Plaquetopenias: diagnóstico usando citometria de fluxo e anticorpos antiplaquetas / Thrombocytopenia: diagnosis with flow cytometry and antiplatelet antibodies

Objective: To identify antiplatelet antibodies by flow cytometry (direct method) in patients with thrombocytopenia. Methods: Between January 1997 and March 2004 a total of 15100 patients were referred to the Centro de Hematologia de São Paulo for hematological investigation of several diagnoses (anemia, leukopenia, thrombocytopenia, coagulation abnormalities, adenomegaly, leukemia and others). Ofthose, 1057 were referred because of thrombocytopenia and were divided into two groups: Group Idiopathic thrombocytopenic purpura, with no identifiable cause; and Group Other thrombocytopenia, which included low normal platelet counts cause to be established, hepatitis C and HIV infection, hypersplenism, EDTA-induced artifacts, laboratory error, and other causes. Flow cytometry immunophenotyping was done in 115 cases to identify platelet autoantibodies (direct method). Results: Of the total number of patients, 1057 (7%) presented low platelet counts, 670 were females (63.4%) and age range of one to 75 years. Of the 115 cases (9.7%) submitted to immunophenotyping, the results were positive in 40% and the test was inconclusive in 5%. Idiopathic thrombocytopenic purpura was found in 52% of patients, more often in women. Hepatitis C virus infection was found in 7% and HIV infection in 1%. Low normal platelet counts were found in 17%, laboratory errors in 6%, and laboratory artifacts in 1% of cases. Platelet autoantibodies were found in 76.9% of all idiopathic thrombocytopenic purpura cases. It was negative in 83.3% of the low normal counts. Conclusion: antiplatelet autoantibodies when present help to diagnose idiopathic thrombocytopenic purpura. When absent, suggest other causes of thrombocytopenia.

Objetivo: Identificar anticorpos antiplaquetas por citometria de fluxo (método direto) em pacientes com plaquetopenia. Métodos: No período de Janeiro de 1997 a Março de 2004, foram encaminhados ao Centro de Hematologia de São Paulo 15.100 pacientes para investigação hematológica, com vários diagnósticos (anemia, leucopenia, plaquetopenia, alteração da coagulação, adenomegalias, leucemia e outros) dos quais 1.057 apresentavam plaquetopenia. Esses pacientes, conforme diagnóstico, foram separados em dois grupos: Grupo Púrpura Trombocitopênica Idiopática, quando não foi descoberta a etiologia da plaquetopenia; e Grupo Outra Trombocitopenia, que incluíafaixa de normalidade a esclarecer, infecção pelo vírus da hepatite C, HIV, hiperesplenismo, artefato EDTA, erro laboratorial e outras. Em 115 casos, foi realizada imunofenotipagem, para identificação de anticorpo antiplaquetas (método direto), por citometria de fluxo. Resultados: Dos 1.057 casos (7%) encaminhados por laquetopenia, 670 casos (63,4%) eram do sexo feminino. As idades variavam entre 1 e 75 anos. Dos 115 casos (9,7%) em que foi realizada imunofenotipagem, houve positividade em 40% e o exame foi duvidoso em 5%. A púrpura trombocitopênica idiopática foi encontrada em 52% dos casos, sendo mais frequente no sexo feminino, em crianças e adultos jovens. A prevalência do vírus da hepatite C foi encontrada em 7% dos casos e HIV em 1% dos casos. Faixa de normalidade foi encontrada em 17%; erro laboratorial em 6% e artefato laboratorial em 1% dos casos. Conclusão: O anticorpo antiplaquetas é um exame útil, quando positivo, para confirmar o diagnóstico de púrpura trombocitopênica idiopática e, quando negativo, sugere outras causas de trombocitopenia.

Correlação entre citometria de fluxo e anatomia patológica: experiência de dez anos na investigação de doenças linfoproliferativas / Correlation between flow cytometry and histologic findings: ten year experience in the investigation of lymphoproliferative diseases

