Estado funcional dos linfócitos T CD4+ e CD8+ e seu papel na progressão lenta da infecção por HIV em pacientes pediátricos / Functional state of CD4+ and CD8+ T lymphocytes and their role in the slow progression of HIV infection in pediatric patients

OBJETIVO: Avaliar o estado funcional dos linfócitos T CD4+ e CD8+ de pacientes pediátricos venezuelanos infectados pelo HIV-1. MÉTODOS: As crianças foram agrupadas como progressoras rápidas (PRs) ou progressoras lentas (PLs), com base no quadro clínico. Para determinar a funcionalidade dos linfócitos T CD4+ e CD8+, foram utilizadas técnicas de citometria de fluxo e caracterizados parâmetros de funcionalidade dessas células por meio de testes ex vivo como expressão de CD95/Fas e de CD127 e frequência de apoptose. Além disso, determinamos, em células mononucleares de sangue periférico, a proliferação do HIV e a produção de interleucina-10 (IL-10), do fator de necrose tumoral alfa (TNF-α) e de interferon gama (IFN-γ), e também estimamos o IFN-γ intracelular em células T CD4+. RESULTADOS: Nossos resultados indicam que vários mecanismos moleculares e celulares dos linfócitos T CD4+ e CD8+ tiveram piora nos PRs em comparação com PLs e controles. Ambos os tipos de linfócitos T dos PRs apresentaram aumento na expressão de CD95/Fas (p < 0,01), redução na expressão de CD127 (p < 0,01) e elevação na frequência de apoptose (p < 0,01). Além disso, as células T desses pacientes apresentaram diminuição na capacidade de proliferação mitogênica (p < 0,05), redução na porcentagem de linfócitos T CD4+ produtores de IFN-γ (p < 0,05) e menor capacidade de produção de IL-10, TNF-α e IFN-γ (p < 0,01) em comparação com PLs e controles. CONCLUSÃO: Nossos resultados indicam que o declínio das respostas moleculares e celulares dos linfócitos T está relacionado a uma rápida progressão e à diminuição na resistência à infecção pelo HIV-1 em crianças.

OBJECTIVE: To evaluate simultaneously the functional state of CD4+ and CD8+ T lymphocytes from Venezuelan HIV-1-infected pediatric patients. METHODS: Children were assigned to subgroups of rapid progressors (RPs) and slow progressors (SPs), based on clinical features. To determine the degree of CD4+ and CD8+ T-lymphocyte functionality, flow cytometry techniques were used, and diverse parameters of the functionality of these cells were characterized by ex vivo tests, such as expression of CD95/Fas and CD127, and frequency of apoptosis. In addition, we determined, in cultured peripheral blood mononuclear cells, HIV-specific proliferation and the production of interleukin-10 (IL-10), tumor necrosis factor alpha (TNF-α) and interferon gamma (IFN-γ), besides measuring intracellular IFN-γ in CD4+ T cells. RESULTS: Our results indicate that several molecular and cellular mechanisms of CD4+ and CD8+ T lymphocytes are deteriorated in RPs in comparison with SPs and controls. Indeed, both types of T lymphocytes from RPs exhibited an increased expression of CD95/Fas (p < 0.01), a significantly reduced expression of CD127 (p < 0.01), and an augmented frequency of apoptosis (p < 0.01). Furthermore, T cells from these patients displayed a diminished capacity of mitogen proliferation (p < 0.05), a reduced percentage of IFN-γ producing CD4+ T lymphocytes (p < 0.05) and a smaller capacity of IL-10, TNF-α and IFN-γ production (p < 0.01) in comparison with SP and control patients. CONCLUSION: Our findings indicate that the decline of the normal T lymphocyte molecular and cellular responses is related to a rapid progression and a decreased resistance to HIV-1 infection in children.

