Factors related to decreased vitamin D levels in men with spinal cord injury living in a subtropical region / Fatores relacionados a níveis reduzidos de vitamina D em homens com lesão da medula espinhal vivendo em uma região subtropical

AIMS: To evaluate the levels of vitamin D, parathyroid hormone and calcium in individuals with spinal cord injury and to identify related factors. METHODS: A cross-sectional study included men with spinal cord injury, living in the South Region of Brazil. A questionnaire was applied to evaluate socioeconomic data, life habits and health. The time elapsed since the spinal cord injury was considered. Vitamin D was evaluated in plasma via liquid chromatography; calcium and PTH were measured in serum by a colorimetric method and electrochemiluminescence respectively. For data analysis, linear regression and chi-square test were utilized. Values of p<0.05 were considered significant. RESULTS: The study included 39 paraplegic or tetraplegic men with spinal cord injury. The mean age was 35.52±9.78 years, and the mean time since injury was 6.09±5.55 years. The mean biochemical levels were: 19.0 ±6.98 ng/mL for vitamin D; 9.54±0.52 mg/dL for total calcium; and 34.81±10.84 pg/mL for parathyroid hormone. Individuals with sun exposure for more than two hours daily had higher vitamin D levels than those exposed up to one hour per day (p=0.001). Linear regression identified an inverse relationship between lesion time and vitamin D levels (regression coefficient: -0.424; p=0.029), while the other parameters did not show significant differences regarding the time elapsed since the lesion. Subjects with income above four minimum wages had higher vitamin D values (mean 25.67±5.45 ng/mL) when compared to those with income up to four minimum wages (mean 18.43±6.79 ng/mL) (p=0.021). CONCLUSIONS: Levels of vitamin D were inversely correlated to the time elapsed since the spinal cord injury, probably due to insufficient sun exposure resulting from prolonged limitation of mobility. In addition, lower levels of vitamin D were associated to lower income. These factors may aggravate bone loss associated with decreased mobility resulting from spinal cord injury.

OBJETIVOS: Avaliar os níveis de vitamina D, hormônio paratireoide e cálcio em indivíduos com lesão medular e identificar fatores relacionados. MÉTODOS: Estudo transversal incluiu homens com lesão da medula espinhal, vivendo na Região Sul do Brasil. Foi aplicado um questionário para avaliar dados socioeconômicos, hábitos de vida e saúde. Foi investigado o tempo transcorrido após a lesão medular. A vitamina D foi avaliada no plasma por meio de cromatografia líquida; o cálcio e o hormônio paratireoideo foram dosados no soro por um método colorimétrico e eletroquimioluminescência respectivamente. Para a análise de dados, foram utilizadas regressão linear e teste do qui-quadrado. Valores de p<0,05 foram considerados significativos. RESULTADOS: O estudo incluiu 39 homens paraplégicos ou tetraplégicos com lesão da medula espinhal. A média de idade foi de 35,52±9,78 anos e o tempo médio de lesão foi de 6,09±5,55 anos. As médias dos níveis bioquímicos foram: 19,0±6,98 ng/mL para vitamina D, 9,54±0,52 mg/dL para cálcio total e 34,81±10,84 pg/mL para hormônio paratireoideo. Indivíduos com exposição ao sol por mais de duas horas por dia apresentaram maiores níveis de vitamina D do que os expostos até uma hora por dia (p=0,001). A regressão linear identificou uma relação inversa entre o tempo de lesão e os níveis de vitamina D (coeficiente de regressão: -0,424; p=0,029), enquanto os outros parâmetros não apresentaram diferença significativa em relação ao tempo decorrido desde a lesão. Os indivíduos com renda acima de quatro salários mínimos apresentaram maiores valores de vitamina D (média de 25,67±5,45 ng/mL) quando comparados com aqueles com renda até quatro salários mínimos (média 18,43±6,79 ng/mL) (p=0,021). CONCLUSÕES: Os níveis de vitamina D foram inversamente correlacionados com o tempo decorrido desde a lesão da medula espinhal, provavelmente devido à exposição insuficiente ao sol resultante da limitação prolongada da mobilidade. Níveis mais baixos de vitamina D foram associados a menor renda. Estes fatores podem agravar a perda óssea associada à diminuição da mobilidade resultante da lesão da medula espinhal.

Hepcidin serum levels in HCV chronically mono-infected naïve patients, compared to healthy individuals

Introduction: Metabolism of iron is altered in patients infected with chronically Hepatitis C. The aim of this study is to compare compare the hepcidin levels in between individuais chronically infected with HCV and uninfected individuals. The aim of this study is to compare the hepcidin serum levels between individuals chronically infected with HCV and uninfected individuals. Methods: A cross-sectional study evaluating hepcidin serum levels of mono-infected HCV (n=29), naive, non-diabetic, non-cirrhotic and non-obese patients by means of ELISA, compared to uninfected patients (n=9) with the same characteristics. The degree of liver fibrosis, according to the METAVIR scale on liver biopsies, the lipid profile, the resistance insulin level, as calculated on HOMA-IR (homeostatic model assessment for insulin resistance), the interleukin-6 (IL-6) and the ferritin serum levels were also measured. Results: The levels of hepcidin were significantly lower in HCV patients compared to controls (8.4 pg/mL (±4.94) vs. 19.51 pg/mL (±5.51)) with p<0.001. The levels of ferritin and hepcidin did not show any relation. There was no difference between hepcidin levels in relation to viral genotype, viral load, IL-6 and degrees of fibrosis within HCV infected individuals. Conclusion: It is possible that hepatic iron overload in this population is explained by suppressed levels of hepcidin in patients with HCV. (AU)

Histological markers of degeneration and regeneration of the human intervertebral disk / Marcadores histológicos de degeneração e regeneração do disco intervertebral humano / Marcadores histológicos de la degeneración y regeneración del disco intervertebral humano

ABSTRACT Objective: To define histological scores for intervertebral disc degeneration that would enable the definition of morphological characteristics of disease, besides improving knowledge of the lumbar degenerative disc disease by means of immunohistochemical markers. Methods: Hematoxylin and Eosin, Alcian/PAS, Masson Trichrome and Safranin O/FCF staining was used on the intervertebral disc degeneration sections of patients with lumbar degenerative disc disease. The protein markers defined in immunohistochemistry were cell proliferation (Ki-67) and apoptosis (p53). Results: The study data enabled the determination of Safranin O/FCF stain as the most effective one for evaluating parameters such as area, diameter, and number of chondrocyte clusters. The importance of using stains in association, such as Safranin O/FCF, Masson Trichrome, Alcian/PAS and Hematoxylin and Eosin, was also determined, as they are complementary for the histopathological verification of intervertebral disc degeneration. By expressing proteins using the immunohistochemistry technique, it was possible to consider two stages of disc degeneration: cell proliferation with chondrocyte cluster formation, and induction of apoptosis. Conclusion: This study enabled the histological and immunohistochemical characterization to be determined for lumbar degenerative disc disease, and its degrees of evolution, by determining new disc degeneration scores.

