ABSTRACT
Introduccion: El 95% del peso del esmalte dental erupcionado sano corresponde a material inorganico, 4% agua y 1% a materia organica (con un 0,03 a 0,1% de trazas de proteinas estructurales). En el caso del esmalte con defectos del desarrollo - como la fluorosis dental - existe evidencia de la retencion de material proteico, despertando la necesidad del estudio del proteoma del esmalte en estas condiciones. Limitaciones inherentes a los tejidos duros, como su bajo contenido proteico encerrado en una matriz mineral, dificultan los procesos de extraccion y caracterizacion de proteinas. El presente estudio, busca hacer una adaptacion metodologica de los procedimientos de extraccion de proteinas en esmalte dental erupcionado humano, para su posible aplicacion al estudio del proteoma del esmalte con defectos del desarrollo. Objetivo: Estandarizar una tecnica de extraccion y caracterizacion del material proteico del esmalte de dientes erupcionados. Materiales y metodos: Se recolectaron dientes sanos con extraccion indicada y se realizaron: -cortes de secciones longitudinales de 550 ¦Ìm, - separacion mecanica de esmalte/dentina y - pulverizacion de esmalte dental. El pulverizado se sometio a desmineralizacion/precipitacion de proteinas con TCA 12%. El extracto fue separado por electroforesis SDS-PAGE y caracterizado por LC-MS/ MS. Resultados: el procedimiento fue estandarizado. No se evidenciaron bandas de proteina despu¨¦s de la electroforesis SDS-PAGE, pero se identificaron y caracterizaron 138 peptidos, correspondientes a 13 proteinas, 3 de ellas especificas del esmalte (Amelogenina X, Amelogenina Y, Ameloblastina). Conclusiones: por primera vez en Colombia, se estandarizan y se adaptan metodos de extraccion y caracterizacion de proteinas del esmalte dental, abriendo las puertas al estudio del proteoma de este tejido.
Introduction: 95% of erupted enamel corresponds to inorganic material, 1% organic and 4% water content (by weight) and it only has traces of structural proteins (0,03¨C0,1%), making extraction and characterization a difficult process. Enamel developmental defects as dental fluorosis, have been related to protein retention, indicating a clear need for the study of the enamel proteome. Standardization of methods for extraction and characterization of enamel proteins will allow the characterization of the human enamel proteome under these particular conditions. Methods: ethical approval from Universidad El Bosque ethics committee was granted and informed consent was given. Human permanent erupted teeth were collected from Universidad El Bosque Dental Clinics. The teeth crowns were cut in 550 ¦Ìm sections, and dental tissues were separated. The enamel sections were grinded with liquid nitrogen to get enamel powder. Powdered enamel was demineralized and the proteins precipitated with TCA 12%. The proteins were separated by SDS-PAGE Electrophoresis and characterized by LC-MS/MS. Results: enamel powdering and protein extraction techniques were standardized at Universidad El Bosque laboratories. No protein bands were detected after SDS- PAGE Electrophoresis, however, by LC-MS/MS, 138 peptides from 13 proteins were identified, 3 of them enamel-specific (Amelogenin X, Amelogenin Y). Conclusions: for the first time in Colombia, methods for extraction and characterization of proteins are standardized and applied on dental enamel, opening the doors for the study of the proteome from sound and defective dental enamel.