Sporothrix schenckii complex: susceptibilities to combined antifungal agents and characterization of enzymatic profiles / Complexo Sporothrix schenckii: susceptibilidade à combinação de antifúngicos e caracterização dos perfis enzimáticos

SUMMARYSporothrix schenckiiwas reclassified as a complex encompassing six cryptic species, which calls for the reassessment of clinical and epidemiological data of these new species. We evaluated the susceptibility of Sporothrix albicans(n = 1) , S. brasiliensis(n = 6) , S. globosa(n = 1), S. mexicana(n = 1) and S. schenckii(n = 36) to terbinafine (TRB) alone and in combination with itraconazole (ITZ), ketoconazole (KTZ), and voriconazole (VRZ) by a checkerboard microdilution method and determined the enzymatic profile of these species with the API-ZYM kit. Most interactions were additive (27.5%, 32.5% and 5%) or indifferent (70%, 50% and 52.5%) for TRB+KTZ, TRB+ITZ and TRB+VRZ, respectively. Antagonisms were observed in 42.5% of isolates for the TRB+VRZ combination. Based on enzymatic profiling, the Sporothrix schenckiistrains were categorized into 14 biotypes. Leucine arylamidase (LA) activity was observed only for S. albicansand S. mexicana. The species S. globosaand S. mexicanawere the only species without β-glucosidase (GS) activity. Our results may contribute to a better understanding of virulence and resistance among species of the genus Sporothrixin further studies.

RESUMOAvaliou-se a susceptibilidade de Sporothrix albicans(n = 1), S. brasiliensis(n = 1), S. globosa(n = 1), S. mexicana(n = 1) e S. schenckii(n = 36) frente à terbinafina (TRB) e a TRB em combinação com itraconazol (ITZ), cetoconazol (KTZ) e voriconazol (VRZ) pelo método de microdiluição ( checkerboard); o perfil enzimático destas espécies foi também avaliado, com base no kit API-ZYM. A maioria das interações foram aditivas (27,5%, 32,5% e 5%) ou indiferentes (70%, 50% e 52,5%) para TRB+KTZ, TRB+ITZ e TRB+VRZ, respectivamente. Antagonismo foi observado em 42,5% dos isolados para a combinação TRB+VRZ. Com base nos perfis enzimáticos, as cepas de Sporothrix schenckiievidenciaram 14 biotipos distintos. A atividade da leucina arilamidase (LA) só foi observada em S. albicanse S. mexicana.As espécies S. globosae S. mexicanaforam as únicas que não evidenciaram atividade da enzima β-glucosidase (GS). Estes resultados poderão contribuir para um melhor entendimento da virulência e resistência entre as espécies do gênero Sporothrixem futuros estudos.

Synergistic effects of tacrolimus and azole antifungal compounds in fluconazole-susceptible and fluconazole-resistant Candida glabrata isolates

In vitro interaction between tacrolimus (FK506) and four azoles (fluconazole, ketoconazole, itraconazole and voriconazole) against thirty clinical isolates of both fluconazole susceptible and -resistant Candida glabrata were evaluated by the checkerboard microdilution method. Synergistic, indifferent or antagonism interactions were found for combinations of the antifungal agents and FK506. A larger synergistic effect was observed for the combinations of FK506 with itraconazole and voriconazole (43%), followed by that of the combination with ketoconazole (37%), against fluconazole-susceptible isolates. For fluconazole-resistant C. glabrata, a higher synergistic effect was obtained from FK506 combined with ketoconazole (77%), itraconazole (73%), voriconazole (63%) and fluconazole (60%). The synergisms that we observed in vitro, notably against fluconazole-resistant C. glabrata isolates, are promising and warrant further analysis of their applications in experimental in vivo studies.

Susceptibility variation of Malassezia pachydermatis to antifungal agents according to isolate source

Malassezia pachydermatisis associated with dermatomycoses and otomycosis in dogs and cats. This study compared the susceptibility of M. pachydermatis isolates from sick (G1) and healthy (G2) animals to azole and polyene antifungals using the M27-A3 protocol. Isolates from G1 animals were less sensitive to amphotericin B, nystatin, fluconazole, clotrimazole and miconazole.

