Amplification of human papillomavirus early genes for detection of nine genotypes in Venezuelan women / Amplificación de genes tempranos del virus del papiloma humano para la detección de nueve genotipos en mujeres venezolanas

Genotyping of human papillomavirus (HPV) by molecular methods may enhance assessment information for screening and following of cervical infection. In this study, cervical samples were obtained from 250 women, along with colposcopic and cytological evaluations. A Nested-PCR-Multiplex assay was used for HPV detection and genotyping for HPV E6/E7 early regions. Infection with HPV was detected in 26.0% of the samples, with 98.46% positive for at least one genotype. High-risk HPVs were identified in 98.44%. HPV18 infection was detected in 76.92% of samples and HPV16 in 36.92%, whether as individual or as multiple infections. These infections were seen more frequently in women under 35 years of age (64.7%). The Pap-smear examination showed that 16.92% (11/65) of the samples had cervical changes suggesting HPV infection, whereas the colposcopic evaluation was suggestive of HPV infection in 47.69% (31/65) of DNA-HPV positive samples. There was a high frequency of high-risk HPV genotypes, particularly HPV18, alone or in multiple-type infections. Colposcopy findings showed to have a high predictive value for the diagnosis of HPV infection. The results reflect that over 50% of HPV-positive patients had a normal colposcopy and/or cytology, highlighting the importance of including HPV testing along with genotype identification in routine gynecological evaluations.

La genotipificación de virus del papiloma humano (VPH) por métodos moleculares puede proveer información valiosa para el monitoreo y seguimiento de la infección cervical. Se estudiaron muestras cervicales obtenidas a partir de 250 mujeres, en quienes se realizó, simultáneamente, evaluación citológica y colposcópica. Un ensayo de PCR, en formato Nested-múltiple para las amplificación de la región temparana E6/E7, fue realizado para la detección y genotipificación viral. La infección por VPH se detectó en 26,0% de las muestras, de las cuales, un 98,46% fue positivo para al menos uno de los genotipos probados; los VPH de alto riesgo se identificaron en un 98,44%. Los genotipos más frecuentes fueron VPH18 con un 76,92%, y VPH16 con un 36,92%, ya sea como infecciones individuales o múltiples. En cuanto a la edad, estas infecciones fueron más frecuentes en mujeres menores de 35 años, con un 64,7%. Los resultados citológicos mostraron que 16,92% (11/65) de las muestras cervicales tenían cambios sugestivos de infección por VPH; mientras que la evaluación colposcópica fue sugestiva de la infección por VPH en 47,69% (31/65) de las muestras ADN-VPH positivas. Se determinó una elevada frecuencia de los genotipos de VPH de alto riesgo, particularmente VPH18, solo o en infecciones múltiples. Los hallazgos colposcópicos mostraron un elevado valor predictivo para el diagnóstico de la infección por VPH. Los resultados reflejan que más del 50% de las pacientes VPH positivas tenían colposcopía y/o citología normal, evidenciando la importancia de incluir las pruebas de detección e identificación de VPH en la evaluación ginecológica de rutina.

Comparative analysis of three methods for HPV DNA detection in cervical samples / Análisis comparativo de tres métodos para la detección del ADN de VPH en muestras de cuello uterino

High risk HPV infection is considered to play a central role in cervical carcinogenesis. HPV DNA testing has shown to be a very useful tool for screening and following cervical infections. The aim of this study was to compare three methods for HPV DNA detection, along with cytology and colposcopy analysis. Cervical samples were collected from 100 sexually active women in Mérida, western Venezuela. HPV infection was screened using Hybrid-Capture 2 (HC2), L1-Nested-PCR and E6/E7-PCR assays. 40% of the samples (40/100) were HPV positive by at least one of the DNA detection methods. HC2 detected HPV in 12% specimens. L1- and E6/E7-PCRs showed 50% sensitivity and 77% specificity.The agreement rate between HC2 and both PCR assays was 65%. Kappa value showed moderate concordance between HC2 and both PCR methods (κ=0.55; CI 95%). Also moderate concordance was seen when L1- and E6/E7-PCRs were compared (κ=0.48; CI 95%). There was a significant association between the Schiller test and E6/E7-PCR (p=0.006) for HPV infection. An acceptable agreement between all three assays for HPV detection was observed. Nevertheless, different PCR formats need to be further analyzed in order to make the right choice of method for HPV testing.

La infección con VPH de alto riesgo es el principal factor etiológico asociado al desarrollo de carcinogénesis cervical y las pruebas de detección de ADN-VPH han mostrado ser una herramienta esencial para la pesquisa y seguimiento de estas infecciones. El objetivo del estudio ha sido comparar tres métodos para la detección del ADN viral, en combinación con los análisis colposcópico y citológico. Se obtuvieron muestras cervicales de 100 mujeres sexualmente activas, en Mérida, Venezuela. La detección de infecciones por VPH se realizó por Captura Híbrida 2 (CH2) y los ensayos de PCR “L1-Nested-PCR” y “E6/E7-PCR”. 40% de las muestras (40/100) fueron positivas para VPH por al menos uno de los métodos aplicados. 12% de las muestras analizadas fueron positivas para VPH por CH2. Las dos PCR utilizadas mostraron un 50% de sensibilidad y 77% de especificidad. La coincidencia observada entre CH2 y las dos PCR fue del 65%. La determinación del valor Kappa mostró una concordancia moderada entre CH2 y ambos métodos de PCR (κ=0,55; CI 95%). También existió concordancia moderada al comparar las PCR de las regiones L1 y E6/E7 de VPH (κ=0,48; CI 95%). Hubo una asociación significativa entre el resultado del test de Schiller y la PCR E6/E7 (p=0,006) para la infección por VPH. Se determinó una concordancia aceptable entre los tres métodos aplicados para la detección de VPH; sin embargo, las PCR deben ser analizadas en trabajos futuros con el fin de establecer las pruebas más adecuadas para la detección viral.

Infección cervical por el virus del papiloma humano: diagnóstico por citología y por captura de híbridos del ADN viral / Infection cervical by the papillomavirus human: diagnostic by citology and by capture of hybrid of the ADN viral

Comparar la citología con el método de captura de híbridos del ADN viral para diagnóstico del virus del papiloma humano. Se estudiaron 101 mujeres que acudieron a la consulta de ginecología en la Sociedad Anticancerosa de Mérida, Estado Mérida. Facultad de Medicina y Farmacia de la Universidad de Los Andes, Mérida. Se obtuvieron muestras cervicales para la realización de ambos métodos. Diez resultaron positivas para el método de captura. La citología detectó "lesión intraepitelial escamosa de bajo grado" en dos de los casos positivos por el método de captura. Los casos restantes fueron descritos como "otras alteraciones". Las citologías "normales" resultaron negativas por el mismo método. La citología de células cervicales es un método poco sensible para establecer diagnóstico de infección por virus del papiloma humano. Se recomienda el método de captura de híbrido del ADN viral en mujeres con citología anormal y confirmación de casos dudosos