Cryptosporidium occurrence in ruminants from the North Pioneer mesoregion of Paraná, Brazil / Ocorrência de Cryptosporidium em ruminantes da mesorregião norte pioneiro do Estado do Paraná, Brasil

Abstract The aim of this study was to investigate the occurrence of Cryptosporidium in cattle and sheep from the North Pioneer mesoregion of the state of Paraná. For this, 317 stool samples were collected from cattle and sheep on 16 properties in six municipalities in the North Pioneer mesoregion of Paraná. For detection of Cryptosporidium species, molecular analysis was performed using nested-PCR techniques targeting the 18S rRNA gene. Of the 37 beef cows and 115 calves analyzed, four (10.8%) and 14 (12.2%), respectively, were positive for Cryptosporidium. Of the 12 cows and 52 calves, one (8.3%) and 14 (26.9%), respectively, were positive for Cryptosporidium; and of the 42 ewes and 59 lambs, six (14.3%) and 12 (20.3%), respectively were positive for Cryptosporidium. Cattle (15.3%) and sheep (17.8%) were both susceptible to infection. All the properties of the municipalities of Assaí, Ibaiti and, Leópolis presented infected animals. The study showed that Cryptosporidium occurs in most municipalities assessed, that dairy calves had a higher risk (Odds Ratio=2,66, p-value=0,018) for infection than beef calves, and that sheep are just as susceptible to infection as are cattle, and that further Cryptosporidium studies are developed.

Resumo O objetivo deste estudo foi investigar a ocorrência de Cryptosporidium em bovinos e ovinos da mesorregião norte pioneiro do Estado do Paraná. Para tanto, 317 amostras de fezes destes ruminantes foram colhidas de 16 propriedades de seis municípios do Norte Pioneiro do Paraná. Para detecção de Cryptosporidium spp foi realizada análise molecular pela Técnica de nested-PCR direcionada ao gene 18S rRNA. Das 37 vacas de corte e 115 bezerros de corte analisados, quatro (10,8%) e 14 (12,2%) foram respectivamente positivos para Cryptosporidium . Das 12 vacas e 52 bezerros de leite, um (8,3%) e 14 (26,9%) foram positivos para Cryptosporidium e das 42 ovelhas e 59 cordeiros avaliados, seis (14,3%) e 12 (20,3%) amostras estavam positivas para Cryptosporidium, respectivamente. Bovinos (15,3%) e ovinos (17,8%) foram igualmente suscetíveis à infecção. Todas as propriedades dos municípios de Assaí, Ibaiti e Leópolis apresentaram animais infectados. Este estudo demonstrou que Cryptosporidium ocorre na maioria dos municípios avaliados, sendo que os bezerros de leite apresentam maior risco (Razão de chances=2,66, p-value=0,018) à infecção que os bezerros de corte e que os ovinos são tão suscetíveis à infecção quanto os bovinos e por isso, estudos nesta espécie animal devem ser mais desenvolvidos.

Endoparasites in domestic animals surrounding an Atlantic Forest remnant, in São Paulo State, Brazil / Endoparasitas em animais domésticos que vivem ao redor de uma reserva florestal, no Estado de São Paulo, Brasil

Abstract Morro do Diabo State Park (MDSP) is a significant remnant of the Atlantic Rain Forest in Brazil and is surrounded by rural properties. In that area, wild and domestic animals and humans are in close contact, which facilitates the two-way flow of infectious diseases among them. We assessed endoparasites in domestic livestock from all rural properties surrounding MDSP. There were sampled 197 cattle, 37 horses, 11 sheep, 25 swine, 21 dogs, one cat and 62 groups of chickens from 10 large private properties and 75 rural settlements. Eimeria spp. was present in almost all hosts, excepted in horses, dogs and cats. Giardia cysts were present only in cattle. Nematodes were found in swine, ruminants and horses in high prevalence. Ancylostoma, Toxocara and Sarcocystis were found in dogs. Chickens were found with coccidia, Ascaridida and Capillaria spp.. These parasites can cause malnutrition and reproductive disorders for their hosts. Strategies to prevent and control the spread of endoparasites can improve wildlife, animal and human health in this area.

