ABSTRACT
La ß-galactosidasa semipurificada del A. fonsecaus fue inmovilizada covalentemente sobre sílice aminada activada con glutaraldehído. Se estudió la influencia del área específica del soporte, de la concentración de proteínas y del PH de inmovilización sobre los rendimientos del proceso. Se demostró que el área específica más efectiva fue de 122 m2 (aproximadamente 250A) y que la concentración de proteínas y el PH óptimo de inmovilización fueron de 1,6 g/l y 8,6 respectivamente. La enzima inmovilizada tiene una zona de PH óptimo para la hidrólisis del orto-nitrofenil ß-D-galactopiranósido (ONPG) semejante a la enzima libre. Los resultados obtenidos utilizando la ß-galactosidasa purificada de A. oryzae son comparables a los resultados obtenidos con los preparados semipurificados de ß-galactosidasa de A. fonsecaus. Este estudio crea las premisas para el empleo de la ß-galactosidasa de esta nueva fuente microbiana, en la inmovilización covalente sobre otros soportes utilizables en procesos industriales, para los que las propiedades de esta enzima sean relevantes
Subject(s)
beta-Galactosidase/isolation & purification , Clinical Enzyme Tests/methods , Enzymes, Immobilized , Fungi/enzymology , Silicon DioxideABSTRACT
La ß-galactosidasa del A. fonsecaeus con actividad específica entre 19-24 U/mg, a concentraciones de 1,6-3,3 g/l y PH 8,6 fue inmovilizada covalentemente sobre derivados celulósicos del maíz (DCM), con altos rendimientos (667 U/g de DCM). El mayor porcentaje de enzima inmovilizada y los valores superiores de actividad enzimática por gramo de soporte, se obtuvieron con el empleo de DCM de 0,8 mm. Fueron determinadas algunas características cinéticas de la ß-galactosidasa inmovilizada de A. fonsecaeus y A. oryzae en reactor antidifusional utilizando ortonitrofenil-ß-D-galactopiranósido (ONPG) y lactosa como sustrato. La enzima de A. fonsecaeus presenta valores de Km aparente inferiores a la de A. oryzae en forma inmovilizada, contrario a lo que ocurre en forma libre. La hidrólisis continua de soluciones de lactosa en reactores de columna empacada con DCM ß-galactosidasa de ambos microorganismos, produjo resultados similares y comparables a los obtenidos en otros sistemas reportados. La enzima inmovilizada del A. fonsecaeus fue muy estable; los tiempos de vida media a 35-C y 50-C, fueron de 240 y 80 días respectivamente. La enzima inmovilizada puede ser empleada para la hidrólisis continua de la lactosa del suero lácteo a 50-C y PH 4,5 con una productividad de 0,9 g de lactosa/g de DCM-enzima/hora.