Susceptibility eest for fungi: clinical and laboratorial correlations in medical mycology / Teste de suscetibilidade para fungos: correlações clínico-laboratoriais em Micologia médica

SUMMARYDuring recent decades, antifungal susceptibility testing has become standardized and nowadays has the same role of the antibacterial susceptibility testing in microbiology laboratories. American and European standards have been developed, as well as equivalent commercial systems which are more appropriate for clinical laboratories. The detection of resistant strains by means of these systems has allowed the study and understanding of the molecular basis and the mechanisms of resistance of fungal species to antifungal agents. In addition, many studies on the correlation of in vitro results with the outcome of patients have been performed, reaching the conclusion that infections caused by resistant strains have worse outcome than those caused by susceptible fungal isolates. These studies have allowed the development of interpretative breakpoints for Candida spp. and Aspergillus spp., the most frequent agents of fungal infections in the world. In summary, antifungal susceptibility tests have become essential tools to guide the treatment of fungal diseases, to know the local and global disease epidemiology, and to identify resistance to antifungals.

RESUMONas últimas décadas, os testes de suscetibilidade a antifúngicos foram padronizados e, atualmente, servem tal como os testes de suscetibilidade a antibacterianos em laboratórios de microbiologia. Métodos de referência norte americanos e europeus foram desenvolvidos, assim como os equivalentes sistemas comerciais, estes últimos mais apropriados a laboratórios clínicos. A detecção de cepas resistentes por meio de tais sistemas permitiu o estudo e a compreensão das bases moleculares dos mecanismos de resistência de espécies fúngicas a fármacos antifúngicos. Além disso, foram realizados muitos estudos sobre a correlação de resultados obtidos in vitro com o desfecho clínico de pacientes permitindo a conclusão de que infecções por cepas resistentes têm pior evolução em relação às causadas por cepas sensíveis. Os estudos permitiram o estabelecimento de pontos de corte interpretativos (interpretative breakpoints development) para Candida spp. e Aspergillus spp., os agentes etiológicos mais frequentes de infecções fúngicas em todo o mundo. Em resumo, os testes de suscetibilidade representam uma ferramenta essencial para a orientação do tratamento de doenças fúngicas, para o conhecimento da epidemiologia local e global, bem como para a identificação de resistência a antifúngicos.

Novos aspectos na evolução clínica da pitiríase versicolor / New aspects in the clinical course of pityriasis versicolor

FUNDAMENTO: A pitiríase versicolor é uma doença infecciosa causada por várias espécies de Malassezia com uma tendência a se tornar recidivante ou crônica. OBJETIVOS: Este trabalho foi conduzido na tentativa de conhecer a evolução clínica da pitiríase versicolor em relação ao número de recidivas após um tratamento adequado no período de 12 meses e correlacionar o número de recidivas com as espécies de Malassezia isoladas. MATERIAL E MÉTODOS: Cento e dois pacientes com diagnóstico clínico e laboratorial de pitiríase versicolor foram acompanhados por um período de 12 meses para observarmos o número de recidivas da doença. RESULTADOS: A pitiríase versicolor, após um tratamento adequado, apresentou três tipos de evolução clínica num período de 12 meses: pitiríase versicolor sem nenhum episódio de recidiva (32,35 por cento); pitiríase versicolor recidivante, com um a quatro episódios de recidiva (52,94 por cento) devidos a fatores de predisposição relacionados; e pitiríase versicolor crônica, com mais de quatro episódios de recidiva (14,70 por cento) sem nenhuma relação com fatores de predisposição. CONCLUSÕES: A pitiríase versicolor apresentou uma evolução clínica de acordo com o número de episódios de recidiva da doença analisados durante um período de 12 meses que pode ser considerada da seguinte maneira: pitiríase versicolor com cura clínica e micológica, pitiríase versicolor recidivante e pitiríase versicolor crônica.