RESUMO Objetivo: Definir escores histológicos de degeneração do disco intervertebral que permitam a identificação de características morfológicas da doença, além de melhorar o conhecimento sobre a discopatia degenerativa lombar por meio de marcadores imuno-histoquímicos. Métodos: As colorações histológicas de hematoxilina e eosina, azul de alcian/PAS, tricrômica de Masson e safranina O/FCF foram utilizadas em cortes de disco intervertebral degenerado de pacientes com discopatia degenerativa lombar. Os marcadores proteicos definidos na imuno-histoquímica permitiram a avaliação da proliferação celular (Ki-67) e da apoptose (p53). Resultados: Os dados do estudo permitiram a determinação da coloração de safranina O/FCF como a mais eficaz para avaliar os parâmetros tais como a área, o diâmetro e o número de agrupamentos de condrócitos. Também se determinou a importância do uso das colorações histológicas de forma associada, como safranina O/FCF, tricrômica de Masson, azul de alcian/PAS e hematoxilina e eosina, uma vez que elas são complementares para a verificação histopatológica da degeneração do disco intervertebral. Pela técnica da expressão de proteínas com técnica imuno-histoquímica, foi possível considerar dois estágios de degeneração do disco: proliferação de células com a formação de agrupamentos de condrócitos, seguida pela indução de apoptose. Conclusão: Este estudo permitiu definir a caracterização histológica e imuno-histoquímica em discopatia degenerativa lombar e seus graus de evolução, determinando novos escores de degeneração discal.

RESUMEN Objetivo: Definir valores histológicos de degeneración del disco intervertebral que permitan la definición de las características morfológicas de la enfermedad y mejorar el conocimiento de la enfermedad degenerativa del disco lumbar mediante marcadores inmunohistoquímicos. Métodos: Las coloraciones histológicas con hematoxilina y eosina, azul alcián/PAS, tricrómico de Masson y safranina O/FCF se utilizaron en secciones de los discos intervertebrales degenerados de pacientes con enfermedad degenerativa del disco lumbar. Los marcadores de proteínas definidos por inmunohistoquímica permitieron la evaluación de la proliferación celular (Ki-67), y la apoptosis (p53) . Resultados: Los datos de la determinación permitieron establecer la tinción con safranina O/FCF como la más eficaz para evaluar parámetros tales como el área, diámetro y número de agrupaciones de condrocitos. Se determinó también la importancia del uso asociado de diversas tinciones, como safranina O/FCF, tricrómico de Masson, azul de alcián/PAS y hematoxilina y eosina, ya que son complementarias para la verificación histopatológica de la degeneración del disco intervertebral. Por la técnica de la expresión de proteína con análisis inmunohistoquímica, fue posible establecer dos etapas de la degeneración del disco: la proliferación de células con la formación de agrupaciones de condrocitos y la inducción de la apoptosis. Conclusión: Este estudio permitió definir la caracterización histológica e inmunohistoquímica en la enfermedad degenerativa del disco lumbar y sus grados de evolución, mediante la determinación de nuevas puntuaciones de degeneración del disco.

Effect of standard and neutral-pH peritoneal dialysis solutions upon fibroblasts proliferation / Efeito da solução de diálise peritoneal com pH neutro e padrão sobre a proliferação de fibroblastos

Introduction: Continuous exposition of the peritoneal membrane to conventional dialysis solutions is an important risk factor for inducing structural and functional alterations. Objective: To compare in vitro mouse fibroblast NIH-3T3 cell viability after exposition to a neutral pH dialysis solution in comparison to cells exposed to a standard solution. Methods: Experimental study to compare the effects of a conventional standard or a neutral-pH, low-glucose degradation products peritoneal dialysis solution on the viability of exposed fibroblasts in cell culture. Both solutions were tested in all the commercially available glucose concentrations. Cell viability was evaluated with tetrazolium salt colorimetric assay. Results: Fibroblast viability was significantly superior in the neutral pH solution in comparison to control, in all three glucose concentrations (Optical density in nm-means ± SD: 1.5% 0.295 ± 0.047 vs. 0.372 ± 0.042, p < 0.001; 2.3% 0.270 ± 0.036 vs. 0.337 ± 0.051, p < 0.001; 4.25% 0.284 ± 0.037 vs. 0.332 ± 0.032, p < 0.001; control vs. neutral pH respectively, Student t Test). There was no significant difference in cell viability between the three concentrations of glucose when standard solution was used (ANOVA p = 0.218), although cell viability was higher after exposition to neutral pH peritoneal dialysis fluid at 1.5% in comparison to 2.3 and 4.25% glucose concentrations (ANOVA p = 0.008: Bonferroni 1.5% vs. 2.3% p = 0.033, 1.5% vs. 4.25% p = 0.014, 2.3% vs. 4.25% p = 1.00). Conclusion: Cell viability was better in neutral pH dialysis solution, especially in the lower glucose concentration. A more physiological pH and lower glucose degradation products may be responsible for such results. .