La funcionalidad de los linfocitos TCD8+ durante la tuberculosis pulmonar activa en la infección por VIH / The functionality of CD8 + T lymphocytes during active lung tuberculosis in HIV infection

El papel de las células TCD4+ en la inmunidad contra la tuberculosis ha sido ampliamente estudiado. Sin embargo, la función de las células TCD8+ en la co-infección VIH-1 y M. tuberculosis (VIH/Mtb) no está bien comprendida. Para determinar la funcionalidad de estas células TCD8+ de pacientes VIH+ con TB (tuberculosis) pulmonar activa se usaron diferentes parámetros inmunológicos. Los resultados indican que ambos grupos de pacientes VIH+ (con o sin TB activa) con la misma carga viral y cantidad de linfocitos TCD4+ en sangre, presentaron diferentes alteraciones en la frecuencia ex vivo para las moléculas CD95 y CD127 en células TCD8+ totales, vírgenes ymemoria positivas, mientras que para la molécula HLA-DR, las diferencias fueron observadas en la población celular total. Además, las células TCD8+ de los pacientes con TB activa cultivadas por 72 h en presencia de PPD, presentaron baja proliferación y alta frecuencia de apoptosis inducida, así como baja producción de IFN- IL-10 y TNF- en comparación a los Controles sanos. Estos datos sustentan la hipótesis que las células T CD8+ pierden su funcionalidad contra el Mtb durante la infección con VIH-1, lo cual puede ser responsable de la activación de la TB en los pacientes co-infectados.

The role of CD4+ T-cells in immunity against tuberculosis has been extensively studied.However, the function of CD8+ T-cells in co-infections of HIV-1 and M. tuberculosis (VIH/Mtb) is not well understood. To evaluate the functionality of CD8+ T-cells from HIV+ patients having active TB, several immunological parameters were assayed. Results indicate that both HIV+ groups (with and without active TB), having the same viral load and peripheral blood CD4+ T and amount of lymphocytes in the blood, displayed different alterations in the ex vivo frequency for CD95 and CD127 markers in CD8+ T-cells, naive and memory positive cells, while for the HLA-DR marker, differences were observed in the total cell population. Moreover, CD8+ T- cells from TB-active patients, cultured for 72 h in the presence of PPD, showed a low proliferation rate and a high frequency of induced apoptosis as well as lower production of IFN- IL-10 and TNF- cytokines compared to healthy control cells. These results support the hypothesis that CD8+ T-cells lose their functionality against Mtb during an HIV-1 infection, which could be responsible for the activation of TB in VIH/Mtb co-infected patients.

Expresión de las óxido nítrico sintasas constitutiva endoletal e inducible en pacientes venezolanas con preeclampsia / Endothelial and inducible nitric oxide synthase expression in venezuelan patients with pre-eclampsia

La preeclampsia (PE) es una enfermedad que se presenta en la segunda mitad de embarazo. Es una condición caracterizada por hipertensión, proteinuria y frecuentemente cierto grado de restricción del crecimiento intrauterino (RCIU). El óxido nítrico (ON) regula el flujo de sangre en la placenta humana, induce vasodilatación, inhibe la agregación plaquetaria, y previene la adhesión de plaquetas a las células endoteliales. En este trabajo se evaluó, en sangre periférica de mujeres embarazadas normales (n = 46) y con PE (n = 50), los niveles séricos de nitritos y se analizó la expresión de las óxido nítrico sintasas constitutiva endotelial (eNOS) e inducible (iNOS) en tejido placentario. Se observó un aumento significativo en la concentración sérica de nitritos en las pacientes con PE al compararlas con mujeres embarazadas normales (150,64 ± 8,94 vs 40,62 ± 1,65 µM, p < 0,00001) y un aumento significativo en la expresión de las enzimas NOS (eNOS e iNOS) en las placentas de esas mismas pacientes, con respecto a las mujeres con embarazo normal (iNOS 4,29 ± 1,51 vs 0,59 ± 0,13; eNOS 1,78 ± 0,74 vs 0,46 ± 0,22, p < 0,005). Nuestros resultados muestran que existe una relación entre los valores de nitritos en suero de sangre periférica y el análisis de la expresión de las enzimas eNOS e iNOS en extracto de proteínas de tejido de placenta