Objetivo: Evidenciar as vantagens da correlação entre imunofenotipagem por citometria de fluxo e exame anatomopatológico/imunoistoquímico de adenomegalias e/ou nódulos no diagnóstico de doenças linfoproliferativas. Métodos: Estudo retrospectivo no qual foram avaliadas 157 amostras de biópsias ou punções aspirativas de gânglios ou nódulos de 142 pacientes, durante o período de 1999 a 2009. As amostras tinham sido encaminhadas simultaneamente para os Serviços de Citometria de Fluxo e Anatomia Patológica do Hospital Israelita Albert Einstein, em São Paulo. Para a análise na anatomia patológica, as amostras foram preparadas em lâminas e coradas com hematoxilina-eosina, Giemsa, ou marcadas com anticorpos monoclonais para detecção de antígenos específicos. Para a análise por imunofenotipagem por citometria de fluxo, as amostras foram hemolisadas e marcadas com diferentes painéis de anticorpos monoclonais para detecção dos diferentes antígenos. Resultados: Foram concordantes os diagnósticos entre a anatomopatológico e imunofenotipagem por citometria de fluxo em 115 (81%) pacientes, o que correspondeu a 127 amostras distribuídas da seguinte forma, conforme o diagnóstico anatomopatológico: 63 pacientes com linfoma não Hodgkin de células B; 26 pacientes com hiperplasia linfoide reacional; 5 pacientes com linfoma não Hodgkin de células T; 4 pacientes com proliferação linfoide atípica; 5 pacientes com processo inflamatório crônico granulomatoso; 5 pacientes com diagnósticos não hematológicos; 2 pacientes com sarcoma granulocítico; 2 pacientes com timoma; 1 paciente com leucemia bifenotípica; 1 paciente com plasmocitoma Kappa; e 1 paciente com linfoma de Hodgkin. A correlação entre os resultados das duas técnicas permitiu a classificação dos subtipos de linfomas da seguinte forma: 19 pacientes com linfoma folicular; 15 pacientes com linfoma difuso de grandes células B; 7 pacientes com linfoma linfocítico de pequenas células B/leucemia linfocítica crônica; 3 pacientes com linfoma de células do manto; 1 paciente com linfoma de Burkitt; 1 paciente com linfoma do tipo MALT (tecido linfoide associado à mucosa); 1 paciente com doença linfoproliferativa pós-transplante; 2 pacientes com linfoma não Hodgkin de células B de alto grau; 1 paciente com linfoma não Hodgkin de células B de baixo grau; 1 paciente linfoma de Hodgkin; e 12 pacientes com linfoma não Hodgkin de células B, sem outra especificação. Conclusão: A imunofenotipagem por citometria de fluxo complementa os achados do estudo anatomopatológico/imunoistoquímico, permitindo um diagnóstico hematopatológico rápido e preciso das doenças linfoproliferativas.

Citometria de fluxo: Imunofenotipagem em 48 casos de leucemia de células cabeludas e a relevância das intensidades de fluorescências nas expressões dos anticorpos monoclonaispara o diagnóstico / Flow cytometry: Immunophenotyping in 48 hairy cell leukemia cases and the relevance of fluorescence intensity in CDs expression for diagnosis

Objetivo: Relatar a experiência e importância da imunofenotipagem porcitometria de fluxo através da positividade e intensidade de expressões antigênicas no diagnóstico de 48 pacientes com leucemia de células cabeludas. Métodos: Entre novembro de 1991 e junho de 2005, 4.318 casos foram analisados por citometria de fluxo, sendo 3.556 pacientescom doenças oncoematológicas (82,3%) e diagnosticados 48 casos(1,3%) de leucemia de células cabeludas. As análises morfológicas foram realizadas em lâminas coradas pelo método pancromático MayGrunwald Giemsa, por pelo menos dois experientes morfologistas.As análises citoquímicas realizadas foram fostatase ácida e fosfataseácida inibida por tartarato (TRAP). Foram analisadas as expressões antigênicas dos anticorpos monoclonais: CD2, CD3, CD5, CD7, CD10,CD11c, CD19, CD20, CD22, CD23, CD25, CD38, HLA-DR, FMC-7,CD79b, CD103, IgM, IgG, IGD, Kappa e Lambda. Resultados: Através das análises dos porcentuais de positividade e intensidade deexpressão dos anticorpos monoclonais encontrados nas regiões de células dos histogramas de volume e complexidade (utilizado de 1991a outubro de 2001), e análise nas regiões de células CD19 positivas com histogramas seqüenciais, foi possível identificar essa patologia, inclusive com discriminação de células residuais após terapêutica específica. Conclusão: A confirmação diagnóstica das leucemias de células cabeludas por citometria de fluxo é um método rápido, precisoe útil no laboratório clínico. A opção por um histograma inicial de CD19x SSC e análise de intensidade de expressão antigênica na medula óssea mostrou-se estatisticamente mais eficiente.