Introdução: A exposição contínua da membrana peritoneal a soluções convencionais de diálise é um importante fator de risco para induzir alterações estruturais e funcionais. Objetivo: Comparar a viabilidade in vitro dos fibroblastos NIH-3T3 de camundongo após exposição à solução de diálise com pH neutro com células expostas à solução padrão. Métodos: Estudo experimental; ambas as soluções foram testadas em todas as concentrações de glicose comercialmente disponíveis. A viabilidade celular foi avaliada por ensaio colorimétrico de sal tetrazólio. Resultados: A viabilidade de fibroblastos foi melhor na solução de pH neutro em relação ao controle nas três concentrações de glicose (densidade óptica em nm-médias ± DP: 1,5% 0,295 ± 0,047 vs. 0,372 ± 0,042, p < 0,001; 2,3% 0,270 ± 0,036 vs. 0,337 ± 0,051, p < 0,001; 4,25% 0,284 ± 0,037 vs. 0,332 ± 0,032, p < 0,001; controle vs. pH neutro respectivamente, teste t de Student). Não houve diferença significativa na viabilidade celular entre as três concentrações de glicose quando solução padrão foi utilizada (ANOVA p = 0,218), embora a viabilidade celular tenha sido superior após exposição aos fluidos de diálise peritoneal neutros, pH 1,5% em comparação com 2,3 e 4,25% de concentrações de glicose (ANOVA p = 0,008: Bonferroni 1,5% vs. 2,3% p = 0,033, 1,5% vs. 4,25% p = 0,014, 2,3% vs. 4,25% p = 1,0). Conclusão: A viabilidade celular foi melhor em solução neutra de pH de diálise, especialmente nas menores concentrações de glicose. O pH fisiológico e com menos produtos de degradação de glicose podem ser responsáveis por estes resultados. .

Treinamento de força de intensidade progressiva não altera a pressão arterial pós-exercício de idosos hipertensos / Strength training of progressive intensity does not alter post-exercise blood pressure of hypertensive elderly

Embora o interesse em estudar os efeitos dos exercícios de força na pressão arterial pós-exercício tenha aumentado, as pesquisas relacionados a esse assunto ainda são escassas na população de idosos hipertensos. Dessa forma, o presente estudo tem como objetivo avaliar os efeitos do treinamento de força de volume e intensidade progressiva, nas respostas da pressão arterial pós-exercício, em idosos hipertensos. A amostra foi composta por oito idosos de ambos os sexos, fisicamente ativos, controlados por medicação anti-hipertensiva. A pressão arterial foi verificada pelo método auscultatório antes e após uma sessão de exercícios de força, durante 60 minutos. O programa de treinamento utilizou cargas de trabalho submáximas, onde as intensidades de treinamento foram definidas por tentativa e erro, ajustadas de acordo com a dificuldade apresentada por cada indivíduo para completar o número de repetições planejadas. As intensidades foram definidas como: submáxima pesada, submáxima média e submáxima leve. A série submáxima pesada foi caracterizada como o peso máximo levantado suavemente, sem apneia e isometria, a série submáxima média e submáxima leve utilizou aproximadamente 75% e 50% da carga utilizada para realizar a série submáxima pesada, respectivamente. Os exercícios de força envolveram os principais músculos da parte superior e inferior do corpo, realizados na seguinte ordem: uma série de 12 repetições na intensidade submáxima leve, uma série de 10 repetições na intensidade submáxima média e duas séries de oito repetições na intensidade submáxima pesada, obedecendo ao intervalo de recuperação de 60 segundos entre as séries... Assim, os programas de treinamento de força de intensidade progressiva demonstram ser este um campo aberto a investigações, devido à carência de estudos e controvérsia existentes.

Although the interest in studying the effects of strength training in post-exercise blood pressure has increased, research related to this subject are scarce in hypertensive elderly The sample was composed of eight patients of both sexes, physically active, controlled by antihypertensive medication. Blood pressure was measured by auscultation before and after a session of strength exercises for 60 minutes. The training program used submaximal workloads, where the intensity of training were set by trial and error, adjusted according to the difficulty presented by each individual to complete the number of repetitions planned. The intensities were defined as submaximal heavy submaximal and light submaximal average. The series submaximal heavy been characterized as the maximum weight lifted smoothly without apnea and isometry, the average number submaximal, slightly submaximal, and used approximately 75% and 50% of the load range used to perform the heavy submaximal respectively. Strength exercises involving the major muscles of the upper and lower body, performed in the following order: a series of 12 repetitions at light submaximalintensity, a series of 10 repetitions at submaximal average and two series of eight repetitions at heavy submaximal, following the recovery interval of 60 seconds between sets. The results showed no elevations or decrease in systolic and diastolic blood pressure after a session of strength training volume and gradually intensity. So the strength training programs of intensity progressively, proving to be an open field for investigation, due to the lack of existing studies and controversy.

Stem-cell treatment in disc degeneration: What is the evidence? / Células tronco no tratamento de doença degenerativa discal: Qual é a evidência? / Células madre en el tratamiento de degeneración de disco: ¿Cual es la evidencia?

To review the potential role of stem cells in treating degenerative disc disease of the intervertebral disc (IVD). A review was performed of articles from the Medline database concerning stem cells and degenerative disc disease (DDD). To discuss the data, the papers were classified as: review, in vitro, experimental, and clinical. The currently available treatments were basically for symptom reduction, not to revert the IVD degenerative process. The use of mesenchymal stem cells (MSC) is being proposed as an option of treatment for DDD. In vitro studies have shown that the MSC are able to differentiate into NP cells and that the MSC also reduce the inflammatory levels of the degenerated IVD. Besides, experimental studies demonstrated that the MSC remained viable when injected into the IVD, and that they were able to regenerate partially from the degenerated IVD and its structure. The few clinical studies found in the literature presented diverging results. The use of MSC is being widely studied and shows promising results for the treatment of DDD. Although many advances are being achieved in studies in vitro and experimental, there is a lack of clinical studies to prove the role of MSC in DDD management.

Revisar o potencial papel das células-tronco para o tratamento de doença degenerativa do disco intervertebral (IVD). Foi realizada uma revisão dos trabalhos da base de dados Medline em relação a células-tronco e doença degenerativa discal (DDD). Para fins de discussão dos dados, os trabalhos foram divididos em: revisão, in vitro, experimentais e clínicos. Os tratamentos disponíveis atualmente focam basicamente na redução dos sintomas, e não na reversão do processo degenerativo do DIV. O uso de células-tronco mesenquimais (CTM) vem sendo proposto como uma opção de tratamento para DDD. Estudos in vitro demonstraram que as CTM são capazes de se diferenciarem em células do NP e que as CTM também diminuem os níveis inflamatórios do DIV degenerado. Além disso, estudos experimentais demonstraram que as CTM permaneciam viáveis quando injetadas no DIV e que eram capazes de regenerar parcialmente do DIV degenerado e sua estrutura. Os poucos estudos clínicos presentes na literatura apresentam resultados divergentes. O uso de CTM esta sendo amplamente estudado e mostra resultados promissores para o tratamento da DDD. Embora muitos avanços venham sendo alcançados em estudos in vitro e experimentais, ainda faltam estudos clínicos para comprovar o papel das CTM no manejo da DDD.

