Comparison of in vitro activity of five antifungal agents against dermatophytes, using the agar dilution and broth microdilution methods / Comparação da atividade in vitro de cinco agentes antifúngicos para dermatófitos, usando os métodos de diluição em ágar e microdiluição em caldo

The purpose of this study was to compare the agar dilution and broth microdilution methods for determining the minimum inhibitory concentration (MIC) of fluconazole, itraconazole, ketoconazole, griseofulvin and terbinafine for 60 dermatophyte samples belonging to the species Trichophyton rubrum, Trichophyton mentagrophytes and Microsporum canis. The percentage agreement between the two methods, for all the isolates with < 2 dilutions that were tested was 91.6 percent for ketoconazole and griseofulvin, 88.3 percent for itraconazole, 81.6 percent for terbinafine and 73.3 percent for fluconazole. One hundred percent agreement was obtained for Trichophyton mentagrophytes isolates evaluated with ketoconazole and griseofulvin. Thus, until a reference method for testing the in vitro susceptibility of dermatophytes is standardized, the similarity of the results between the two methods means that the agar dilution method may be useful for susceptibility testing on these filamentous fungi.

O propósito do presente trabalho foi comparar os métodos de diluição em ágar e diluição em caldo para a determinação de concentração inibitória mínima de fluconazol, itraconazol, cetoconazol, griseofulvina e terbinafina para 60 amostras de dermatófitos pertencentes às espécies, Trichophyton rubrum, Trichophyton. mentagrophytes e Microsporum canis. A porcentagem de acordo entre os dois métodos para todos os isolados testados considerando-se valores < 2 diluições, foram de 91,6 por cento para cetoconazol e para griseofulvina, de 88,3 por cento para itraconazol, de 81,6 por cento para terbinafina e de 73,3 por cento para fluconazol. Uma concordância de 100 por cento foi obtido para isolados de Trichophyton mentagrophytes avaliados com cetoconazol e griseofulvina. Desta forma, até que um método de referência seja padronizado para testar a suscetibilidade in vitro para os dermatófitos, os resultados semelhantes encontrados para os dois métodos fazem com que o método de diluição em ágar possa ser útil no teste de suscetibilidade para estes fungos filamentosos.

Susceptibility testing of Candida albicans isolated from oropharyngeal mucosa of HIV+ patients to fluconazole, amphotericin B and Caspofungin: Killing kinetics of caspofungin and amphotericin B against fluconazole resistant and susceptible isolates / Teste de suscetibilidade de Candida albicans isoladas da mucosa orofaringeana de pacientes HIV+, ao fluconazol, anfotericcina B e caspofungina: Cinética de morte de caspofungina e anfotericina B contra isolados fluconazol resistentes e suscetíveis

A clear understanding of the pharmacodynamic properties of antifungal agents is important for the adequate treatment of fungal infections like candidiasis. For certain antifungal agents, the determination of Minimal Fungicidal Concentration (MFC) and time kill curve could be clinically more relevant than the determination of the Minimal Inhibitory Concentration (MIC). In this study, MIC and MFC to fluconazole, amphotericin B and caspofungin against C. albicans isolates and the killing patterns obtained with caspofungin and amphotericin B against susceptible and resistant strains to fluconazole were determined. The results of MICs showed that all C. albicans isolates were highly susceptible to amphotericin B, but two isolates were fluconazole resistant. The comparative analysis between MIC and MFC showed that MFC of fluconazole was fourfold higher than MIC in 41.9% of the C. albicans isolates. Same values of MFC and MIC of amphotericin B and caspofungin were found for 71% of the isolates. Correlation between time kill curves and MFC of amphotericin B and caspofungin against all 4 isolates tested was observed. The caspofungin killing effect was more evident at MFC in 6 hours of incubation than at MIC in this time, suggesting dependence of concentration. The similarity of results of time-kill curve and MFC values indicate that determination of MFC is an alternative for the detection of the fungicidal activity of these drugs.