BACKGROUND: Pytiriasis versicolor is an infectious disease caused by several Malassezia species which has a tendency to become relapsing or chronic. OBJECTIVES: This study was conducted in an attempt to investigate the clinical course of pityriasis versicolor with regard to the number of relapses after a 12-month therapy and correlate this number with isolates of Malassezia species. MATERIAL AND METHODS: 102 patients with clinical and laboratory diagnosis of pityriasis versicolor were monitored for 12 months to investigate the number of relapsing episodes of the disease. RESULTS: After appropriate treatment, pityriasis versicolor presented three types of clinical course: pity - riasis versicolor without relapsing episodes (32.35 percent), relapsing pityriasis versicolor with one to four relapsing episodes (52.94 percent ) due to associated predisposing factors, and chronic pityriasis versicolor with more than four relapsig episodes (14.70 percent) with no relation to predisposing factors. CONCLUSIONS: The clinical course of pityriasis versicolor varied according to the number of relapsing episodes of the disease analyzed over a period of 12 months and can be classified as follows: pityriasis versiolor with clinical and mycological clearing, relapsing pityriasis versicolor and chronic pityriasis versicolor.

Pitiríase versicolor circinada: isolamento de Malassezia sympodialis: relato de caso / Pityriasis versicolor circinata: isolation of Malassezia sympodialis: case report

Os autores descrevem caso de pitiríase versicolor circinada, cujo agente etiológico isolado foi Malassezia sympodialis em uma mulher de 34 anos. O isolamento e identificação da Malassezia sympodialis foi em ágar Dixon modificado e o método molecular para confirmação da espécie foi PCR-RFLP (polymerase chain reaction and restriction fragment length polymorphism analysis).

The authors report a case of pityriasis versicolor circinata whose isolated etiologic agent was Malassezia sympodialis in a 34-year-old woman. The isolation and identification of Malassezia sympodialis were accomplished with modified Dixon's agar, and the molecular method used to confirm the species was polymerase chain reaction and restriction fragment length polymorphism analysis (PCR-RFLP).

Pitiríase versicolor: isolamento e identificação das principais espécies de Malassezia / Pityriasis versicolor: isolation and identification of the main species

As espécies do gênero Malassezia isoladas foram: Malassezia sympodialis (16,66 por cento), Malassezia furfur (12,50 por cento), Malassezia globosa (11,45 por cento) e Malassezia slooffiae (2,10 por cento). A Malassezia sympodialis foi a espécie que predominou em nosso estudo. As espécies de Malassezia identificadas não mostraram correlação com as variantes clínicas e com a distribuição das lesões de pitiríase versicolor quanto às regiões do corpo.

Species of the genus Malassezia isolated were: Malassezia sympodialis (16.66 percent), Malassezia furfur (12.50 percent), Malassezia globosa (11.45 percent), and Malassezia slooffiae (2.10 percent). Malassezia sympodialis predominated in the study. The species of Malassezia identified did not show correlation with clinical variants and with the distribution of pityriasis versicolor lesions in relation to areas of the body.

Avaliação da eficácia in vitro de butenafina ante os agentes de micoses cutâneas prevalentes no Brasil / Evaluation of in vitro efficacy of butenafine on the more prevalent cutaneous mycosis in Brazil