Revisar el papel potencial de las células madre en el tratamiento de la enfermedad degenerativa del disco intervertebral (IVD). Se realizó una revisión de los artículos de la base de datos Medline sobre células madre y la enfermedad degenerativa del disco (DDD). Para fines de discusión de los datos, los trabajos se dividieron en: revisión, in vitro, experimentales y clínicos. Los tratamientos disponibles actualmente enfocan básicamente la reducción de los síntomas, y no la reversión del proceso degenerativo del IVD. El uso de células madre mesenquimales (MSC) se propone como una opción de tratamiento para DDD. Estudios in vitro demostraron que las MSC son capaces de diferenciarse en células NP y que las MSC también reducen los niveles inflamatorios de la IVD degenerado. Además, estudios experimentales demostraron que las MSC se mantuvieron viables cuando inyectadas en el IVD y que eran capaces de regenerarse parcialmente del IVD degenerado y su estructura. Los pocos estudios clínicos presentes en la literatura presentan resultados divergentes. El uso de MSC se está estudiando ampliamente y muestra resultados prometedores en el tratamiento de la DDD. Aunque se hayan logrado muchos avances en estudios in vitro y experimentales, aún faltan estudios clínicos para comprobar el papel de las MSC en el manejo de la DDD.

Osteoinduction of human bone marrow cells: an in vitro study / Introdução osteogênica de células da medula óssea humana: um estudo in vitro

Objective: This study evaluated the osteogenic induction of human bone marrow cells by human recombinant bone morphogenetic protein-4 (rhBMP-4) and proteins released by Saos-2 (human osteosarcoma cell line). Study design: Osteoinduction in the presence or absence of Saos-2 and/or rhBMP-4 was evaluated in cultured human bone marrow cells. Morphological aspects and bone protein markers (osteonectin, osteopontin, and osteocalcin) were analyzed on days 1, 2, 5, 8, 11 and 14. Osteonectin expression was evaluated using immunohistochemistry with anti-secreted protein acidic and rich in cystein (anti-SPARC) antibody. mRNA transcripts for osteopontin were determined using RT-PCR with specific primers. Results: Bone marrow cells were adherent since the first day of culture and were positive for osteonectin. mRNA transcripts were detected in all culture conditions since the first day of culture. As human osteosarcoma cells are a source of additional growth they did not affect osteoinduction. rhBMP-4 up regulates osteoinduction during the first days of culture only. Osteoblasts were obtained from human bone marrow cells even in the absence of growth factors and showed a typical morphology. Cells derived from bone marrow can undergo osteoinduction in vitro in the absence of osteoinductive factors such as bone morphogenetic proteins. Conclusions: This study showed that an osteoblastic cell lineage may be obtained from human bone marrow derived from adherent cells, and that the presence of the rhBMP-4 seems to have an effect during the first stages of differentiation only.

Adipose tissue mature stem cells in skin healing: a controlled randomized study / Uso de células-tronco adultas de tecido adiposo na cicatrização da pele: estudo controlado, randomizado

BACKGROUND: The differences between fetal and adult scars suggest the possibility of manipulating skin scarring outcomes. This study aimed to assess whether the use of adult stem cells from adipose tissue is beneficial to skin healing. METHODS: This was a randomized controlled study for which 18 patients were selected based on inclusion and exclusion criteria. The adult stem cells used were autologous and were extracted from infraumbilical adipose tissue prior to abdominoplasty. These cells were implanted into the surgical wound dermis in the suprapubic region before skin synthesis. The results were assessed blindly based on the Draaijers scale by three physicians and by the patients themselves in a self-assessment. Photometric assessment by digital photography was also performed. RESULTS: Among the 18 operated patients, considering the surgical result, 17 (94.4 percent) had excellent or good results and one (5.5 percent) had wound dehiscence, which was considered a bad result. Considering skin healing in the searched area, there was no statistically significant difference in the photometric evaluation; in both the self-assessment by the patients and the physicians' assessment, the results were significantly in favor of intervention with stem cells (P = 0.12 and P = 0.003, respectively). Consideration of all assessments (physicians, patients and photometric) found a statistically significant difference in favor of the implantation of adult stem cells from adipose tissue (P <0.001). CONCLUSIONS: Skin healing results after implantation of adult stem cells derived from adipose tissue were satisfactory.

INTRODUÇÃO: Fatores que diferenciam a cicatrização fetal e a do adulto instigam a possibilidade de manipulação das soluções de continuidade da pele. Este estudo teve como objetivo avaliar se o uso de células-tronco adultas do tecido adiposo é benéfico à cicatrização da pele. MÉTODO: Estudo controlado, randomizado, para o qual foram selecionadas 18 pacientes, considerando-se critérios de inclusão e exclusão. As células-tronco adultas utilizadas eram autólogas, extraídas do tecido adiposo da região infraumbilical, precedendo a realização da abdominoplastia. Essas células, antes da síntese da pele, foram implantadas na derme da ferida operatória, na região suprapúbica. A avaliação dos resultados foi realizada com base na escala de Draaijers, por três avaliadores médicos cegados, e pelas próprias pacientes, por autoavaliação. Foi realizada, também, avaliação fotométrica por fotografia digital. RESULTADOS: Dentre as 18 pacientes operadas, sob o ponto de vista cirúrgico, 17 (94,4 por cento) apresentaram resultados excelentes ou bons e uma (5,5 por cento) apresentou deiscência de sutura, considerado mau resultado. Quanto à cicatrização da pele na área pesquisada, à avaliação fotométrica, não houve diferença estatisticamente significante; à autoavaliação pelas pacientes, os resultados atingiram nível de significância a favor da intervenção com células-tronco (P = 0,12); e à avaliação pelos médicos, foi atingido nível de significância a favor da intervenção por células-tronco (P = 0,003). Considerando-se todas as avaliações realizadas (médicos, pacientes e fotométrica), foi encontrada diferença estatisticamente significante favorável ao implante de células-tronco adultas do tecido adipose (P < 0,001). CONCLUSÕES: Os resultados da cicatrização da pele, após implante de células-tronco adultas derivadas de tecido adiposo, foram satisfatórios.

