Expression of active human erythropoietin in the mammary gland of lactating transgenic mice and rabbits

Transgenic mice and rabbits were generated using a chimeric gene comprising the human erythropoietin (hEPO) cDNA under the 5' and 3' regulatory sequences of the rabbit whey acidic protein gene. Transgenic mice expressed hEPO at levels of 0.01 mg/l in the milk of lactating females showing that the genetic construct was functional. Reverse transcriptase polymerase chain reaction with RNA from various tissues showed that this transgene was expressed mainly in the ovary and mammary gland. In rabbits, we demonstrated the germ line transmission of the transgene. The hEPO was obtained in the milk of lactating females at levels of up to 0.0003 mg/l. Although the expression levels were low, biologically active hEPO was obtained in the milk of transgenic rabbits without any apparent detrimental effect for the animals. In vitro, the specific activity of the rabbit-derived hEPO was higher than that reported for the natural hEPO, thus suggesting differences in the glycosylation pattern in at least part of the molecules secreted by the mammary gland of transgenic rabbits

Clonación y expresión del ADNc para el activador tisular del plasminógeno en cèlulas de animales / Cloning and expresion of human tissue-type plasminogen activator cDNA in eukararyotic cells

Una alta expresión de tPA humana recombinante en células de hamster chino (CHO), fue obtenida usando el sistema de coamplificación del gen de la dehidrofolato reductasa (DHFR). La proteina fue secretada activa al medio de cultivo. En varios clones se mantuvo la producción estable, aun en ausencia de presión selectiva. No obstante, cuando el mismo ADN complementario fue clonado en un vector de expresión de baculovirus, sólo fue posible detectar niveles muy bajos de actividad tPA

Sperm cells mediated gene transfer in cattle / Transferencia génica mediada por espermatozoides en bovinos

La microinyección pronuclear de ADN en embriones unicelulares se ha empleado para la generación de bovinos transgénicos (Roschlau et al 1988, Purcel et al, 1989). Recientemente se reportó que los espermatozoides maduros son capaces de capturar moléculas de ADN en suspensión y se obtuvieron ratones transgénico utilizando las cálulas espermáticas como vectores (Lavitran et al, 1989). Nosotros demostramos que esoermatozoides maduros de varias especies animales, incluido bovinos, son capaces de asociar moléculas en suspensión (Castro et al. 1990). En este trabajo reportamos la encubación de moléculas de ADN con espermatozoides bovinos y su empleo en la Inseminación artificial de tres vacas superovuladas. Los blastocitos fueron recuperados 11 dias después de la Inseminación y se extrajo el ADN de la reacción en cadena de la polimerasa (PCR). En dos animales se encontraron blastoscistos transgénicos portadores del ADN foráneo. Esto permite considerar los espermatozoides como un posible vehículo para transferencia de ADN en bovinos

Síntesis total del gen de la ertropoyetina humana / Total synthesis of the human erythropoietin gene

En el presente trabajo se reporta la síntesis total del gen que codifica para la eritropoyetina humana, hormona glicoproteica de 166 aminoácidos, que constituye la hormona principal para la regulación y el mantenimiento, a niveles fisiològicos, de la masa de eritrocitos circulantes el la sangre. El diseño del gen sitético 620 pb, incluye la secuencia que codifica para el péptido señal de 27 aminoácidos, la secuencia consenso CCACC,los sitios de restricción Bgl LL y EcoR l en los extremos 5' y 3' y los codones más frecuentes en eucariotas. Fueron sintetizados en fase sólida, por el método del ß-cianoetilfosforamidito, 54 oligonuleótidos. El gen sintetizado, uno d4 los mayores reportados sin el uso de subclonajes de fragmentos, fue insertado en un vector de expresión para células de mamíferos y secuenciado con el método Sanger

Clonación y caracterización del sistema de restricción-metilación Pvull de Proteus vulgaris: purificación de la restrictasa recombinante / Cloning and characterization of the Pvull restriction-modification system from proteus vulgaris: purification of the recombinant restrictase

El sistema de restrición-metilación (RMSII) Pvull de P. vulgaris fue clonado y expresado con altos niveles en E. coli. Se estudió el efecto de la alta expresión de restrictasa y metilasa en diferentes cepas de E, coli, resultando la cepa HB101 (mrcB) la única eficientemente transformable con plasmidios portadores de RMSII Pvull. Se aplicó un nuevo procedimiento para la purificación de la restrictasa Pvull recombinante utilizando cromatografía de intercambio iónico. Los métodos empleados permitieron la obtención de grandes cantidades de restrictasa Pvull, libre de exonucleasas y endonucleasas inespecíficas