Candida dubliniensis does not show phospholipase activity: true or false? / Candida dubliniensis não evidencia atividade fosfolipásica: verdadeiro ou falso?

INTRODUCTION: The phospholipase activity in Candida albicans and Candida dubliniensis isolated from oral candidiasis cases were studied. METHODS: The phospholipase activity was evaluated in egg yolk agar. RESULTS: All the C. albicans isolates (n = 48) showed phospholipase activity (mean Pz = 0.66). However, none of the C. dubliniensis isolates (n = 24) showed this activity. CONCLUSIONS: The authors discuss whether these findings are a true characteristic of C. dubliniensis or a consequence of the methodology employed, which includes the possibility that NaCl may have inhibited the enzymatic activity of C. dubliniensis.

INTRODUÇÃO: Avaliou-se a atividade fosfolipásica em Candida albicans e Candida dubliniensis isoladas de casos de candidíase oral. MÉTODOS: A atividade de fosfolipase foi avaliada em ágar gema de ovo. RESULTADOS: Todos os isolados de C. albicans (nº = 48) evidenciaram atividade fosfolipásica (média Pz = 0.66). Todavia, nenhum isolado de C. dubliniensis (nº= 24) demonstrou esta atividade. CONCLUSÕES: Os autores discutem se estes achados são uma característica verdadeira de C. dubliniensis ou uma conseqüência da metodologia empregada, a qual inclui a possibilidade de que o NaCl seja inibidor da atividade enzimática de C. dubliniensis.

Reavaliação da suscetibilidade de Candida à anfotericina B: estudo comparativo com isolados de três hospitais do estado do Rio Grande do Sul / Reevaluation of Candida susceptibility to amphotericin B: comparative study using isolates from three hospitals in the state of Rio Grande do Sul

Comparou-se a suscetibilidade à anfotericina B de Candida spp isoladas de candidemias, sendo: 41 do Hospital Universitário de Santa Maria, 56 do Hospital de Clínicas de Porto Alegre e 47 da Santa Casa, Complexo Hospitalar de Porto Alegre. Os testes foram baseados no documento M27-A2 do Clinical Laboratory Standards Institute. Todavia, foram empregadas 20 concentrações de anfotericina B, variáveis entre 0,1 e 2µg/ml. Os testes foram realizados nos meios RPMI 1640 com glicose, antibiotic medium 3 e yeast nitrogen base dextrosado. O caldo antibiotic medium 3 gerou amplas faixas de concentrações inibitórias mínimas e concentrações fungicidas mínimas quando comparado aos demais. As variações de suscetibilidade entre os hospitais foram melhor detectadas no antibiotic médium 3; os isolados do Hospital Universitário de Santa Maria evidenciaram menor sensibilidade do que os da Santa Casa, Complexo Hospitalar de Porto Alegre (p < 0,05). As causas das variações de suscetibilidade não foram avaliadas mas apontam para a necessidade de vigilância da suscetibilidade a anfotericina B.

Susceptibility to amphotericin B was compared between isolates of Candida spp that were obtained from candidemia cases as follows: 41 from Hospital Universitário de Santa Maria, 56 from Hospital de Clínicas, Porto Alegre, and 47 from the Santa Casa hospital complex, Porto Alegre. The tests were based on the document M27-A2 from the Clinical Laboratory Standards Institute, but with 20 concentrations of amphotericin B ranging from 0.1 to 2mg/ml. The tests were carried out using RPMI 1640 medium with glucose, antibiotic medium 3 and yeast nitrogen base-dextrose. The antibiotic medium 3 broth generated wide ranges of minimum inhibitory concentrations and minimum fungicidal concentrations in relation to the other agents. The variations in susceptibility between the hospitals were best detected in antibiotic medium 3. The isolates from Hospital Universitário de Santa Maria showed lower susceptibility than did those from the Santa Casa hospital complex, Porto Alegre (p < 0.05). The causes of the susceptibility variations were not assessed but they indicate the need for surveillance regarding the susceptibility to amphotericin B.