Use of calcium phosphate cement scaffolds for bone tissue engineering: in vitro study / A utilização do cimento de fosfato de cálcio como arcabouço para engenharia de tecido ósseo: estudo in vitro

Purpose: To evaluate the ability of macroporous tricalcium phosphate cement (CPC) scaffolds to enable the adhesion, proliferation, and differentiation of mesenchymal stem cells derived from human bone marrow. Methods: Cells from the iliac crest of an adult human donor were processed and cultured on macroporous CPC discs. Paraffin spheres sized between 100 and 250µm were used as porogens. Cells were cultured for 5, 10, and 15 days. Next, we assessed cells' behavior and morphology on the biomaterial by scanning electron microscopy. The expression levels of the BGLA and SSP1 genes and the alkaline phosphatase (ALP) activity were quantified by the quantitative real-time polymerase chain reaction technique (QT-PCR) using the fluorophore SYBR GREEN®. Results: QT-PCR detected the expression of the BGLA and SSP1 genes and the ALP activity in the periods of 10 and 15 days of culture. Thus, we found out that there was cell proliferation and differentiation in osteogenic cells. Conclusion: Macroporous CPC, with pore sized between 100 and 250µm and developed using paraffin spheres, enables adhesion, proliferation, and differentiation of mesenchymal stem cells in osteogenic cells and can be used as a scaffold for bone tissue engineering.

Objetivo: Avaliar a capacidade de suportes tridimensionais macroporosos de cimento de fosfato de cálcio (CFC), de permitir a adesão, proliferação e diferenciação de células-tronco mesenquimais derivadas da medula óssea humana. Métodos: células obtidas da crista ilíaca de um doador humano adulto foram processadas e cultivadas sobre suportes de CFC, macroporosos, que tiveram como corpo gerador de poros, microesferas de parafina, com tamanho entre 100 e 250µm. Os períodos de cultura estabelecidos foram de cinco, 10 e 15 dias. Após estes períodos, o comportamento e a morfologia das células junto ao biomaterial foram avaliados por meio de Microscopia Eletrônica de Varredura. Os níveis de expressão dos genes BGLA e SSP1 bem como a atividade da Fosfatase Alcalina (ALP) foram quantificados pela técnica de PCR em Tempo Real (QT-PCR) utilizando o fluoróforo SYBR Green®. Resultados: O QT-PCR detectou a expressão dos genes BGLA e SSP1 e a atividade da fosfatase alcalina nos períodos de 10 e 15 dias de cultura. No período de cinco dias, não foi observada a expressão de nenhum dos genes investigados. Conclusão: O CFC, macroporoso, com tamanho de poros entre 100 e 250µm, criados por meio da utilização de microesferas de parafina, permite a adesão, proliferação e diferenciação de células-tronco mesenquimais em células osteogênicas, podendo ser utilizado como arcabouço para engenharia de tecido ósseo.

Prevalência da síndrome metabólica em indígenas com mais de 40 anos no Rio Grande do Sul, Brasil / Prevalence of metabolic syndrome in indigenous people over 40 years of age in Rio Grande do Sul, Brazil

OBJETIVO: Estudar a prevalência da síndrome metabólica (SM) em indígenas com idade maior do que 40 anos em duas cidades no Rio Grande do Sul, Brasil. MÉTODOS: Este estudo transversal, descritivo e analítico foi realizado nos municípios de Porto Alegre e Nonoai entre julho e agosto de 2009. Participaram 150 indígenas com idade entre 40 e mais de 70 anos (idade mínima 40 e máxima 104 anos). A prevalência da SM foi determinada pelos critérios do National Cholesterol Education Program-Adult Treatment Panel III. Foram coletadas amostras de sangue e medidas antropométricas. Além disso, os participantes responderam a um questionário sobre hábitos alimentares, analisado posteriormente conforme os 40 passos para uma alimentação saudável propostos pela Organização Mundial de Saúde e endossados pelo Ministério da Saúde. RESULTADOS: A prevalência da SM foi de 65,3 por cento, mais prevalente no sexo feminino (P < 0,001). Alterações na circunferência abdominal, glicemia de jejum e HDL-colesterol e presença de hipertensão arterial sistêmica, hipertrigliceridemia e obesidade foram associados à SM. Faixa etária, tabagismo e sedentarismo não foram associados à SM. Os indígenas com SM tinham uma dieta pouco saudável, com baixo consumo de vegetais, frutas e legumes e nível de atividade física, alto consumo de doces e refrigerantes e alta prevalência de obesidade. CONCLUSÕES: Os indígenas pesquisados apresentaram alta prevalência de SM, especialmente as mulheres. A educação e a motivação para a saúde dos indígenas é possivelmente o melhor caminho para o controle da SM e para a promoção da saúde nessa população ainda ignorada pelas políticas de saúde pública.

OBJECTIVE: To investigate the prevalence of the metabolic syndrome (MS) among indigenous people older than 40 years of age from two cities in the State of Rio Grande do Sul, southern Brazil. METHODS: A descriptive, analytic, cross-sectional study was conducted in two municipalities, Porto Alegre and Nonoai, between July and August 2009. A total of 150 indigenous people older than 40 years of age (range: 40-104 years), participated in the study. MS prevalence was determined based on National Cholesterol Education Program - Adult Treatment Panel III criteria. Blood samples and anthropometric data were collected. The participants also answered a questionnaire on eating habits, which was then contrasted to the 10 steps to healthy eating proposed by the World Health Organization and recommended by the Brazilian Ministry of Health. RESULTS: MS prevalence was 65.3 percent, affecting women more than men (P < 0.001). Changes in waist circumference, fasting glucose, and HDL-cholesterol and presence of hypertension, hypertriglyceridemia, and obesity were associated with MS. Age, smoking, and sedentary lifestyle were not associated with MS. Indigenous people with MS had a poor diet, with low intake of fruit and vegetables, low levels of physical activity, high consumption of sweets and soft drinks, and high prevalence of obesity. CONCLUSIONS: A high prevalence of MS was observed among the indigenous people surveyed, especially in women. Education and motivation for healthy behaviors is possibly the best way to manage MS and promote health in a population that is still neglected by public health policies.

