Novas observações e perspectivas do uso de lipases na síntase de peptídeos / New observations and perspectives of the use of lipases in the peptide synthesis

Esta tese é composta de estudos realizados com a finalidade de encontrar condições experimentais e gerar informações confiáveis que possam ser utilizadas em síntese de peptídeos mediada por lipases. Inicialmente, foram caracterizadas por eletroforese do tipo PAGE-SDS e medida de atividade em óleo de oliva duas lipases purificadas de candida cylindracea (CCL) e duas pacreáticas suínas, purificada (pPPL) e bruta (cPPL). As CCLs apresentaram atividades lipásicas e graus de purezas superiores às PPLs. Dentre os contaminantes das PPLs, foram identificadas a tripsina e a `alfa´-quimotripsina (`alfa´-QT). Em seguida, foi realizado um estudo sistemático da síntese do dipeptídeo modelo Ac-Tyr-Gly-N`H IND. 2´...

Kinetics of a recombinant protein production by E. coli BL21

Troponina C, TnC, uma proteína do músculo esquelético de galinha, foi produzida em células de Escherichia coli BL21 (DE3) pLysS contendo o cDNA no plasmídio pET sob controle do promotor lac UV5. Neste sistema, a expressäo do gene da TnC depende da presença de uma molécula indutora, o que permitiu a realizaçäo de ensaios com uma fase de crescimento independente da fase de produçäo. O balanço gasoso aplicado à fase de produçäo da TnC em cultivos em biorreator, resultou em um fator de conversäo de oxigênio a células, Yx/o, entre6.5 e 142 mg/mmol, e porcentagem de TnC na célula com relaçäo ao teor de proteína celular, TnC (porcentagem), entre 11.7 e 26.1 por cento, sendo que para os maiores valores de TnC (porcentagem) correspondem aos menores valores de Yx/o. Além disso, para o maior o valor de y no início da fase de induçäo, obteve-se maior valor de TnC (porcentagem). Os dados apresentados indicam que na produçäo de TnC sob controle do gene lac UV5 e promotor de T7 em E.coli, a energia do metabolismo aeróbico é direcionada principalmente à síntese da proteína recombinante com conseqüente reduçäo da atividade de crescimento.