O tratamento de micoses cutâneas é realizado com antifúngicos orais ou tópicos. A butenafina, da classe das benzilaminas, é um novo medicamento de uso tópico com eficácia clínica comprovada em casos de dermatomicoses. O objetivo desse estudo foi investigar a atividade ?in vitro? da butenafina em dermatófitos, outros filamentosos ou leveduras, agentes de micoses de pele e unha e compará-la a outros três antifúngicos isoconazol, ciclopirox olamina e oxiconazol. A suscetibilidade aos antifúngicos foi avaliada por métodos de referência de microdiluição M38-A2 (NCCLS, 2002) e M27-A3 (CLSI-2008) para determinação da concentração inibitória mínima (MIC). Um método de triagem por disco-difusão (M44-A, CLSI, 2002) foi avaliado diante dos padrões, com vistas a sua utilização em laboratórios de rotina. Discos contendo as drogas antifúngicas foram preparados em concentrações de 0,125 a 100 µg e ensaiados, em duplicata contra todas as amostras de fungos, e os resultados foram comparados com o valor de MIC correspondente à dupla antifúngico-espécie. O disco na concentração de 2 mg permitiu identificação de perfis distintos de sensibilidade à butenafina, sendo indicado para uso em rotina. A maioria (64%) das espécies, incluindo dermatófitos (Trichophyton mentagrophytes, T. rubrum, T. violaceum, Microsporum canis), fungos não dermatófitos (Scytalidium lignicola, Fusarium) e leveduras (Candida glabrata, C.guilliermondii, C.parapsilosis), foi inibida em baixas concentrações (MIC 0,25 mg/mL), correspondendo a halos de inibição de até 60mm de diâmetro frente a butenafina. Para ciclopirox, a maioria (72%) das espécies não formou halo de inibição, com MICs acima de 0,25 µg/mL melhor resultado foi obtido com T. violaceum (MIC 0,06 mg/mL, halo 20 mm). A maior eficácia (100% de inibição) contra dermatófitos foi observada em butenafina e isoconazol oxiconazol inibiu 88,9% das amostras de dermatófitos com menor desempenho ante a T. mentagrophytes. Butenafina, isoconazol e oxiconazol foram mais ativas do que ciclopirox frente aos dermatófitos, quando verificadas as concentrações necessárias para inibir 50% e 90% (MIC50 e MIC90) das amostras. Agentes oportunistas, S. lignicola e Aureobasidium pullulans, foram sensíveis à butenafina, isoconazol e oxiconazol, não sendo inibidos por ciclopirox. Butenafina foi a única droga capaz de inibir, em baixas concentrações (MIC 0,25 mg/mL halo 14 mm), as duas amostras de Fusarium spp., fungo filamentoso não dermatófito de difícil controle terapêutico, principalmente, nos casos de onicomicose persistente os outros antifúngicos ensaiados apresentaram MIC acima de 16 mg/mL para esse gênero. Para Candida albicans, observou-se que butenafina, em altas concentrações, apresentou atividade inibitória maior se comparada a ciclopirox. Conclui-se que discos com 2 mg de butenafina permitem a classificação de fungos, filamentosos e leveduras, em categorias distintas de suscetibilidade, sendo útil para testes de triagem de cepas menos sensíveis, desde que mostrou boa correlação com os métodos de referência. Os testes de sensibilidade in vitro comprovaram a alta eficiência de butenafina contra agentes de micoses cutâneas, em particular, contra os principais agentes: dermatófitos. Estudos de correlação clínico-laboratorial poderão contribuir para um futuro consenso de critério interpretativo para valores de MIC de butenafina, definindo pontos de corte de sensibilidade.

Brazilian flora extracts as source of novel antileishmanial and antifungal compounds

Natural products have long been providing important drug leads for infectious diseases. Leishmaniasis is a protozoan parasitic disease found mainly in developing countries, and it has toxic therapies with few alternatives. Fungal infections have been the main cause of death in immunocompromised patients and new drugs are urgently needed. In this work, a total of 16 plant species belonging to 11 families, selected on an ethnopharmacological basis, were analyzed in vitro against Leishmania (L.) chagasi, Leishmania (L.) amazonensis, Candida krusei, and C. parapsilosis. Of these plant species, seven showed antifungal activity against C. krusei, five showed antileishmanial activity against L. chagasi and four against L. amazonensis, among them species of genus Plectranthus. Our findings confirm the traditional therapeutic use of these plants in the treatment of infectious and inflammatory disorders and also offer insights into the isolation of active and novel drug prototypes, especially those used against neglected diseases as Leishmaniasis.

Molecular diversity of serial Cryptococcus neoformans isolates from AIDS patients in the city of São Paulo, Brazil

Despite highly active anti-retroviral therapy, cryptococcal meningoencephalitis is the second most prevalent neurological disease in Brazilian AIDS patients, being frequently a defining condition with several episodes. As knowledge of Cryptococcus neoformans isolates in the same episode is critical for understanding why some patients develop several episodes, we investigated the genotype characteristics of C. neoformans isolates in two different situations. By pulsed field gel electrophoresis and random amplifield polymorphic DNA analysis, 54 isolates from 12 patients with AIDS and cryptococcosis were analyzed. Group 1 comprised 39 isolates from nine patients with a single episode and hospitalization. Group 2 comprised 15 isolates from three patients with two episodes and hospitalizations. Except for three patients from group 1 probably infected with a single C. neoformans isolate, the other nine patients probably were infected with multiple isolates selected in different collection periods, or the infecting isolate might have underwent mutation to adapt and survive the host immune system and/or the antifungal therapy. However, the three patients from group 2 presented genetic diversity among isolates collected in both hospitalizations, possibly having hosted the initial isolate in both periods. These data, emphasize that Cryptococcus diversity in infection can contribute to strategies of treatment and prevention of cryptococcosis.

