HCMV UL97 phosphotransferase gene mutations may be associated with antiviral resistance in immunocompromised patients in Belém, PA, Northern Brazil

Abstract INTRODUCTION: Human cytomegalovirus is one of the causes of opportunist infections in immunocompromised patients, and is triggered by factors such as state of viral latency, weakened immune responses, and development of antiviral resistance to ganciclovir, the only drug offered by the public health system in Brazil to treat the infection. The goal of this study was to identify mutations that may be associated with antiviral resistance in immunocompromised patients. METHODS: Molecular analysis was performed in 82 blood samples and subjected to genomic DNA extraction by a silica-based method. Three sequences of the HCMV UL97 gene, which encodes a phosphotransferase protein required for activation of ganciclovir, were amplified by polymerase chain reaction. Pyrosequencing methods were applied to one external 2096-bp segment DNA and two internal sequences between nucleotides 1087 to 1828 to detect mutations in this gene. RESULTS: Approximately 10% of sequences contained mutations between nucleotides 377 and 594, in conserved regions of the UL97 gene, leading to amino acid changes. Eleven coding mutations were identified, including changes leading to amino acid substitutions, E596K and S604F, which were observed in 100% of samples and are described for the first time in Brazil. In addition, one mutation (A594V) that is associated with ganciclovir resistance was detected in a kidney transplant patient. CONCLUSIONS: Further studies to detect mutations associated with HCMV resistance to antiviral drugs are required to demonstrate the need to increase the variety and availability of drugs used to treat viral infections in the public health care system in Brazil.

Longitudinal assessment of mercury exposure in schoolchildren in an urban area of the Brazilian Amazon / Avaliação longitudinal da exposição ao mercúrio em crianças de uma área urbana na Amazônia brasileira

This study was a longitudinal assessment of mercury exposure in schoolchildren in an urban area of the Brazilian Amazon. The study population consisted of 90 children whose exposure levels were assessed by testing mercury levels in the umbilical cord blood and mothers' blood samples in 2000-2001, and in the children's hair and blood samples. The study also used a questionnaire on demographic and socioeconomic data, fish consumption, and self-reported disease history. Mean mercury level in hair in 2010 was approximately 1µg/g, ranging up to 8.22µg/g, similar to 2004 and 2006. These figures can be explained by low fish consumption. Mean blood mercury levels at birth exceeded 10µg/L, ranging up to nearly 60µg/L, which indicates mercury transfer across the placenta. There was a significant increase in blood mercury from 2004 to 2006 (p < 0.001), suggesting exposure through air pollution. The main exposure to mercury was during pregnancy.

O objetivo deste estudo foi realizar avaliação longitudinal da exposição de crianças de uma área urbana da Amazônia brasileira ao mercúrio (Hg). A população foi composta por 90 crianças, cuja exposição foi avaliada desde o nascimento por meio das análises dos teores de Hg no sangue do cordão umbilical e no sangue das mães em 2000/2001, e em amostras de cabelo e sangue das crianças. Os procedimentos incluíram também um questionário com informações demográficas, socioeconômicas, sobre consumo de peixes e morbidade referida. A média dos teores de Hg no cabelo em 2010 foi próxima a 1µg/g e sua amplitude 8,22µg/g, semelhantes aos anos 2004 e 2006, podendo ser explicada pela baixa ingestão de peixes. A média dos teores de Hg no sangue das crianças ao nascer ultrapassou 10µg/L e sua amplitude atingiu quase 60µg/L, indicando transferência do Hg através da barreira placentária. Ocorreu aumento significativo dos teores de Hg no sangue entre 2004 e 2006 (p < 0,001), sugerindo a possibilidade de exposição atmosférica ao Hg. O principal período de exposição ao Hg ocorreu durante a gestação.

