Stable expression of shRNA for the control of recombinant adenovirus replication

Preventing the replication of adenovirus could have practical uses, such as controlling infection with wild-type virus or in applications involving recombinant vectors. Mainly transient methods have been used to inhibit adenovirus replication, including siRNA or drugs. Here, we tested whether stable expression of shRNA designed to target hexon, Iva2, or pol can inhibit the replication of a recombinant adenoviral vector, Ad-LacZ (serotype 5, E1/E3 deleted), in 293T cells. Significant knockdown correlating with reduced Ad-LacZ replication was achieved only when hexon was targeted. Cell sorting and isolation of cellular clones further accentuated knockdown of the hexon transcript, reduced protein levels by more than 90%, and diminished adenovirus production. As visualized by transmission electron microscopy, the cellular clone expressing the hexon-specific shRNA yielded 89.2% fewer particles compared to the parental 293T cells. Full scale production followed by purification revealed a 90.2% reduction in Ad-LacZ biological titer. These results support the notion that stable expression of shRNA can be used as a means to control adenovirus replication.

Comparison between objective assessment and self-assessment of sexual maturation in children and adolescents / Comparação entre avaliação objetiva e autoavaliação da maturação sexual em crianças e adolescentes

OBJETIVO: Avaliar as correlações entre avaliação objetiva e autoavaliação em ambientes diferentes (ambulatorial e escolar). MÉTODOS: Trezentos e dezenove indivíduos, 178 ambulatoriais (96 meninos e 82 meninas) e 141 (73 meninos e 68 meninas) de escolas públicas (8,3-18,7 anos), com 73 indivíduos (39 meninas e 34 meninos) apresentando índice de massa corporal acima do percentil 85 do Centers for Disease Control and Prevention, de 2000. Todos foram examinados, após consentimento informado, em sequência e individualmente, por dois médicos treinados, e então submetidos a autoavaliação, utilizando fotogramas (Tanner). Dos dados obtidos foram calculados os coeficientes de correlação de kappa entre examinadores e a autoavaliação. Para os testes foi adotado p < 5%. RESULTADOS: Não houve diferença significante entre as correlações obtidas no ambulatório e nas escolas e os dois grupos foram analisados em conjunto. As correlações obtidas entre os examinadores foram significantemente maiores que as da autoavaliação, com kappa (e intervalo de confiança) de 0,75 (0,8-0,69) para mamas/genitália entre examinadores contra 0,27 (0,34-0,20) e 0,29 (0,36-0,22) entre os dois examinadores e a autoavaliação (p < 0,0001). CONCLUSÕES: Na amostra estudada, a autoavaliação do estádio puberal não deve substituir a avaliação objetiva feita por profissionais treinados. Um aperfeiçoamento do método de autoavaliação poderia permitir seu uso em estudos populacionais.

OBJECTIVE: To assess the correlations between objective assessment and self-assessment of sexual maturation in the outpatient and school settings. METHODS: Three hundred and nineteen individuals, 178 (96 boys and 82 girls) from an outpatient clinic and 141 (73 boys and 68 girls) from public schools (8.3-18.7 years), of whom 73 individuals (39 girls an d 34 boys) had a body mass index above the 85th percentile, according to 2000 CDC Growth Chart, were analyzed. All of them were examined sequentially and individually by two trained physicians after a written consent form was signed by parents or surrogates, and then submitted to self-assessment using pictures (Tanner stages). Kappa coefficients between examiners and the self-assessment were calculated based on the collected data. A p value < 5% was established as statistically significant. RESULTS: No significant difference was observed between correlations obtained from the outpatient clinic and schools, and both groups were combined for analysis. The correlations obtained by examiners were significantly higher than those from self-assessment, with a kappa coefficient (and confidence interval) of 0.75 (0.8-0.69) for breasts/genitals across examiners against 0.27 (0.34-0.20) and 0.29 (0.36-0.22) between the two examiners and the self-assessment (p < 0.0001). CONCLUSIONS: In the studied sample, self-assessment of the pubertal stage should not replace the objective assessment made by trained professionals. Improvement of the self-assessment method may validate its use in population-based studies.

