (resultados positivos en la impronta de lesiones o en la prueba cutanea de Montenegro) y 49, a controles de la misma poblacion. Los índices de rendimiento diagnostico de los ELISA-IgG e IgM fueron de utilidad diagnostica y el valor predictivo positivo del ELISA-IgG fue de 94,6. . La especificidad de la prueba de IF-IgA fue notablemente alta (100. ), pero su sensibilidad fue muy baja