ABSTRACT
A glicoproteína de superfície gp82, expressa nas formas netacíclicas de Trypanosoma cruzi, tem sido implicada no processo de invasão celular. Neste trabalho, caracterizamos o sítio de adesão da gp82 à célula hospedeira usando proteínas recombinantes e peptídeos sintéticos baseados na gp82. A proteína recombinante Del-4/8, em que 65 aminoácidos do domínio central da gp82 foram deletados (posições 257 a 321), virtualmente perdeu a capacidade de se ligar à célula e de inibir a invasão do parasita, em contraste com J18, o construção que contém a seqüência completa da gp82 (aminoácidos 1 a 516). Construções com deleções menores, por exemplo, Del-4 (posição 257 a 271) e Del-8 (posição 293 a 321), ligam-se à célula hospedeira em grau menor do que Jl8. Os sitíos deletados nas proteínas recombinantes Del-4 e Del-8 contêm aminoácidos ácidos críticos para adesão celular. Assim, a capacidade de ligar-se à célula da proteína Del-E/D, sem os pares de ácido glutâmico (259/260) e de ácido aspártico (303/304), foi mínima, assim como a sua capacidade de inibir a internalização do parasita. De um conjunto de peptídeos sintéticos cobrindo o domínio central da gp82, um peptídeo híbrido de 22 resíduos, p4/8, formado por duas seqüências de não contíguas (osições 257 a 273 e 302 a 306) e que contém os quatro resíduos acidicos, competiu com a ligação da proteína Jl8 à célula hospedeira e inibiu significativamente (60 por cento) a penetração de parasitas. Este peptídeo, gerado por justaposição de seqüências que estão separadas por uma seqüência hidrofóbíca na molécula linear, parece estar mimetizando o sítio de ligação na célula da gp82 que seria conformaação dependente. Os experimentos de competição de anticorpos com um conjunto de peptídeos resíduos superpostos identificaram o epítopo para o anticorpo monoclonal 3F6, o anticorpo monoclonal dirigido contra a gp82 que inibe a invasão celular, como a seqüência representada pelo peptídeo p3 (244 a 263), que tem superposição parcial com o sítio de adesão à célula