Effect of titanium surface roughness on human bone marrow cell proliferation and differentiation: an experimental study / Efeito da rugosidade de superfície de discos de titânio sobre a proliferação e diferenciação de células de medula óssea humana: estudo experimental

PURPOSE: To assess the proliferation and differentiation of human bone marrow-derived cells cultured on titanium surfaces with different roughness characteristics. METHODS: Cells obtained from the iliac crest of an adult human donor were routinely processed and cultured on titanium surfaces of varying roughness, according to their preparation method: polishing only (smooth surface) and polishing followed by etching with HF/HNO3 for 15 and 30 minutes (rough surfaces). Surfaces were assessed using scanning electronic microscopy and profilometry. RESULTS: Titanium disks etched with acid for 15 minutes allowed greater cell proliferation in all culture periods. The level of osteopontin and osteocalcin expression was increased in both acid-etched groups, which indicates an advanced stage of differentiation of cells into osteoblasts. CONCLUSIONS: Increased surface roughness accelerates the differentiation of undifferentiated mesenchymal cells into osteogenic lineage cells, but does not necessarily favor cell proliferation. An intermediate surface roughness of 0.5µm (acid etching for 15 minutes) favors both initial and final cell responses.

OBJETIVO: Avaliar a proliferação e diferenciação de células derivadas da medula óssea humana sobre superfícies de titânio com diferentes rugosidades de superfície. MÉTODOS: Células obtidas da crista ilíaca de um doador humano adulto foram rotineiramente processadas e cultivadas sobre superfícies de titânio preparadas através de polimento apenas, ou polimento seguido de condicionamento com HF/HNO3 por 15 e 30 minutos, para produzir superfícies com rugosidades variadas, conforme determinado por Microscopia Eletrônica de Varredura e perfilometria. RESULTADOS: Discos de titânio condicionados com ácido por 15 minutos permitiram maior proliferação celular em todos os períodos de cultura. O nível de expressão das proteínas osteopontina e osteocalcina estava aumentado em ambos os grupos condicionados com ácido, indicando que as células estavam comprometidas com o fenótipo osteogênico. CONCLUSÕES: O aumento na rugosidade de superfície acelera a diferenciação de células mesenquimais indiferenciadas em células de linhagem osteogênica, mas não necessariamente favorece a proliferação celular. Uma superfície com rugosidade intermediária de 0,5µm (condicionada com ácido por 15 minutos) favorece tanto as respostas celulares iniciais quanto as finais.

Expressão de ciclina D1 e presença de metástase cervical de carcinoma epidermóide de boca / Cyclin D1 expression and cervical metastases in squamous cell carcinoma of the mouth

A metástase cervical é o fator de prognóstico mais relevante do carcinoma epidermóide de boca. Fatores clínicos e histológicos estão associados com o desenvolvimento da metástase cervical, porém a pesquisa de fatores moleculares está sendo amplamente realizada nos últimos anos. OBJETIVO: Observar a associação da expressão da ciclina D1 como fator de risco para a presença de metástase cervical. MATERIAL E MÉTODO: A expressão da ciclina D1 foi estudada e verificada sua associação com a metástase em 45 pacientes com câncer de boca. A leitura da expressão da ciclina D1 foi realizada pelo método estereológico. Características clínicas e histológicas foram pesquisadas e associadas com a presença de metástase. RESULTADOS: A expressão da ciclina D1 foi encontrada em 15 pacientes (33,4 por cento) e não esteve associada a fatores clínicos, histológicos e com a presença de metástase cervical, sendo sua expressão independente. O estadiamento clínico e as embolizações vasculares foram os fatores preditivos de maior relevância para o desenvolvimento de metástase. CONCLUSÕES: A expressão da ciclina D1, embora seja independente, não está associada com a presença de metástase cervical, enquanto que o estadiamento clínico e as embolizações vasculares estão.

Cervical metastasis represent the most relevant prognostic factor in carcinomas of the mouth. Clinical and histological factors are associated with the development of cervical metastasis; however, research on molecular factors has been broadly carried out in recent years. AIM: The aim of this study is to analyze the association of the Cyclin D1 as a risk factor for the presence of cervical metastasis. MATERIALS AND METHODS: Cyclin D1 expression was measured and the association between such substance and metastasis was found in 45 patients with mouth cancer treated by the author of this paper. Cyclin D1 presence was checked through the stereological method. Clinical and histological characteristics have been analyzed and associated with metastasis. RESULTS: Cyclin D1 expression was found in 15 patients but it was not associated with clinical and histological factors related to the presence of metastasis. Such conclusion indicates that Cyclin D1 is an independent protein. The most important predictive aspects related to metastasis development have been clinical staging and vascular embolization. CONCLUSIONS: Cyclin D1, although independent, is not associated with cervical metastasis, while staging and vascular embolization are.

Modelo experimental de lesão raquimedular em ratos com dispositivo para acesso de agentes terapêuticos locais / Experimental model of spinal cord injury in rats with a device for local therapeutic agents access

Um modelo experimental de lesão raquimedular com localização precisa e reproduzível é uma ferramenta extremamente importante para o estudo de novas terapias em lesões raquimedulares. OBJETIVOS: Desenvolver um modelo experimental de lesão raquimedular em ratos que produza lesão completa (paraplegia) com o posicionamento de um sistema que permita o acesso de agentes próximo ao local da lesão para testar agentes terapêuticos locais. MÉTODOS: Quinze ratos Wistar foram submetidos à transecção cirúrgica da medula espinhal, realizada com o uso de tesoura ao nível dos corpos vertebrais de T-13 a L-3 e, ao final do procedimento, à implantação de um cateter subcutâneo para o acesso de agentes terapêuticos locais ao local da lesão. RESULTADOS: Um modelo experimental de paraplegia foi consistentemente desenvolvido com a adição suplementar de um cateter para o acesso de agentes terapêuticos locais ao local da lesão. CONCLUSÃO: Um modelo animal de lesão raquimedular e um sistema para o acesso de agentes terapêuticos locais pode ser reproduzido para o estudo de diferentes modificadores da resposta regenerativa em um modelo de ratos com lesão raquimedular.

