Contribución al estudio de la criptococosis infantil en Cuba / Contribution to the study of infant cryptococosis in Cuba

Introducción: a partir de 1998 en el laboratorio de micología del Instituto Pedro Kourí se observó un incremento del número de aislamientos de Cryptococcus obtenidos de niños seronegativos al VIH con meningoencefalitis. Los reportes de criptococosis infantil a nivel mundial son infrecuentes y generalmente se encuentran asociados al sida. Objetivo: estudiar la criptococosis infantil en Cuba a través de la evaluación integral de 7 casos. Métodos: se realizó un estudio retrospectivo integral, se revisaron las historias clínicas de 7 pacientes pediátricos afectados por criptococosis menigoencefálica y se caracterizaron los aislamientos obtenidos (uno de cada paciente). A estos se les determinó la especie, variedad, serotipo, patogenicidad en un modelo murino y susceptibilidad a la anfotericina B. Resultados: la edad media de los niños fue de 5,8 años, con ligero predominio del sexo femenino (4:3). Los síntomas más frecuentes resultaron la cefalea, fotofobia, fiebre y los vómitos. En 6 pacientes el estudio citoquímico del líquido cefalorraquídeo y el examen imaginológico de cráneo evidenciaron anomalías. El diagnóstico microbiológico se realizó mediante examen directo y cultivo. Todos los aislamientos correspondieron con Cryptococcus neoformans serotipo A y la anfotericina B mostró una concentración mínima inhibitoria menor o igual que 0,125 mg/mL. El 85,7 porciento mostró actividad fenoloxidasa y elevada letalidad en los animales infectados (71,4-100 porciento). Conclusiones: el pronóstico de la meningoencefalitis por Cryptococcus está estrechamente ligado a un diagnóstico precoz. Esta realidad hace que deba tenerse siempre presente, por lo que los datos aportados bien pudieran servir de alerta a los médicos de asistencia

Introduction: since 1998, an increasing number of Cryptococcus isolates obtained from HIV-negative children with meningoencephalitis was observed in the mycology laboratory at Pedro Kourí Institute. The global reports of child cryptococcosis are rare and usually associated with AIDS. Objectives: to study child cryptococosis in Cuba through the comprehensive evaluation of 7 cases. Methods: the clinical histories of seven pediatric patients with cryptococcal meningoencephalitis were examined and the obtained isolates (one per patient) were characterized. The species, variety, serotype, pathogenicity in a mouse model and amphotericin B susceptibility of the isolates were determined. Results: average age of the children was 5.8 years, with a slight female predominance (4:3). The most common symptoms were headache, photophobia, fever and vomiting. The cytochemical study of cerebral spinal fluid and skull imaging test showed abnormalities in 6 patients. The microbiological diagnosis was made through direct examination and culture. All the isolates were from Cryptococcus neoformans serotype A and amphotericin B showed a minimum inhibitory concentration £ 0.125 mg/mL. In the group, 85.7 percent showed phenoloxidase activity and high lethality rate in infected animals (71.4 to 100 percent). Conclusions: the prognosis of cryptococcal meningoencephalitis is closely linked to early diagnosis, therefore, this should be always kept in mind and the provided data from this study may serve as warning to attending physicians

Efecto del anticuerpo monoclonal 4B3 en la infección experimental por Cryptococcus neoformans / Effect of 4B3 monoclonal antibody on the experimental Cryptococcus neoformans infection

Introducción: las frecuencias de recaídas y elevada letalidad de la criptococosis se mantienen altas, lo cual incentiva la búsqueda de nuevas estrategias terapéuticas. Objetivos: evaluar el efecto del anticuerpo monoclonal 4B3 sobre la infección criptocócica en ratones BALB/c. Métodos: se determinó la cinética de la concentración sérica del anticuerpo monoclonal para su administración intraperitoneal (500 µg), que fue medida por ELISA cuantitativo de doble anticuerpo. La capacidad protectora se observó mediante el registro de supervivencia de ratones BALB/c administrados con 500 µg de anticuerpo monoclonal 4B3 e inoculados con 2 x 10(2,2) células/mL de Cryptococcus neoformans, así como por evaluación de la diseminación de la levadura a los principales órganos diana. Se identificó el efecto del anticuerpo monoclonal 4B3 sobre la fagocitosis y lisis del microorganismo por células de la línea de macrófagos P338.D1. Resultados: la dosis empleada fue suficiente para mantener valores séricos elevados del 4B3 (38 µg/mL) durante al menos 46 d. Se determinó que el 4B3 no confiere protección, lo cual potencia la diseminación del microorganismo y disminuye el tiempo de vida de los animales. El ensayo de fagocitosis mostró que el anticuerpo evaluado incrementa la actividad fagocítica de los macrófagos sin lograr un efecto fungicida. Conclusiones: el anticuerpo monoclonal 4B3 estimula la fagocitosis de C. neoformans por macrófagos, pero sin efecto fungicida. Con ello favorece la diseminación de la levadura y disminuye el tiempo de vida de los ratones a la infección.