Resumo O Parque Estadual Morro do diabo (PEMD) é um significante remanescente de Mata Atlântica no Brasil, e rodeado de propriedades rurais. Nesta área humanos, animais domésticos e silvestres vivem próximos, o que facilita o fluxo de agentes infecciosas entre eles. Nós avaliamos a presença de endoparasitas, por meio de exame coproparasitológico dos animais domésticos de todas as propriedades rurais do entorno do PEMD. Foram amostrados 197 bovinos, 37 equinos, 11 ovinos, 25 suínos, 62 grupos de galinhas, 22 cães e 1 gato, residentes em 10 grandes propriedades privadas e 75 assentamentos rurais. Eimeria spp. estava presente em quase todas as espécies hospedeiras, com excessão de equinos, cães e gatos. Cistos de Giardia estavam presentes somente em bovinos. Nematodes foram encontrados em suínos, ruminantes e equinos em alta prevalência. Ancylostoma, Toxocara e Sarcocystis foram encontrados em cães. Galinhas foram encontradas com coccidia, Ascaridida e Capillaria spp.. Os parasitas encontrados podem causar má nutrição e problemas reprodutivos para seus hospedeiros. Medidas de prevenção e controle da dispersão de endoparasitas podem melhorar a condição de saúde pública, animal e ambiental nesta área.

Anthelmintic efficiency of doramectin, fenbendazole, and nitroxynil, in combination or individually, in sheep worm control / Eficiência anti-helmíntica da doramectina, fenbendazole e nitroxinil, associados ou utilizados individualmente, no controle da verminose ovina

Abstract The anthelmintic efficiency of doramectin, fenbendazole, and nitroxynil, used individually or in combination, was determined by the Fecal Egg Count Reduction (FECR) test and cultivation of larvae of anthelminthic-treated sheep grouped as follows: G1 (doramectin), G2 (fenbendazole), G3 (nitroxynil), G4 (doramectin + fenbendazole), G5 (doramectin + nitroxynil), G6 (fenbendazole + nitroxynil), G7 (doramectin + nitroxynil + fenbendazole), G8 (untreated). In addition to individually used doramectin and fenbendazole, the helminths were also resistant to the combination of doramectin + fenbendazole; nitroxynil + fenbendazole; and doramectin + nitroxynil + fenbendazole, with their FECR rates ranging from 62-83%. The helminths showed possible nitroxynil-resistance, but had low resistance when the drug was administered in combination with doramectin. The evaluation of individual helminth species revealed that fenbendazole was fully effective against Cooperia; doramectin (G1), moderately effective against Haemonchus and insufficiently active against Cooperia; nitroxynil, effective against Haemonchus and insufficiently active against Cooperia. It was concluded from the results that herd nematodes are resistant to doramectin, fenbendazole, and nitroxynil, and that the combined use of the drugs not only fails to significantly improve the anthelmintic efficiency against Haemonchus and Cooperia, but is also cost-ineffective.

Resumo Eficiências da doramectina, fenbendazole e nitroxynil, utilizados individualmente ou associadamente, foram determinadas através do Teste de Redução na Contagem de Ovos nas Fezes (RCOF) e cultivo de larvas. Os grupos experimentais foram os seguintes: G1 (ovinos tratados com doramectina), G2 (fenbendazole), G3 (nitroxynil), G4 (doramectina + fenbendazole), G5 (doramectina + nitroxynil), G6 (fenbendazole + nitroxynil), G7 (doramectina + fenbendazole + nitroxynil) e G8, não tratados. Os helmintos foram considerados resistentes a doramectina e ao fenbendazole isoladamente e às associações doramectina + fenbendazole, fenbendazole + nitroxynil, e doramectina + fenbendazole + nitroxynil, com taxas de RCOF variando de 62-83%. Helmintos foram considerados suspeitos de resistência ao nitroxynil e apresentaram baixa resistência, quando esta droga foi associada à doramectina. Dos tratamentos isolados, o fenbendazole demonstrou total eficácia (100%) contra Cooperia. Doramectina (G1) foi moderadamente efetiva contra Haemonchus e insuficientemente ativa contra Cooperia, e o nitroxynil efetivo contra Haemonchus (93,2%) e insuficientemente ativo contra Cooperia (0%). Concluiu-se neste estudo que os nematódeos do rebanho são resistentes à doramectina, fenbendazole e nitroxynil, e que, ainda que associadas, não devem ser utilizadas no rebanho por não melhorarem a eficiência anti-helmíntica nem a efetividade contra Haemonchus e Cooperia e por não apresentarem custo-benefício justificado.