An experimental model of spinal cord injury at a precise and reproducible site is an extremely important tool for studying new therapies in spinal cord injuries. OBJECTIVES: To develop an experimental model of spinal cord injury in rats that is able to produce a complete injury (paraplegia) and placing a system enabling agents access close to injury site in order to test local therapeutic agents. METHODS: Fifteen Wistar rats were submitted to surgical transection of the spine, performed by using scissors at the level of T-13 to L-3 vertebral bodies, and, at the end of the procedure, to the insertion of a subdermal catheter intended to enable local therapeutic agents access to injury site. RESULTS: An experimental model of paraplegia was consistently developed by adding a supplementary catheter for local therapeutic agentsÆ access to injury site. CONCLUSION: An animal model of spinal cord injury and a system for local therapeutic agents access can be reproduced for the study of different modifiers of the regenerative response in a model of rats with spinal cord injury.

Efeitos das células tronco adultas de medula óssea e do plasma rico em plaquetas na regeneração e recuperação funcional nervosa em um modelo de defeito agudo em nervo perfiférico em rato

OBJETIVOS: Foram avaliados os efeitos do uso de células tronco da medula óssea (CTM) e do plasma rico em plaquetas (PRP) na regeneração de nervos periféricos, utilizando um modelo estabelecido de regeneração de nervo ciático em ratos. MÉTODOS: Um defeito nervoso de 10 mm foi reconstruído com a utilização de um tubo de silicone preenchido com CTM, PRP ou ambos. O grupo controle recebeu somente o tubo de silicone. Foi realizado ainda um quinto grupo no qual o intervalo foi reconstruído utilizando o segmento ressecado do nervo. A função motora foi testada seis semanas após a cirurgia utilizando teste de marcha. Após o teste motor, os ratos foram anestesiados, o nervo ciático e o tubo foram ressecados e foi realizada microscopia eletrônica de transmissão. RESULTADOS: A análise quantitativa demonstra uma melhora na recuperação funcional no grupo CTM em comparação com os demais grupos. Regeneração nervosa foi demonstrada no grupo CTM por microscopia eletrônica de trasmissão com uma recuperação praticamente completa da anatomia neural. CONCLUSÃO: Nossos resultados sugerem que o uso de CTM associado com a técnica de tubulização promove uma satisfatória recuperação da função motora e regeneração nervosa.

OBJECTIVES: The effects of the use of bone marrow stem cells (MSC) and platelet-rich plasma (PRP) on peripheral nerves regeneration were assessed by using an established model of sciatic nerve regeneration in rats. METHODS: A 10-mm nervous defect was reconstructed by using a silicone tube filled with MSC, PRP or both. The control group received only the silicone tube. A fifth group was also set, in which the interval was reconstructed by using a dried segment of the nerve. Motor function was tested six weeks after surgery, by means of a gait test. After motor test, the rats were anesthetized, the sciatic nerve and the tube were dried, and the transmission electronic microscopy was performed. RESULTS: The quantitative analysis shows an improved functional recovery in MSC group compared to the other groups. Nervous regeneration was reported for MSC group by means of transmission electronic microscopy with an almost full recovery of the neural anatomy. CONCLUSION: Our results suggest that the use of MSC combined with tubing technique yields a satisfactory recovery of motor function and nervous regeneration.

Viral coinfection in the oral cavity of HIV-infected children: relation among HIV viral load, CD4+T lymphocyte count and detection of EBV, CMV and HSV / Co-infecção viral na cavidade bucal de crianças infectadas pelo HIV: relação entre carga viral, contagem de linfócitos T-CD4+ e detecção de EBV, CMV e HSV

A relação entre a infecção pelo HIV e a presença de diferentes tipos de vírus na cavidade bucal foi estudada em 180 crianças HIV-positivo, com idades entre zero e 13 anos de idade, de ambos os sexos. Os exames foram realizados nos Ambulatórios de Aids Pediátrica dos Hospitais São Lucas e de Clínicas, ambos em Porto Alegre, RS, Brasil e no Centro Hospitalar Universitário da Universidade Estadual de Nova Iorque, em Stony Brook (EUA). O objetivo desta pesquisa foi usar a técnica da PCR para detectar a presença dos vírus CMV, EBV e HSV na cavidade bucal desses pacientes, independentemente da presença ou não de manifestações estomatológicas relacionadas aos mesmos. Pode-se concluir que foi alta a freqüência de vírus detectados na cavidade bucal das crianças da amostra através da técnica da PCR e que a contagem média de linfócitos T-CD4+ das crianças com a presença dos vírus encontrava-se próxima da normalidade, enquanto a Carga Viral do HIV encontrava-se elevada.

Avaliação do efeito do laser não cirúrgico (LLLT) no crescimento e aderência celular de fibroblastos cultivados sobre implantes de titânio: um estudo in vitro / Evaluation of non-surgical laser (LLLT) on the growth and cell adherence of fibroblasts cultivated on titanium implants: in vitro study

Recentemente, a laserterapia tem sido utilizada em odontologia visando aos seus efeitos terapêuticos e biomodulatórios sobre o aumento da velocidade e qualidade da integração entre os implantes dentais e os tecidos ósseos e periodontal. Entretanto, permanece incerto se é possível haver bioestimulação do crescimento celular pelo laser na presença de implantes de titânio. O objetivo do presente estudo foi examinar o crescimento, a proliferação e aderência sobre a superficie de titânio de uma linhagem de fibroblastos (NIH-3T3) submetida à irradiação com laser diodo (λ=685nm). Dois grupos com quatro culturas cada foram cultivadas sobre discos de titânio previamente polidos e colocados numa placa de 24 poços. As células foram cultivadas em meio DMEM suplementado com 10 por cento de soro fetal bovino (SFB). Após o cultivo, um grupo foi irradiado localmente por três sessões (24, 48 e 72 horas) (laser diodo λ=685nm, 07mW, Ø~0,60nm), com uma dose de 0,8 j.cm² por sessão, e o outro foi mantido sem qualquer tratamento. Um grupo de controle de células cultivadas sobre a placa também foi conduzido. A aderência celular foi avaliada pela técnica de coloração com um agente intercalante de DNA (iodeto de propício) e o crescimento celular, pela contagem em hemocitômetro. De acordo com a contagem do número de células observadas em cada grupo, foi possível determinar nos grupos experimentais um aumento estatisticamente significativo no número médio de células nos períodos de 72 (p=0,010) e 96 horas (p=0,007) após o cultivo quando comparados com seus respectivos controles. Este estudo sugere que o laser, nas condições descritas, pode afetar positivamente a proliferação celular in vitro e, assim, pode desempenhar uma importante função na integração entre os implantes dentais e o tecido periodontal