Atypical Cryptococcus neoformans cells isolated from cerebrospinal fluid samples

Muitos fungos patogênicos apresentam morfologias diferentes nas formas parasíticas e saprofíticas. Essas leveduras podem apresentar morfologias diversas como hifas curtas e aberrantes, formas gigantes em pus fresco, abscesso cerebral, cortes histológicos e presença de cápsula espessa geralmente no sorotipo B em tecidos. No presente relato é descrito o caso de um homem de 39 anos de idade, solteiro e HIV positivo,com os seguintes sintomas clínicos: candidíase oral, tuberculose pulmonar, insuficiência cardíaca, meningite por Corynebacterium sp e neurocriptococose por C. neoformans var. neoformans. O paciente foi tratado com anfotericina B durante 45 dias, com dose total de 1960mg. Foram observadas e isoladas do líquido cefalorraquidiano (LCR) células atípicas de C. neoformans de diferentes tamanhos e formas de blastoconídios. O exame direto do LCR em tinta da China apresentou células ovóides, ramificadas, com pseudo-hifas envolvidas por uma fina cápsula. A variedade foi identificada como C. neoformans var.neoformans. O teste de suscetibilidade aos antifúngicos realizados segundo a técnica de EUCST...

Most pathogenic fungi show dual morphology features in their saprophytic and parasitic stage. Occasionally, yeast cells produce short and aberrant hyphae, or large cells which can be seen on granulomas histological analysis, and otherwise as giant forms in fresh pus from abscesses, or also as high lyencapsulated - serotype B in tissue specimens. The present study reports a HIV positive 39 years old single male patient, who presented oral candidiasis, pulmonary tuberculosis, cardiac insufficiency, Corynebacterium sp meningitis, and neurocryptococcosis due to C. neoformans var. neoformans. Thepatient was treated with amphotericin B for 45 days, who received approximately a total of 1,960 mg of drug. Atypical C. neoformans cells in diverse sizes and blastoconidia forms were isolated from cerebrospinal fluid (CSF). CSF stained with a China ink preparation revealed the...

Cerebral aspergillosis due to Aspergillus fumigatus in AIDS patient: first culture - proven case reported in Brazil

La aspergilosis cerebral es una causa rara de lesión expansiva cerebral en pacientes con SIDA. Presentamos el primer reporte de un absceso cerebral causado por Aspergillus fumigatus en un paciente brasileño con SIDA. El paciente, de 26 años de edad, presentaba antecedentes de infección por el virus de la inmunodeficiencia humana (VIH), tuberculosis pulmonar y toxoplasmosis cerebral. Manifestó fiebre, tos, disnea y dos episódios de convulsiones. La tomografía computadorizada (TC) demostró una lesión hipodensa parasagital y bi-parietal con realce periférico e importante efecto de masa. Se inició tratamiento anti-Toxoplasma. Tres semanas después, el paciente evidenció confusión mental y una nueva TC de cráneo mostró aumento de la lesión. Se realizó biopsia cerebral con drenaje de 10 mL de material purulento. El examen micológico directo reveló hifas hialinas septadas. Se inició anfotericina B deoxicolato. La cultura del material demostró presencia de Aspergillus fumigatus. En los siguientes dos meses el paciente fue sometido a otras tres cirugías, insertándose un catéter de drenaje y administrándose anfotericina B intralesional. Tres meses después de la admisión hospitalaria, la condición neurológica del paciente sufrió discretos cambios. Sin embargo, falleció debido a neumonia intrahospitalaria. Aunque muy raros, los abscesos cerebrales causados por Aspergillus fumigatus deben ser considerados en el diagnóstico diferencial de las lesiones expansivas cerebrales en pacientes con SIDA.

Cryptococcosis: a review of the brazilian experience for the disease

Cryptococcosis is a systemic mycosis caused by Cryptococcus neoformans. The disease occurs in patients with cellular immunodeficiency. The incidence of cryptococcosis arises with aids, and mycosis is one of the opportunistic infections that defines AIDS. After the HAART era the occurrence of cryptococcosis decreased all over the world, but it still continues to be a prevalent disease in Brazil. Thus, we consider this paper to be very important as a result of our reviewing of Brazilian literature regarding some relevant aspects of that disease.