Creatine kinase serum activity in feline hyperthyroidism / Atividade sérica da creatinina quinase no hipertireoidismo felino

The aim of this study is to determine the occurrence of creatine kinase (CK) serum activity in cats with hyperthyroidism and its associations with clinical-pathological alterations and with total (TT4) and free (FT4) thyroxin. CK serum activity was evaluated in 19 cats with spontaneous hyperthyroidism, with TT4 ranging from 34.88-294.98nmol L-1 and FT4 ranging from 2.83-52.9pmol L-1 and also by serum biochemical analysis, including the activity of CK, alanine aminotransferase (ALT), alkaline phosphatase (ALP), aspartate aminotransferase (AST), gamma-glutamyl transferase (GGT), cholesterol and bile acids. The reference value for CK considered in this study was of 110-250U L-1. CK serum activity was evaluated in 19 cats with spontaneous hyperthyroidism, with TT4 ranging from 34.88-294.98nmol L-1 and FT4 ranging from 2.83-52. 9pmol L-1. Its activity CK was elevated in 47.3% of cats (≥250U L-1) and presented statistical difference (P<0.05) between cats with or without cardiac disease. CK presented weak association with all parameters in biochemical analysis. In this study, it was not possible to establish a clear association between hyperthyroidism and the increase of CK. However, it is important to highlight the inclusion of CK activity in the routine examinations for the evaluation of hyperthyroidism and for further studies to be developed.

O hipertireoidismo é uma doença endócrina comum em gatos, resultante da excessiva secreção dos hormônios tireoidianos (tiroxina-T4 e triiodotironina-T3), possui caráter multissistemico e provoca várias alterações nos parametros bioquímicos. A creatina quinase (CK) é uma enzima que tem sua atividade sérica aumentada em diversas enfermidades e, na medicina veterinária, é principalmente utilizada para avaliar lesões no músculo esquelético, músculo cardíaco e tecido hepático. O objetivo deste estudo foi determinar a ocorrência da atividade sérica da CK em gatos com hipertireoidismo e suas associações com alterações clínico-patológicas e com a tiroxina total (TT4) e livre (FT4). A atividade sérica da CK foi avaliada em 19 gatos com hipertireodismo espontâneo, com TT4 variando de 34,88-294,98nmol L-1 e FT4 variando de 2,83-52,9nmol L-1. Sua atividade estava elevada em 47,3% dos gatos (≥250U L-1) e apresentou diferença estatística (P<0,05) entre gatos com ou sem doença cardíaca. A CK apresentou associação fraca com os paramêtros bioquímicos avaliados. Neste estudo, não foi possível estabelecer uma associação clara entre o hipertireoidismo e o aumento da CK. Contudo, os resultados encontrados da atividade da CK encorajam a realização de novos estudos, para uma compreensão mais profunda da elevação da CK no hipertireoidismo.