Effect of clarithromycin on the cell profile of bronchoalveolar lavage fluid in mice with neutrophil-predominant lung disease

OBJETIVO: Os antibióticos macrolídeos podem apresentar um efeito antiinflamatório em doenças pulmonares. O objetivo deste estudo é investigar o efeito da claritromicina na resposta inflamatória celular pulmonar em camundongos Swiss. MÉTODO: Foram utilizados 8 camundongos Swiss adultos (6-8 semanas). Todos os animais receberam um desafio intranasal (80 µL) com Pseudomonas aeruginosa mortas (1 x 1012 UFC/mL). Dois dias após o desafio, foi realizado lavado broncoalveolar (LBA) com contagem total de células (CTC) e exame citológico diferencial. O grupo em estudo (n=4) recebeu tratamento com claritromicina (50mg/kg/dia, intraperitoneal) por 5 dias, sendo iniciado o tratamento 2 dias antes do desafio intranasal. O grupo controle (n=4) não recebeu tratamento com claritromicina. RESULTADOS: Não houve diferença significativa na CTC entre os grupos (média de 2x106 e 1,3x106, respectivamente). Em ambos os grupos, houve predomínio absoluto de neutrófilos. Contudo, o grupo tratado com claritromicina, apresentou um número percentual significativamente maior de linfócitos no LBA (mediana de 2,5% vs 19%, p=0,029). CONCLUSÃO: O uso de claritromicina altera o exame citológico diferencial do lavado bronco-alveolar de camundongos Swiss com inflamação pulmonar neutrofílica, aumentando significativamente o número percentual de linfócitos.

Development of an experimental model of neutrophilic pulmonary response induction in mice

BACKGROUND: Several lung diseases are characterized by a predominantly neutrophilic inflammation. A better understanding of the mechanisms of action of some drugs on the airway inflammation of such diseases may bring advances to the treatment. OBJECTIVE: To develop a method to induce pulmonary neutrophilic response in mice, without active infection. METHODS: Eight adult Swiss mice were used. The study group (n = 4) received an intranasal challenge with 1 x 10(12) CFU/ml of Pseudomonas aeruginosa (Psa), frozen to death. The control group (n = 4) received an intranasal challenge with saline solution. Two days after the intranasal challenge, a bron¡choalveolar lavage (BAL) was performed with total cell and differential cellularity counts. RESULTS: The total cell count was significantly higher in the group with Psa, as compared to the control group (median of 1.17 x 10(6) and 0.08 x 10(6), respectively, p = 0.029). In addition to this, an absolute predominance of neutrophils was found in the differential cellularity of the mice that had received the Psa challenge. CONCLUSIONS: The model of inducing a neutrophilic pulmonary disease using frost-dead bacteria was successfully developed. This neutrophilic inflammatory response induction model in Swiss mice lungs may be an important tool for testing the anti-inflammatory effect of some antimicrobial drugs on the inflammation of the lower airways.

Manifestaçöes estomatológicas, contagem de linfócitos T-CD4+ e carga viral de crianças brasileiras e norte-americanas infectadas pelo HIV / Oral manifestations, counts of CD4+ T lymphocytes and viral load in Brazilian and American HIV-infected children

A prevalência de manifestaçöes estomatológicas associadas à infecçäo pelo HIV foi avaliada em 184 crianças de ambos os sexos, da faixa etária de zero a 13 anos de idade, atendidas nos Ambulatórios de AIDS Pediátrica do Hospital Säo Lucas (HSL) da PUCRS, e do Hospital de Clínicas de Porto Alegre (HCPA) da UFRGS, ambos em Porto Alegre, RS, Brasil e no Centro Pediátrico para Doenças Infecciosas do Hospital Universitário e Departamento de Odontopediatria da Faculdade de Odontologia da Universidade Estadual de Nova Iorque (SUNY) em Stony Brrok, Nova Iorque, EUA, no período de janeiro de 1999 a maio de 2000. Freqüência de crianças brasileiras (72,73 por cento) e norte-americanas (53,66 por cento) com manifestaçöes estomatológicas associadas à infecçäo pelo HIV foi estatisticamente significativa, com destaque para linfadenopatia cérvico-facial, aumento de volume das parótidas, candidíase eritematosa, petéquias, gengivite, xerostomia e queilite angular. As crianças com manifestaçöes estomatológicas apresentaram contagens médias de linfócitos T-CD4+ próximas à normalidade e carga viral alta

Expressäo imuno-histoquímica da ciclina D1, Ki-67 e PCNA em carcinomas espinocelulares de boca - análise comparativa da zona central e da zona de invasäo tumoral / Cyclin D1, Ki-67 and PCNA oral squamous cell carcinoma immunoexpression - comparative analyses between tumoral central zone and invasive front

A expressäo imuno-histoquímica da ciclina D1, Ki-67 e PCNA foi avaliada na zona central e na zona de invasäo tumoral de 30 casos de carcinoma espinocelular de boca obtidos a partir de biópsias incisionais e classificados segundo o sistema de graduaçäo de malignidade preconizado por ANNEROTH; BATSAKIS; LUNA (1987), a fim de verificar a existência de relaçäo entre essas zonas, a proliferaçäo celular e o grau de diferenciaçäo histológica da lesöes. Observou-se a ausência de relaçäo estatisticamente significante entre a graduaçäo histológica de malignidade e a expressäo da ciclina D1, Ki-67 ou PCNA nas zonas estudadas, assim como näo foi observada correlaçäo entre esses marcadores. O PCNA marcou maior quantidade de células que a ciclina D1 e o Ki-67 nas áreas tumorais analisadas (Friedman, p<0,001). A zona de invasäo tumoral apresentou um número significativamente maior de células imunomarcadas para o Ki-67 e o PCNA que a zona central (Wilcoxon, p<0,01), indicando diferenças no comportamento biológico de subpopulaçöes celulares neoplásicas. Estes dados reforçam a necessidade premente de novos critérios avaliativos do comportamento biológico tumoral. Adicionalmente, sugere-se a execuçäo de estudos prospectivos para confirmar o valor prognóstico da análise da zona de invasäo em carcinomas espinocelulares de boca