Um claro entendimento das propriedades farmacodinâmicas dos agentes antifúngicos é de grande importância para o adequado tratamento das infecções fúngicas como a candidíase. Em alguns casos de escolha do agente antifúngico, a determinação da concentração fungicida minima (CFM) e a curva do tempo de morte podem ser mais clinicamente relevantes do que a concentração inibitória minima (CIM). Nesse estudo, foi avaliado a CIM e a CFM de fluconazol, anfotericina B e caspofungina em Candida albicans e ainda os padrões de morte obtidos com caspofungina e anfotericina B de isolados suscetíveis e resistentes ao fluconazol. Os resultados de CIM mostraram que todos os isolados de Candida albicans foram altamente suscetíveis à anfotericina B, entretanto dois isolados foram fluconazol resistentes. A análise comparativa de CIM e da CFM mostrou que o CFM de fluconazol foi quatro vezes superior à CIM para 41,9% dos isolados de Candida albicans. Valores iguais de CFM e CIM de anfotericina B e caspofungina foram encontrados para 71% dos isolados. Correlação entre a curva do tempo de morte e a CFM de anfotericina B e caspofungina contra quatro isolados testados foi observada. O efeito de morte de caspofungina foi mais evidente na CFM até 6 horas de incubação do que na CIM nesse mesmo tempo, sugerindo a dependência da concentração. A similaridade dos resultados da curva do tempo de morte e os valores de CFM indicam que a determinação da CFM é uma escolha alternativa na detecção da atividade fungicida destes agentes antifúngicos.

Molecular epidemiological analysis of bloodstream isolates of candida albicans

Candidemia está geralmente relacionada à microbiota endógena, porém infecções exógenas originadas do staff ou do meio ambiente podem ocorrer. O método de DNA polimórfico amplificado aleatoriamente (RAPD) pode revelar variações específicas do isolado. Neste estudo, foi utilizada a análise de RAPD para avaliar a diversidade genética entre isolados de C. albicans, buscando-se encontrar similaridade entre os padrões de DNA dos isolados obtidos de amostras clínicas e ambientais da unidade de terapia intensiva (UTI) no Hospital das Clínicas da Universidade Federal de Goiás. Os primers denominados Cnd3 (5-CCAGATGCAC-3) e Cnd4 (5-ACGGTACACT-3) foram usados como primer na PCR. Perfis de RAPD do sangue e da urina, provenientes dos mesmos pacientes, mostraram-se idênticos em quase todas as amostras estudadas, exceto na de um paciente. O isolado da cama deste paciente tinha o mesmo genótipo da amostra obtida de seu sangue. Embora a maioria dos isolados de C. albicans provavelmente tivesse origem endógena, o encontro de isolados de pacientes com o mesmo perfil dos isolados do meio ambiente sugere que a candidemia pode resultar de uma fonte exógena.

Ocorrência de fungos filamentosos em acervo da Faculdade de Medicina da Universidade Federal de Goiás / Filamentous fungi in the archive of the Medicine Faculty of the Goias Federal University, Brazil

Microrganismos como fungos, bactérias e outros constituem freqüente ameaça para acervos de bibliotecas e arquivos, assim como para seus usuários, principalmente quando instalados em locais inadequados. A Faculdade de Medicina da Universidade Federal de Goiás abriga, em seu subsolo, uma sala na qual foi instalado um arquivo de livros de registros, classificadores, caixas de documentos e revistas guardados em estantes e armários. Amostras deste arquivo e do ar ambiente da sala foram coletadas para pesquisa de fungos. Foram isolados e identificados, neste estudo, Aspergillus spp, Penicillium spp, Mucor spp. e outros fungos filamentosos, que são amplamente distribuídos no meio ambiente, como solo e ar, e podem infectar o homem, causando doença quando encontram condições favoráveis ao seu desenvolvimento.

Identificação de espécies de Malassezia em pacientes com pitiríase versicolor em Goiânia-GO / Identification of Malassezia species in patients with pityriasis versicolor in Goiânia-GO

O objetivo deste estudo foi verificar a freqüência de pitiríase versicolor e identificar leveduras do gênero Malassezia, de pacientes encaminhados ao laboratório de Micologia da Universidade Federal de Goiás em Goiânia. Foram diagnosticados 95 casos de pitíriase versicolor e identificados quatro espécies de Malassezia: Malassezia furfur, Malassezia sympodialis, Malassezia globosa e Malassezia obtusa.