Natural infection by endoparasites among free-living wild animals / Infecção natural por endoparasitas em animais silvestres de vida-livre

The objective of this study was to investigate the frequency of occurrence and variety of intestinal parasites among free-living wild animals. Fecal samples from wild mammals and birds at rehabilitation centers in the states of Mato Grosso do Sul and São Paulo were analyzed by sedimentation and flotation-centrifugation methods. Parasite eggs, oocysts, cysts and/or trophozoites were found in 71% of the samples. Cryptosporidium sp. oocysts were detected in fecal samples from oncillas (Leopardus tigrinus) and scaly-headed parrots (Pionus maximiliani). Giardia cysts were identified in the feces of a gray brocket (Mazama gouazoubira). Among the most common parasites found, there were eggs from Toxocara cati, Toxascaris leonina and Ancylostoma tubaeforme, and from Cestoda. Several Enterobius sp. eggs were found in the feces of red howler monkeys (Alouatta seniculus). It can be concluded from this study that despite the small number of samples, the diversity of parasites found was noteworthy. Additional information about parasite endofauna in wild animals is needed, since their presence might suggest that there could be proximity to and interactions with domestic animals and/or humans. In addition, further studies on parasites from free-living wild animals are of prime importance for understanding the intensity of anthropic changes in wild environments.

O objetivo deste trabalho foi pesquisar a frequência de ocorrência e a variedade de parasitas intestinais de animais silvestres de vida livre. Amostras de fezes de mamíferos e aves silvestres de centros de reabilitação dos Estados do Mato Grosso do Sul e São Paulo, foram analisadas pelos métodos de sedimentação e de centrífugo-flutuação. Foram encontrados ovos, oocistos, cistos e/ou trofozoítos de parasitas em 71% das amostras. Oocistos de Cryptosporidium sp. foram detectados em amostras de fezes de gato-do-mato-pequeno (Leopardus tigrinus) e maritacas (Pionus maximiliani). Cistos de Giardia foram identificados nas fezes de um veado catingueiro (Mazama gouazoubira). Entre os parasitas mais comuns, foram encontrados ovos de Toxocara cati, Toxascaris leonina e Ancylostoma tubaeforme, além de ovos de Cestoda. Vários ovos de Enterobius sp. foram encontrados nas fezes de bugio (Alouatta seniculus). Neste trabalho concluiu-se que, apesar de pequeno o número de amostras, a diversidade de parasitas encontrados foi relevante. Informações adicionais sobre a endofauna parasitária em animais silvestres são necessárias, pois podem sugerir a interação e proximidade com animais domésticos e/ou o homem. Além disso, maiores estudos sobre os parasitas de animais silvestres de vida livre são primordiais para a compreensão da intensidade de alterações antrópicas no meio silvestre.

Serologic and molecular diagnostic and bioassay in mice for detection of Toxoplasma gondii in free ranges chickens from Pantanal of Mato Grosso do Sul / Diagnóstico sorológico e molecular e bioensaio em camundongo para detecção de Toxoplasma gondii em galinhas de criação livre do Pantanal do Mato Grosso do Sul

The aim of this study was to investigate the occurrence of Toxoplasma gondii and compare the results obtained in the Modified Agglutination Test (MAT), Polimerase Chain Reaction (PCR) and bioassay in mice. In order to accomplish this, 40 free-range chickens from eight farms in neighboring areas to the Pantanal in Nhecolândia, Mato Grosso do Sul, were euthanized and blood samples, brain and heart were collected. The occurrence of anti-T. gondii antibodies found in chickens was 67.5% (27 samples), considering as a cutoff point the dilution 1:5. Among the samples analyzed, 7 (25.9%) were positive in the dilution 1:5, 3 (11.1%) in 1:10, 2 (7.4%) in 1:20, 3 (11.1%) in 1:320, 1 ( 3.7%) in 1:640, 3 (11.1%) in 1:1280, 2 (7.4%) in 1:2560, 4 (14.8%) in 1:5120 and 2 (7.4%) in 1:10.240. From the mixture of tissue samples (brain and heart) from the chickens analyzed, 16 (40%) presented electrophoretic bands compatible with T. gondii by PCR (gene B1). In the comparison of techniques, 59.26% positivity in PCR was revealed among animals that were seropositive in MAT (cutoff 1:5). From 141 inoculated mice, six (4.44%) died of acute toxoplasmosis between 15 and 23 days after inoculation. Surviving mice were sacrificed at 74 days after inoculation, and a total of 28 cysts were found in the brains of 10 distinct groups. From the seropositive hens, 27 bioassays were performed and 11 (40.7%) isolates were obtained. A greater number of isolations happened in mice that were inoculated with tissues from chickens that had high titers for anti-T. gondii antibodies. Chronic infection in mice was observed in nine groups (33.3%) from five different properties. Among the surviving mice, 25.6% were positive for T. gondii in MAT (1:25). From mice positive in PCR, 87.5% were also positive in MAT. Among the PCR-negative mice, 5.2% were positive for T. gondii in MAT. It can be concluded through this study that the occurrence of infecton by T. gondii in the rural properties studied was high, that PCR directed to gene B1 does not confirm the viability of the parasite, but it can be used as a screening method for the selection of chickens infected by T. gondii, that the animals with titer greater than 10 must be prioritized for the selection of animals for bioassay, since for them, the chances of isolating the parasite are greater and that seroconversion in experimentally infected mice is not a good indicator for isolating the agent.