Expresión alterada de receptores de supervivencia (CD127) y de muerte (FAS) en linfocitos T CD8 totales, vírgenes y de memoria de pacientes infectados por el virus de inmunodeficiencia humana: posibles implicaciones para la progresión de la infección / Altered expression of survival (CD127) and death (Fas) receptors in total, naïve and memory CD8 T lymphocytes from human immunodeficiency virus infected patients: possible implications for progression of infection

En el presente trabajo, estudiamos la expresión ex vivo e in vitro de los receptores CD95/Fas y CD127 en linfocitos T CD8+ totales, vírgenes y de memoria de pacientes infectados con VIH con diferentes concentraciones sanguíneas de linfocitos T CD4+. Además, a estas células se les determinó la apoptosis espontánea e inducida por antígenos virales (Env) y su capacidad proliferativa específica. Los resultados mostraron que los pacientes con una baja densidad de linfocitos T CD4 sanguíneos (CD4 < 250/µL), manifestaban ex vivo una alta expresión de CD95/Fas y una baja expresión de CD127 en todas las subpoblaciones de linfocitos T CD8+ en relación a los pacientes con una densidad mayor de linfocitos T CD4+ en sangre (CD4 > 250/µL). En ensayos in vitro usando el antígeno Env, los linfocitos T CD8+ totales presentaron una expresión similar de ambos receptores con una mayor incidencia de apoptosis espontánea y una disminuida capacidad proliferativa en relación a los controles. Estos resultados señalan como el desarrollo progresivo de la infección por VIH en pacientes no tratados está asociado con una disminución de linfocitos T CD8+ sanguíneos, caracterizados por fallas en su capacidad proliferativa y en la frecuencia de apoptosis, lo cual se evidencia por una expresión alterada de CD127 y CD95/Fas.

Polimorfismos en el promotor del gen del angiotensinógeno (AGT) y su relación con la miocardiopatía chagásica crónica en pacientes venezolanos / Polymorphisms in the promoter of the gene of the angiotensinogen (AGT) and their relation with the chronic chagasic cardiomyopathy in venezuelan patients

La enfermedad de Chagas constituye un importante problema de salud pública en América Latina por presentar elevados índices de prevalencia y por la gravedad de sus cuadros clínicos, tales como la Miocardiopatía Chagásica Crónica (MCC), en la cual los pacientes pueden presentar diferentes grados de alteración cardíaca, siendo los pacientes chagásicos tipo 3 los que presentan mayor compromiso. Por otra parte, se conoce que diversos polimorfismos en el gen del angiotensinógeno (AGT) están correlacionados con el desarrollo de ciertas miocardiopatías hipertróficas. En este trabajo se estudió la posible correlación entre el polimorfismo -6A/G del promotor del gen del AGT con la susceptibilidad al desarrollo de una MCC en pacientes chagásicos tipo 3. Para esto, se estudió una población de 22 pacientes chagásicos tipo 3 (confirmado por seguimientos y parámetros clínicos) y 19 voluntarios seronegativos a Trypanosoma cruzi y sin ningún tipo de alteraciones cardíacas. Los genotipos derivados del polimorfismo -6A/G fueron determinados mediante la técnica de MS-PCR (Mutagenically Separated PCR), utilizando dos iniciadores alelo-específicos para el promotor del gen del AGT. Los resultados obtenidos indican que la distribución de los genotipos GG, AA y AG derivados del polimorfismo -6A/G no difieren significativamente entre pacientes y controles (1, 3, 18 y 1, 2, 16; respectivamente) con un valor de X² obtenido de 0,0983 (p<0,005), lo cual sugiere que el polimorfismo -6A/G en el promotor del gen del AGT no está correlacionado con el desarrollo de MCC presente en estos pacientes