The objectives of this study were to investigate the frequency of pityriasis versicolor occurrence and to identify yeasts of the genus Malassezia in patients at the mycology laboratory of the Federal University of Goiás, in Goiânia, State of Goiás. Ninety-five cases of pityriasis versicolor were diagnosed, and four species of Malassezia were identified: Malassezia furfur, Malassezia sympodialis, Malassezia globosa and Malassezia obtusa.

Candida colonization in intensive care unit patients' urine

The objective of this study was to identify possible predisposing factors for candiduria in intensive care unit (ICU) patients from Hospital das Clínicas, Universidade Federal de Goiás, Goiânia, Brazil, during one year. Urine samples from 153 ICU patients were obtained by catheterization on admission day and every seven days. Data such as sex, age, antifungal therapy, and variables as antibiotics, underlying diseases or comorbid conditions and stay in the hospital, were collected from patients who had at least one urine culture that yielded > 10³ yeast colonies/ml. Candiduria was recovered in 68 patients and the commonest predisposing factors were antibiotic therapy (100 percent) and indwelling urinary catheter (92.6 percent). The percentage of Candida spp. isolation increased during the extended periods in which patients remained in the ICU. C. albicans was isolated in 69.1 percent, and the other species non-albicans as C. glabrata, C. kefyr, C. parapsilosis, C. famata, C. guilliermondii, C. krusei, and C. tropicalis were isolated in lower percentage. The high frequency of candiduria and the possible predisposing factors found in ICU patients show that candiduria surveillance should be performed to help reducing nosocomial infections.

Identificação de leveduras do gênero Candida nas unhas e em descamação de pele em Goiânia (GO), durante o ano de 2003 / Identification of yeasts of genus Candida on nails and skin desquamation in Goiania (GO), during the year 2003

A candidíase pode ser descrita como a mais freqüente infecção fúngica oportunística. Ela produz lesões que variam de cutâneas a sistêmicas. Embora a Candida albicans seja o agente mais comumente isolado, espécies como C. tropicalis, C. parapsilosis, C. guilliermondii e C. krusei têm sido identificadas como agentes de candidíase. Neste trabalho, foram coletados materiais de lesões superficiais de diferentes regiões do corpo de 2.083 pacientes do Laboratório de Micologia IPTSP-UFG, durante o ano de 2003, para identificação de fungos do gênero Candida. As amostras coletadas foram submetidas a exame direto, usando-se KOH a 40por cento, e cultivadas em ágar Sabouraud dextrose acrescido de cloranfenicol. Os isolados foram identificados por produção de tubo germinativo e clamídoconídios e assimilação de hidratos de carbono. Foram isoladas 190 leveduras do gênero Candida (9,1por cento), entre as quais C. albicans (63,2por cento), C. parapsilosis (14,2por cento) e C. tropicalis (9,5por cento) foram as espécies mais freqüentes. As lesões por Candida foram predominantes nas unhas das mãos (42,1por cento) e dos pés (42,6por cento). Os resultados obtidos mostraram um aumento de C. parapsilosis e C. tropicalis como agentes de candidíase, comprovando a participação de outras espécies não-albicans como patógenos emergentes.

Identificação das leveduras do gênero Candida por métodos manuais convencionais e pelo método cromógeno CHROMagar(TM) Candida / Identification of Candida species by conventional methods and by chromogenic medium CHROMagar(TM) Candida

Diferentes meios cromógenos de cultivo, fundamentados na cor desenvolvida pelas colônias através de indicadores de pH e fermentação de compostos específicos ou substratos cromógenos, têm sido utilizados para diferenciar Candida albicans e outras leveduras de interesse clínico. O meio de cultura CHROMagar Candida é usado para isolar e identificar presuntivamente C. albicans, C. krusei e C. tropicalis. Neste trabalho, o meio cromógeno CHROMagar(TM) Candida foi usado para a identificação de 53 leveduras previamente identificadas por métodos manuais convencionais como Candida albicans(34), C.tropicalis(7), C.krusei(5) C.glabrata(4) e C.parapsilosis(3). Das 34 amostras identificadas por métodos convencionais como C. albicans, 30 (88,2por cento) apresentaram a coloração verde-escura brilhante própria desta espécie no meio cromogênico. As características relativas à coloração e à morfologia, mostradas em CHROMagar Candida, apresentaram-se compatíveis com C. krusei, C. glabrata e C. parapsilosis em todas as amostras estudadas, enquanto 5 dos 7 isolados (71,4por cento) de C. tropicalis apresentaram a coloração azul característica desta espécie. Com os resultados obtidos concluiu-se que o meio CHROMagar Candida pode ser útil na identificação presuntiva das espécies do gênero Candida.

