Association of TLR4 polymorphisms with subclinical mastitis in Brazilian holsteins

The identification of dairy cows with greater or lower potential to develop mastits has been pursued for many years among different segments of the milk industry, including governmental organizations. Genomic studies have suggested that Single Nucleotide Polymorphisms (SNPs) within the pattern recognition receptors (PRR) could lead to different responses to pathogens, and consequently result in mastitis resistance or susceptibility. To investigate whether toll like receptor 4 (TLR4) gene is associated with subclinical mastitis in Holstein cows from a property in the state of Goiás, Brazil, TaqMan allelic discrimination and somatic cell count were performed. One hundred and fifty milk samples were analyzed for SCC and centesimal composition. Twenty percent of those samples with SCC above 200,000 (n=13) were screened for real-time PCR identification of microorganisms and blood samples were genotyped for TLR4 SNPs. There was a higher prevalence of Gram-positive bacteria in the analyzed samples (88.9%) and animals that had the combined genotypes AACCCC, GGTCGG and GACCGC presented the lowest somatic cell scores, and consequently those genotypes have the potential to be applied as molecular markers for assisted animal selection to improve milk quality.

Molecular identification of Cysticercus bovis at different stages of the host-parasite interaction process

Introdução: A cisticercose bovina é considerada o principal elo epidemiológico da teníase humanaprovocada por Taenia saginata e ocasiona grande prejuízo em toda a cadeia produtiva da carne bovina. Objetivos: verificação espécie-especifica da identidade molecular de cisticercos bovinos classificados em quatro estágios do processo de interação parasito-hospedeiro. Métodos: os cisticercos foram coletados durante a inspeção post-mortem de animais sacrificados sob inspeção do serviço de inspeção federal num abatedouro do estado de Goiás. Inicialmente os cisticercos foram classificados de acordo com suas características anatomo-patológicas. Em seguida, a técnica de PCR foi aplicada utilizando-se primers específicos para amplificação do gene LSU RNAr de Cysticercus bovis. Resultados e conclusão: o PCR pode ser aplicado para a identificação espécie-especifica de cisticercos bovinos com assertividade maior (p menor que 0,05) em amostras de cisticercos classificados no EV (estágio vesicular) e ECV (estágio coloidal vesicular) em relação à assertividade dos resultados de PCR de amostras de DNA de cisticercos nos EGN (estágio granular nodular) e ENC (estágio nodular calcificado). A negatividade dos resultados de PCR foi maior (p menor que 0,05) nas amostras de DNA de cisticercos localizados no coração e classificados como EGN em relação à negatividade dos resultados de PCR de amostras de cisticercos do mesmo estágio e localizados em músculos masticatórios.

Diferenciacão específica entre Taenia saginata e Taenia solium por ensaio de PCR e duplex-PCR / Specific discrimination between Taenia saginata and Taenia solium by one step PCR assay and duplex-PCR

Este estudo teve como objetivo a padronizacão de protocolos e a selecão de novos primers para a identificacão espécie-específica de Taenia saginata e Taenia solium através da reacão em cadeia da polimerase (PCR) e duplex-PCR. Inicialmente, foram recuperadas seqüências depositadas no GenBank (acesso nº AB020399 para T. saginata e nº AB020395 para T. solium) referentes ao gene da subunidade maior do ribossomo (LSU RNAr) de tenídeos. A partir do alinhamento das seqüências, um primer genérico denominado TBR-3 (5'-ggcttgtttgaatggtttgacg- 3') foi selecionado de região conservada e, de diferentes regiões semi-conservadas, os primers específicos TBR-4 para T. saginata (5'-cgactcatgaagataaacaaggt-3') e TBR-5 (5'-cggtcgaacagaccataaatct-3') e TBR-6 (5'-gctactacacctaaattctaacc- 3') para T. solium. Os primers foram avaliados quanto à especificidade através da PCR empregando-se DNA total (DNAt) de amostras de cisticercos e proglotes dos parasitos, previamente identificadas por critérios morfológicos. O par de primers TBR-3/TBR-4 permitiu a amplificacão específica do fragmento esperado de 328 pb a partir do DNAt de T. saginata. Os pares TBR-3/TBR-5 e TBR-3/TBR-6 permitiram a amplificacão, respectivamente, dos fragmentos específicos de 310pb e 286pb a partir do DNAt de T. solium. A identidade dos produtos de PCR foi comprovada comparando-se a seqüência dos amplicons obtidos às seqüências de referência do gene LSU RNAr registrado no GenBank (nº AB020399 e nº AB020395). As reacões apresentaram sensibilidade para deteccão de até 1fg do DNAt de T. solium e 0,2fg do DNAt de T. saginata. A combinacão dos primers TBR-3/TBR-4 e TBR3/TBR-6 e o tamanho dos fragmentos gênicos obtidos permitiram o estabelecimento de ensaios de duplex-PCR, eficaz na deteccão simultânea do DNA de T. saginata e T. solium em sistema único de reacão. Os primers utilizados não geraram qualquer produto de amplificacão cruzada quando testados com DNAt de Taenia hydatigena, Taenia taeniaeformis, Hymenolepis diminuta, Anoplocephala magna, Paranoplocephala mamillana e Moniezia expansa, nem frente ao DNAt dos hospedeiros Homo sapiens, Bos taurus e Sus scrofa.