Restriction enzyme analysis of the human cytomegalovirus genome in specimens collected from immunodeficient patients in Belém, State of Pará, Brazil / Análise de restrição enzimática do genoma viral do citomegalovírus humano em espécimes clínicos de pacientes imunodeficientes, Belém, Estado do Pará

INTRODUCTION: Human cytomegalovirus is an opportunistic betaherpesvirus that causes persistent and serious infections in immunodeficient patients. Recurrent infections occur due to the presence of the virus in a latent state in some cell types. It is possible to examine the virus using molecular methods to aid in the immunological diagnosis and to generate a molecular viral profile in immunodeficient patients. The objective of this study was to characterize cytomegalovirus genotypes and to generate the epidemiological and molecular viral profile in immunodeficient patients. METHODS: A total of 105 samples were collected from immunodeficient patients from the City of Belém, including newborns, hemodialysis patients, transplant recipients and HIV+ patients. An IgG and IgM antibody study was completed using ELISA, and enzymatic analysis by restriction fragment length polymorphism (RFLP) was performed to characterize viral genotypes. RESULTS: It was observed that 100 percent of the patients had IgG antibodies, 87 percent of which were IgG+/IgM-, consistent with a prior infection profile, 13 percent were IgG+/IgM+, suggestive of recent infection. The newborn group had the highest frequency (27 percent) of the IgG+/IgM+ profile. By RFLP analysis, only one genotype was observed, gB2, which corresponded to the standard AD169 strain. CONCLUSIONS: The presence of IgM antibodies in new borns indicates that HCMV continues to be an important cause of congenital infection. The low observed genotypic diversity could be attributed to the small sample size because newborns were excluded from the RFLP analysis. This study will be continued including samples from newborns to extend the knowledge of the general and molecular epidemiology of HCMV in immunodeficient patients.

INTRODUÇÃO: O citomegalovírus é um betaherpesvírus oportunista, causador de infecções persistentes e graves em pacientes imunodeficientes. As infecções recorrentes ocorrem devido à presença do vírus em estado de latência, em alguns tipos celulares, o que possibilita a pesquisa viral por métodos moleculares para auxiliar nos diagnósticos imunológicos, assim como traçar o perfil epidemiológico e molecular viral em pacientes imunodeficientes. O objetivo deste estudo foi caracterizar os genótipos de citomegalovírus e traçar o perfil epidemiológico e molecular viral em pacientes imunodeficientes. MÉTODOS: Um total de 105 amostras foi coletado de pacientes imunodeficientes da Cidade de Belém, incluindo recém-nascidos, hemodialisados, transplantados e pacientes HIV+. Foi realizada a pesquisa de anticorpos IgG e IgM pelo método ELISA e análise enzimática pelo método restriction fragment length polymorphism (RFLP) para caracterização dos genótipos virais. RESULTADOS: Foi observado que 100 por cento dos pacientes apresentavam anticorpos IgG, 87 por cento eram IgG+/IgM-perfil de infecção pregressa; e 13 por cento IgG+/ IgM+ sugestivo de infecção recente. O grupo dos recém-nascidos apresentou maior frequência (27 por cento) do perfil IgG+/IgM+. Na análise por RFLP, foi observado um único genótipo, o gB2, que corresponde ao padrão genotípico da cepa AD169. CONCLUSÕES: A presença de anticorpos IgM nos recém-nascidos indica que o vírus CMV continua sendo causa importante de infecção congênita; a baixa diversidade genotípica pode ser atribuída ao tamanho amostral devido a exclusão dos recém-nascidos na análise por RFLP. Esse estudo será continuado incluindo amostras de recém-nascidos a fim de contribuir para um amplo conhecimento da epidemiologia geral e molecular do citomegalovírus em pacientes imunodeficientes da Cidade de Belém.

Detecção do citomegalovírus humano em doadores de sangue através de PCR em tempo real / Detection of human cytomegalovirus in blood donors by real-time PCR

O citomegalovírus humano (HCMV) é um agente infeccioso da família Herpesviridae. Neste trabalho, perquisou-se HCMV através da PCR em Tempo Real, em 115 amostras de DNA extraído de leucócitos de indivíduos voluntários para doação de sangue no Centro de Hemoterapia do Pará. A presença do DNA viral foi evidenciada em 57 por cento dos indivíduos estudados, sendo que dois terços deles eram do sexo masculino, não tendo sido observada nenhuma relação significante entre faixa etária, gênero e presença do DNA viral. Os resultados através da PCR em Tempo Real nos permitem sugerir que os bancos de sangue introduzam a identificação do HCMV na escolha das amostras de sangue com leucócito que serão utilizadas em pacientes imunodeprimidos e mulheres em início de gestação, pelo fato do HCMV ser um vírus teratogênico.