Antifungal activity from Ocimum gratissimum L. towards Cryptococcus neoformans

Cryptococcal infection had an increased incidence in last years due to the explosion of acquired immune deficiency syndrome epidemic and by using new and effective immunosuppressive agents. The currently antifungal therapies used such as amphotericin B, fluconazole, and itraconazole have certain limitations due to side effects and emergence of resistant strains. So, a permanent search to find new drugs for cryptococcosis treatment is essential. Ocimum gratissimum, plant known as alfavaca (Labiatae family), has been reported earlier with in vitro activity against some bacteria and dermatophytes. In our work, we study the in vitro activity of the ethanolic crude extract, ethyl acetate, hexane, and chloroformic fractions, essential oil, and eugenol of O. gratissimum using an agar dilution susceptibility method towards 25 isolates of Cryptococcus neoformans. All the extracts of O. gratissimum studied showed activity in vitro towards C. neoformans. Based on the minimal inhibitory concentration values the most significant results were obtained with chloroformic fraction and eugenol. It was observed that chloroformic fraction inhibited 23 isolates (92 percent) of C. neoformans at a concentration of 62.5 æg/ml and eugenol inhibited 4 isolates (16 percent) at a concentration of 0.9 æg/ml. This screening may be the basis for the study of O. gratissimum as a possible antifungal agent.

Epidemiologia e etiologia das dermatofitoses em Goiânia, GO, Brasil / Epidemiology and etiology of dermatophytosis in Goiânia, GO, Brazil

Dermatophytes are a group of closely related fungi that have the capacity to invade keratinized tissue (skin, hair, and nails) of humans and animals to produce infections called dermatophytosis. In order to review the etiology and epidemiology of dermatophytosis in GoiÔnia, GO, 1955 specimens with diagnostic suspicion of dermatophytic lesions, were collected from January to December, 1999, from the Mycology Laboratory in the Institute of Tropical Pathology and Public Health, Federal University of Goißs. A total of 445 (22.8) samples were positive for dermatophytes and Trichophyton rubrum was the most frequently isolated species (49.4) followed by Trichophyton mentagrophytes (30.8) and Microsporum canis (12.6). Concerning the location of the lesions, the inferior limbs, feet and nails together with tinea capitis were the most frequently found clinical pattern in the majority of patients. Correlation between sex, age, location of the lesions and etiologic agents is considered in the study.

Isolamento e identificação de fungos em farinhas de milho e mandioca em Goiânia (Goiás) / Fungi isolation and identification from corn and manioc flours in Goiânia-Goiás State

A presença de fungos nos alimentos provoca alteraçöes nas suas condiçöes normais e o processo para obtenção das farinhas, alimento muito usado pelos brasileiros, propicia a contaminação por fungos. Assim, este trabalho objetiva verificar a presença de fungos em farinhas de milho e mandioca comercializadas em feiras e supermecados de Goiânia (GO). Para isso, foram coletadas 20 amostras em diferentes regiöes da cidade, com a adoção da técnica de diluição em água peptonada e subsequente cultivo das diluiçöes em ágar batata dextrose. A contagem das unidades formadoras de colônia (u.f.c.) foi realizada utilizando-se a técnica de semeadura em profundidade. De todas as amostras examinadas, observou-se o crescimento de 22 espécies diferentes, sendo que uma mesma espécie cresceu em diferentes amostras, obtendo-se um total de 45 isolados. Em maior percentual encontraram-se as espécies Aspergillus, Rhizopus e Cladosporium. Na análise das unidades formadoras de colônias, verificou-se que todas as amostras examinadas apresentavam-se com valores menores do que 10 4 u.c., o que preconiza o produto, segundo o Ministério da Saúde, como aceitável para consumo. Convém ressaltar, no entanto, que é elevada a contaminação por fungos nas farinhas examinadas e que é necessário um rigoroso controle de qualidade com relação ao armazenamento desses cereais.