Enzymatic and hemolytic activities of Candida dubliniensis strains

Candida dubliniensis is an opportunistic yeast that has been recovered from several body sites in many populations; it is most often recovered from the oral cavities of human immunodeficiency virus-infected patients. Although extensive studies on epidemiology and phylogeny of C. dubliniensis have been performed, little is known about virulence factors such as exoenzymatic and hemolytic activities. In this study we compared proteinase, hyaluronidase, chondroitin sulphatase and hemolytic activities in 18 C. dubliniensis and 30 C. albicans strains isolated from AIDS patients. C. albicans isolates produced higher amounts of proteinase than C. dubliniensis (p < 0.05). All the tested C. dubliniensis strains expressed hyaluronidase and chondroitin sulphatase activities, but none of them were significantly different from those observed with C. albicans (p > 0.05). Hemolytic activity was affected by CaCl2; when this component was absent, we did not notice any significant difference between C. albicans and C. dubliniensis hemolytic activities. On the contrary, when we added 2.5 g percent CaCl2, the hemolytic activity was reduced on C. dubliniensis and stimulated on C. albicans tested strains (p < 0.05).

C. dubliniensis é uma levedura oportunista que, embora já tenha sido isolada de vários sítios anatômicos é, com maior frequência, encontrada na boca de pacientes infectados pelo HIV. Embora tenham sido realizados numerosos estudos sobre a epidemiologia e filogenia, seus fatores de virulência como atividade exoenzimática e atividade hemolítica, são, ainda, pouco conhecidos. Neste estudo comparou-se a atividade in vitro de proteinase, hialuronidase, condroitin sulfatase e atividade hemolítica de 18 cultivos de C. dubliniensis com 30 cultivos de C. albicans, todos isolados de pacientes com SIDA. Foi evidenciada maior atividade de proteinase em C. albicans em relação a C. dubliniensis (p < 0,05). Todos os isolados de C. dubliniensis evidenciaram atividade de hialuronidase e condroitin-sulfatase de forma similar ao observado com C. albicans (p > 0,05). Constatou-se que a atividade hemolítica foi influenciada pelo CaCl2; em sua ausência não foram observadas diferenças na atividade hemolítica das duas espécies; todavia, ao se agregar 2,5 por cento de CaCl2, a atividade hemolítica de C. dubliniensis foi reduzida enquanto a de C. albicans, estimulada (p < 0,05).

Comparison among tomato juice agar with other three media for differentiation of Candida dubliniensis from Candida albicans

O presente estudo teve como objetivo comparar o ágar suco de tomate, um tradicional meio utilizado para observação de ascósporos em leveduras, com o ágar semente de niger, ágar caseína e ágar semente de girassol, na diferenciação fenotípica entre C. albicans e C. dubliniensis. Após 48 h de incubação a 30 ºC, os 26 isolados de C. dublinienis (100%) evidenciaram a formação de clamidoconídios igualmente em todos os meios comparados. Entretanto, quando semeados com C. albicans, a formação de clamidoconídios foi raramente observada, resultando nos seguintes percentuais de ausência destas estruturas: ágar suco de tomate (92,47%), ágar niger (96,7%), ágar caseína (91,39%), ágar semente de girassol (96,7%). Estes resultados permitem-nos sugerir a utilização do ágar suco de tomate como mais um meio que, já no primo-isolamento, é capaz de, presuntivamente, diferenciar C. albicans de C. dubliniensis.

Utilizacão do ágar suco de tomate (ágar V8) na identificacão presuntiva de Candida dubliniensis / Utilization of tomato juice agar (V8 agar) in the presumptive identification of Candida dubliniensis

Avaliou-se a capacidade do ágar suco de tomate (ágar V8) em diferenciar Candida dubliniensis de Candida albicans com base na producão de clamidoconídios. Noventa e três isolados de Candida albicans e vinte e seis de Candida dubliniensis foram incluídos; 100 por cento de Candida dubliniensis formaram clamidoconídios e 92,5 por cento de Candida albicans não evidenciaram estas estruturas. Estes resultados permitem sugerir este meio como recurso alternativo na identificacão presuntiva de Candida dubliniensis.