Introduction: frequent relapses and high lethality of criptococcosis has encouraged the search for new therapeutic strategies. Objectives: to evaluate the effect of the monoclonal antibody 4B3 on the cryptococcal infection in Balb/c mice. Methods: the kinetics in serum concentration of the studied monoclonal antibody was determined for intraperitoneal administration (500 µg) by quantitative sandwich ELISA. In order to assess its protective capability, were administered 500 µg of 4B3 and innoculated 2 x 10(2.2) cells/mL of Cryptococcus neoformans. The survival of mice was recorded and the yeast dissemination to the main target organs was evaluated. Macrophages P338.D1 cell lines were used to measure the effect of the monoclonal antibody 4B3 on the phagocytosis and lysis of the microorganism. Results: the used dose helped to keep high values (38 µg/m) of 4B3 in serum for at least 46 days. It was found that the monoclonal antibody does not give protection, which makes the microorganism dissemination possible, along with the reduction in the survival of mice. Finally, the phagocytosis test showed that 4B3 increased the phagocytic activity of macrophages without any fungicidal effect. Conclusions: the monoclonal antibody 4B3 stimulates C. neoformans phagocytosis by macrophages without fungicidal effect, thus favoring yeast dissemination and decreasing the survival of mice due to cryptococcal infection.

Susceptibilidad in vitro frente a fluconazol y voriconazol de cepas de Cryptococcus aisladas en Cuba / In vitro susceptibility of isolated Cryptococcus strains to fluconazole and voriconazole

Las infecciones fúngicas invasoras se han incrementado como consecuencia de los avances de la medicina en el ßrea de la transplantología, el tratamiento del cßncer, las enfermedades autoinmunes y el sida, fundamentalmente. La criptococosis, antes infrecuente, ocupa ahora el tercer lugar en la incidencia de micosis graves en este último grupo de pacientes y constituye además la de mayor letalidad. Hasta el momento existen pocos reportes sobre el desarrollo de resistencia de Cryptococcus a los antifúngicos, pero se prevé que el amplio uso de fluconazol pudiera favorecer la emergencia de cepas menos sensibles. Dada la importancia de mantener la vigilancia de la susceptibilidad a los antifúngicos y de poder evaluar nuevas opciones terapéuticas, se determinó la actividad in vitro del fluconazol y el voriconazol frente a un amplio número de cepas de Cryptococcus aisladas a partir de muestras clínicas y ambientales mediante el método de Etest. Se determinó la susceptibilidad in vitro mediante Etest frente a fluconazol y voriconazol de 159 cepas de Cryptococcus (117 obtenidas a partir de muestras clínicas y 42 de fuentes ambientales de la región centro-occidental de Cuba). Los aislamientos estudiados mostraron valores bajos de concentraciones mínimas inhibitorias, sobre todo frente a voriconazol. Los rangos, las medias geométricas y las modas fueron de 0,031-128, 4,631 y 3 mg/mL para fluconazol y 0,003-8, 0,02 y 0,016 mg/mL para voriconazol, respectivamente. Aunque de forma general los valores de concentraciones mínimas inhibitorias fueron mßs elevados en los aislamientos ambientales, no se encontraron diferencias estadísticamente significativas (p= 0,05) entre las cepas de acuerdo con el origen (clínica/ambiental) o la procedencia geográfica. Se señala la importancia de continuar este tipo de estudio para la detección de la aparición de resistencia a las drogas más empleadas en la terapéutica anticriptocósica, así como en la búsqueda de nuevas estrategias para...

Invasive fungal infections have increased as a result of medical advances in the sphere of transplantation, cancer treatment, autoimmune diseases and AIDS fundamentally. Cryptococcus disease, infrequent before, holds the third place in the incidence of severe mycosis in AIDS patients and it is also the most lethal. Up to the present, there exist few reports on the development of Cryptococcus resistance to antifungal products, however, it is foreseen that wide use of fluconazole might encourage the emergence of less susceptible strains. Given the importance of surveillance of antifungal susceptibility and of the evaluation of new therapeutical options, in vitro action of fluconazole and voriconazole on a high number of isolated Cryptococcus strains was determined through Etest method on clinical and environmental samples. In vitro susceptibility to fluconazole and voriconazole of 159 Cryptococcus strains (117 from clinical samples and 42 from environmental sources of Central and Western regions in Cuba) was determined through Etest method. The studied isolates showed low MIC values, mainly susceptibility to voriconazole. Ranges, geometric means and modes were 0.031-128, 4.631 y 3 mg/mL for fluconazole and 0.003-8, 0.02 y 0.016 mg/mL for voriconazole, respectively. Although MIC values were generally higher than those of environmental isolates, there were no statistically significant differences (p= 0.05) among strains according to their origin (clinical/environmental) or to their geographical location. This paper points out the importance of continuing this type of study for the detection of resistance to the most used drugs in anticryptococcus disease therapy as well as in the search of new strategies to treat this infection.