Alterações morfológicas placentárias de recém-nascidos pequenos para a idade gestacional / changes in placental morphology of small for gestational age newborns

Objetivo: verificar a morfologia placentária de recém-nascidos a termo pequenos para a idade gestacional, tendo como hipótese a existência mais freqüente de alterações placentárias em recém-nascidos pequenos para a idade gestacional do que em adequados para a idade gestacional.Métodos: realizou-se estudo transversal, na maternidade Terezinhade Jesus, em Juiz de Fora, MG, no período compreendido entre fevereiro e novembro de 1996, no qual foram coletados dados referentes a cinqüenta recém-nascidos a termo, estimados como pequenos para a idade gestacional. Como grupo controle, foram incluídos recém-nascidos a termo, estimados como adequados paraa idade gestacional, randomizados na proporção de um controle para cada caso. Dos 100 recém-nascidos participantes do estudo, foram obtidas as placentas, cordão umbilical e membranas, que foram examinados no Laboratório de Histologia e Embriologia do Departamento de Morfologia da UFJF e no Departamento de Anatomia Patológica e Medicina Legal da UFMG. As mães foram ntrevistadas, e os recém-nascidos avaliados quanto à idade gestacional, peso, comprimento e perímetro cefálico.Resultados: as placentas dos recém-nascidos pequenos para a idade gestacional apresentaram maior incidência de corioamnionite, infarto placentário, deposição perivilosa extensa de fibrina e vilosite crônica em focos múltiplos de localização parabasal, além de mostrarem menor peso e menores diâmetros em relação às placentas do grupo de recém-nascidos adequados para a idade gestacional (p <0,05). O índice placentário mostrou-se significativamente maior no grupo pequenos para a idade gestacional (p < 0,05), indicando que o comprometimento...

Variation in susceptibility to benznidazole in isolates derived from Trypanosoma cruzi parental strains

In this work, the susceptibility to benznidazole of two parental Trypanosoma cruzi strains, Colombian and Berenice-78, was compared to isolates obtained from dogs infected with these strains for several years. In order to evaluate the susceptibility to benznidazole two groups of mice were infected with one of five distinct populations isolated from dogs as well as the two parental strains of T. cruzi. The first group was treated with benznidazole during the acute phase and the second remained untreated controls. The animals were considered cured when parasitological and serological tests remained persistently negative. Mice infected with the Colombian strain and its isolates Colombian (A and B) did not cure after treatment. On the other hand, all animals infected with Berenice-78 were cured by benznidazole treatment. However, 100 percent, 50 percent and 70 percent of cure rates were observed in animals infected with the isolates Berenice-78 B, C and D, respectively. No significant differences were observed in serological profile of infected control groups, with all animals presenting high antibody levels. However, the ELISA test showed differences in serological patterns between mice inoculated with the different T. cruzi isolates and treated with benznidazole. This variability was dependent on the T. cruzi population used and seemed to be associated with the level of resistance to benznidazole

Problemas posturais na populaçäo assistida pela Unidade Básica de Saúde do Parque Ouro: estudo de alguns fatores para intervençäo / Postural problems in the assisted population by the Ouro Branco Park Health Basic Unit: studying of some factors to intervention

Considerando-se a alta incidência de problemas posturais, o desconhecimento da populaçäo sobre o assunto ea ausência de procedimentos básicos para prevençäo, na área de abrangência do Centro de Saúde do Parque Ouro Branco, o presente trabalho teve como objetivo: verificar o nível de conhecimento dos funcionários do Centro de Saúde a respeito dos problemas posturais mais frequentes em escolares de 6 a 14 anos. Os dados foram coletados mediante a aplicaçäo de um questionárioaos funcionários e pela realizaçäo de uma avaliaçäo postural em alunos de 3 escolas da regiäo. Os resultados obtidos possibilitaram concluir que o nível de conhecimento dos funcionários do Centro de Saúde é satisfatório face às sua atividades profissionais e que a maioria dos escolares apresenta algum grau de desvio postural, refletindo a necessidade de se desencadear açöes educativas junto aos funcionários e à populaçäo da regiäo

Caracterizaçäo biológica comparativa das cepas Berenice e Berenice-78 de Trypanosoma cruzi isoladas da mesma paciente em diferentes períodos / Comparative biological characterization of Berenice and Berenice-78 strains of Trypanosoma cruzi isolated from the same patient in different periods

A amostra Berenice-78 de T. cruzi recém-isolada apresentou características bem distintas da cepa Berenice isolada há 16 anos da mesma paciente. Foram verificadas sua alta infectividade e baixa virulência para camundongos C3H isogênicos que sobreviveram à fase aguda da infecçäo. Os parasitas desta cepa apresentaram tropismo para os músculos esquelético e cardíaco, ascensäo gradual da parasitemia ao longo de 25 passagens sangüíneas sucessivas e estabilidade da curva de parasitemia. A cepa Berenice apresentou as mesmas características descritas por Brener, Chiari & Alvarenga (1974) em relaçäo ao tropismo e padräo da curva de parasitemia, sendo no entanto demonstrado que sua virulência para camundongos albinos continua aumentando com o decorrer do tempo. Foram discutidas a possibilidade de reinfecçäo da paciente Berenice e a importância do conhecimento de amostras de T. cruzi de baixa virulência para animais de laboratório