A importância da citometria de fluxo no diagnóstico raro de mieloma mielomonocítico / The importance of flow cytometry in the rare diagnosis of myelomonocytic myeloma

O mieloma múltiplo consiste na proliferação de células plasmáticas. Raramente apresenta, ao diagnóstico, morfologia de células imaturas com citoplasma amplo basofílico, sugerindo quadro leucêmico inicial. O objetivo deste artigo é mostrar a importância da imunofenotipagem na elucidação destes achados, morfológicos, pela expressão simultânea de antígenos plasmocíticos, mielomonocíticos e de linhagem linfóide T, confirmando a hipótese diagnóstica de mieloma mielomonocítico. Apresentamos dois casos de mieloma mielomonocítico através de análise morfológica (coloração pancromática de Romanovsky), citoquímica (PAS, peroxidase, sudan black, alfanaftil acetato esterase e oil red), citogenética e imunofenotipagem por citometria de fluxo em sangue periférico e medula óssea, de acordo com as técnicas recomendadas. Foram utilizados os anticorpos monoclonais: CD2, CD3, CD4, CD5, CD7, CD10, CD13, CD15, CD19, CD20, CD25, CD33, CD34, CD38, CD45, CD56, CD71, HLAðDR, TCR alfa/beta, TCR gama/delta, kappa, lambda, IgM e IgD de superfície e intracitoplasmática, assim com MPO, CD79a e CD3 intracitoplasmático. Utilizamos as técnicas de banda G e FISH nas análises citogenéticas. Foram observadas alterações clonais em ambos os casos, sendo uma com trissomia do cromossomo 8 e outro caso com deleção do braço longo do cromossomo 7 e do braço curto do cromossomos 6. Os percentuais de positivadade encontrados nos anticorpos monoclonais CD4, CD7, CD10, CD13, CD14, CD15, CD33, CD38 E CD56 de forte expressão, HLAðDR, TCR gama/delta, MPO e IgM intracitoplasmático no histograma de volume x complexidade e no histograma de CD45 x complexidade permitiram concluir este diagnóstico em ambos os casos, demonstrando a importância do método

Valores de leucócitos em um grupo de trabalhadores rurais / Leukocytes value in a rural workers group

Os autores estudam a prevalência da reduçäo de leucócitos, menos de 5.000/mm3, em uma populaçäo rural constituída por 803 cortadores de cana na regiäo de Piracicaba. Encontraram 44 casos (5,5%) de reduçäo de leucócitos, no primeiro exame; em duas determinaçöes de sangue com intervalos de 3 meses, obteve-se 66 casos (8,34%). Mostram que leucopenia com menos de 4.000/mm3 só foi encontrada em 0,75% dos casos. Além disso, em 9 casos foi possível repetir o hematológico completo em abril de 1987, reforçando a idéia de que em 2/3 dos casos a leucopenia é transitória. Constataram que na quase totalidade, os casos eram de raça negra

Prevalência da anemia carencial em crianças albergadas / Prevalence of deficiency anemia in institutionalized children

Foram estudadas 172 crianças albergadas da Unidade Sampaio Viana, Triagem 1 da Febem - Säo Paulo - SP, objetivando verificar a prevalência da anemia carencial relacionada ao estado de nutriçäo protéico-calórica e do crescimento. Na avaliaçäo dos distúrbios de nutriçäo e crescimento foram utilizados os critérios padronizados por Marcondes(22), para diagnóstico e classificaçäo, e para avaliaçäo de anemia, empregou-se o critério da OMS (Hb<11g%) além do eritrograma, eletroforese de hemoglobina e dosagem da ferritina. Foram observados 68,02% de anemia, sendo a faixa etária mais atingida aquela de crianças com até 18 meses de idade (média 85,9%). A anemia foi detectada em 70% de crianças com até 6 meses de idade; 92,60 com até 12 meses e 90,32% com até 18 meses. Quanto ao estado nutricional, foram encontrados 22,9% de eutróficos, reduzindo-se as deficiências graves (DPC III) com o decorrer do tempo de internaçäo, ao mesmo tempo que aumentava o número de eutróficos. Crianças com até 1 mês de internaçäo eram desnutridas em 100%, ocorrendo 95,32% de deficiência protéico-calórica naquelas de 6 meses de idade e 83,33% nas de 18 meses. Os resultados, quanto ao crescimento, correspondem aos encontrados para o estado de nutriçäo. Conclui-se que a simples assistência alimentar näo foi suficiente para previnir e tratar a anemia, sendo destacada a necessidade de suplementaçäo de ferro, alimentar ou terapêutica

Estudo da dosagem de beta2 microglobulina (B2M) em indivíduos normais, grupos de risco e casos de AIDS / Dosage study of Beta2 microglobulin (B2M) in normal subjects, groups of risk and AIDS cases

A dosagem de Beta 2 Microglobulina tem sido descrita como teste útil no estudo de pacientes com Síndrome de Imunodeficiência Adquirida (SIDA ou AIDS), suspeitos (AIDS related complex), comunicantes, grupos de risco e na triagem de doadores de sangue. No presente estudo, os autores encontraram nível de B2 Microglobulina acima do normal em 80% de 5 pacientes com SIDA (AIDS), 23% em 13 homossexuais assintomáticos, 80% em 11 hemofílicos e em niveis normais em 12 comunicantes de casos confirmados de SIDA (AIDS) e em 6 individuos normais