Os objetivos deste estudo foram investigar a ocorrência de Toxoplasma gondii e comparar os resultados obtidos no Teste de Aglutinação Modificada (MAT), Reação em Cadeia pela Polimerase (PCR) e o bioensaio em camundongos. Para tanto, 40 galinhas de criação livre de oito fazendas em áreas limítrofes ao Pantanal da Nhecolândia, Mato Grosso do Sul, foram eutanasiadas e amostras de sangue, o cérebro e o coração foram coletados. A frequência de anticorpos anti-T. gondii encontrada nas galinhas foi de 67,5% (27 amostras), considerando como ponto de corte a diluição 1:5. Entre as amostras analisadas, 7 (25,9%) foram positivas na diluição 1:5, 3 (11,1%) em 1:10, 2 (7,4%) em 1:20, 3 (11,1%) em 1:320, 1 ( 3,7%) em 1:640, 3 (11,1%) em 1:1.280, 2 (7,4%) em 1:2.560, 4 (14,8%) em 1:5.120 e 2 (7,4%) em 1:10.240. A partir da mistura de amostras de tecidos (cérebro e coração) das galinhas analisadas, 16 (40%) apresentaram bandas eletroforéticas compatíveis com T. gondii por PCR (gene B1). Na comparação das técnicas, revelou-se 59,26% de positividade na PCR entre os animais soropositivos no MAT (ponto de corte 1:5). Dos 141 camundongos inoculados, seis (4,44%) morreram de toxoplasmose aguda entre 15 e 23 dias após a inoculação. Os camundongos que sobreviveram foram sacrificados 74 dias após a inoculação, sendo encontrados 28 cistos nos cérebros de 10 grupos distintos. Das galinhas soropositivas, foram realizados 27 bioensaios e obtidos 11 (40,7%) isolados. Um maior número de isolamentos ocorreu em camundongos que foram inoculados com tecidos de galinhas que tinham altos títulos de anticorpos anti-T. gondii. Infecção crônica em camundongos foi observada em nove grupos (33,3%) de cinco propriedades diferentes. Entre os camundongos que sobreviveram, 25,6% foram positivos para T. gondii no MAT (1:25). Dos camundongos positivos na PCR, 87,5% também foram positivos no MAT. Já entre os camundongos PCR negativos 5,2% foram positivos para T. gondii no MAT. Concluiu-se através deste estudo que a ocorrência de infecção pelo T. gondii nas propriedades rurais estudadas foi alta, que a PCR direcionada ao gene B1, não confirma a viabilidade do parasita, porém pode ser utilizada como método de triagem para a seleção de galinhas infectadas por T. gondii, que os animais com título maior que 10 devem ser priorizados para a seleção de animais para bioensaio, pois para eles, as chances de isolamento do parasita são maiores e que a soroconversão em camundongos infectados experimentalmente não é um bom indicador de isolamento do agente.