ABSTRACT
Preliminary work on Passiflora alata leaves failed to detect harmane alkaloids using LC. The aim of this work was to investigate the production of harmane alkaloids through the cell culture of P. alata, inducing its precursor (L-tryptophan). The leaf explants presented satisfactory results after disinfection, and the callus formation was initiated in MS media with adequate quantities of phytohormones. Sixty days after inoculation, calli were inoculated in the optimized semi-solid MS media, with and without the addition of L-tryptophan (50, 100, 200 mg/L) and kept in standard conditions for 90 days. Calli were collected on days 6, 16, 26, 36, and 90, followed by acid-base extraction, and analysed by LC. The results showed an absence of harmane, harmin, harmol, harmalol, and harmaline. With L-tryptophan feeding, two peaks were detected, collected and analysed through positive mode electrospray [ESI(+)-MS] and sequential analysis in tandem ESI(+)-MS/MS. The spectra obtained were very similar, with a repetition of the more intense ions, and consecutive loss of 68 Da units, attributed to the heterocycle pyrazole. It appeared that this transformation was not related to any enzymatic pathway previously described for the plant from L-tryptophan, and the biosynthesis of β-carboline alkaloids in callus culture of P. alata were not observed in this work.
As folhas de varias espécies de Passiflora são utilizadas como ansioliticas e sedativas. Passiflora alata Curtis, Passifloraceae consta em três edições da farmacopéia brasileira, porem não há muitos estudos sobre sua composição química. No passado, enfatizava-se a ação conjunta de alcalóides e flavonóides. Em trabalho anterior, não foi detectada a presença de alcalóides harmanicos através de CLAE. Assim, decidiu-se investigar a produção dos mesmos através de cultivo celular, introduzindo seu precursor metabólico L-triptofano. Os explantes foliares apresentaram resultados satisfatorios para germinação apos assepsia, e a formação de calo foi iniciada em meio MS com quantidades adequadas de fitohormonios, previamente determinadas. Sessenta dias após a inoculação os calos foram repicados para meio semi-solido com e sem L-triptofano (50, 100, 200 mg/L), mantidos por 90 dias em condições padrão. Amostras foram coletadas com 6, 16, 26, 36, e 90 dias, realizada extração acido-base e o extrato analisado por CLAE. Os resultados mostraram a ausência de harmana, harmina, harmol, harmalol e harmalina. Dois picos presentes nas amostras com L-triptofano foram coletados e analisados através de espectrometria de massas, electrospray modo positiva [ESI(+)-MS] e analise em tandem ESI(+)-MS/MS. Os espectros correspondentes foram similares, mostrando a perda consecutiva de 68 Da, atribuídos ao pirazol. Este fato aponta para uma transformação não enzimática, não relacionada a uma biossintese previamente descrita para alcalóides β-carbolínicos.
ABSTRACT
O extrato fluido (EF), preparado segundo a Farmacopéia Brasileira, e sua fração aquosa (FA) obtidos de folhas de Passiflora alata foram administrados por via oral em camundongos. Seus efeitos comportamentais foram avaliados por modelos que detectam a atividade ansiolítica e antidepressiva de drogas, tais como: o labirinto em cruz elevado (LCE) e o teste da suspensão pela cauda (TSC). Efeitos sobre a atividade locomotora geral dos animais foram monitorados no campo aberto. Efeitos sedativos foram observados com EF (100 e 300 mg kg-1) e EA (100, 300 e 600 mg kg-1), caracterizados por uma diminuição do número de entradas nos braços fechados do LCE e uma diminuição no número de cruzamentos e levantamentos no campo aberto. No TSC, a administração de EF (100 mg kg-1) ou FA (100 e 300 mg kg-1) resultou em aumento do tempo de imobilidade. Esses resultados são relevantes, pois contribuem para validar o uso popular dessa planta.
The fluid extract (FE), prepared according to the Brazilian Pharmacopoea, obtained from the leaves of Passiflora alata and its aqueous fraction (AF), were administered by oral route to mice, and the behavioural effects were evaluated using animal models that detect anxiolytic and antidepressant activities, such as the elevated plus maze (EPM) and the tail suspension test (TST). Effects on general motor activity were monitored in the open . Sedative effects were observed with FE (100 and 300 mg kg-1) and AF (100, 300 and 600 mg kg-1) and were characterized by a decreased number of entries in the enclosed arms of the EPM and a decrease in the number of crossings and rearing in the open . In the TST, FE (100 mg kg-1) and AF (100 and 300 mg kg-1) induced an increase in the immobility time. These results are relevant because they contribute to validate the traditional use of this plant.