Identificación diferenciación de monosacárido y disacáridos diasteroméricos no derivatizados por esi-it-ms/ms / Identification nnd differentiation of underivatzed diasteromeric mono-and disaaccharides by esi-it-ms/ms

Los azúcares son importantes moléculas que desempeñan funciones trascendentales de señalización celular en los organismos superiores. Su complejidad estructural, representada por sus isómeros, anómeros y diasterómeros, amerita la implementación de metodologías modernas, rápidas y sensibles para su identificación y diferenciación. La espectrometría de masas y su analizador de trampa de iones brinda nuevas alternativas de análisis que favorecen el control de las energías de fragmentación de los analitos. A pesar de que la diferenciación de estereoisómeros no ha sido el campo de aplicación principal de la espectrometría de masas, se ha implementado una metodología para diferenciar los monosácaridos β-D-galactosa y β-D-glucosa y los disacαridos β-D-galactopiranosil-(1→4)-β-D-glucopiranσsido (lactosa), α-D-glucopiranosil-(1→4)-β-D-glucopiranσsido (maltosa) y β-D-fructofuranosil-(2↔1)-α-D-glucopiranσsido (sacarosa) a travιs de sus aductos con amonio y litio por ESI-IT-MS/MS en infusión directa. Se emplean diferentes energías de fragmentación para asegurar la existencia de iones marcadores de la estereoquímica de los analitos. Se evidencia que controlar las energías de colisiones en el análisis estructural de moléculas provee una poderosa y moderna herramienta analítica para los laboratorios de análisis.

Sugars are important molecules with remarkable cell signals pathway functions in higher organisms. The structural complexity of sugar represented by its isomeric, anomeric and diasteromeric configurations deserve the implementation of modern, rapid and sensitive methodologies for its identification and differentiation. Mass spectrometry and its analyzer of ion trap provide new alternative techniques that encourage the control of the fragmentation energies supplied to molecules. Since stereoisomer differentiation is consider outside the mass spectrometry domain, a methodology has been applied in order to differentiate β-D-galactose, β-D-glucose and the disaccharides β-D-galactopyranosyl-(1→4)-β-D-glucopyranoside (lactose), α-D-glucopyranosyl-(1→4)-β-D-glucopyranoside (maltose) y β-D-fructofuranosyl-(2↔1)-α-D-glucopyranoside (sacarose) trough its ammonium and lithium adducts by infusion on ESI-IT-MS/MS mass spectrometer. Different fragmentation energies have been used to ensure the ion marker occurrence in the analyte stereochemistry. It is evident that the collision energies control in structural analysis of molecules provides a powerful and modern analytical tool to be applied in control laboratories.

Caracterización fitoquímica de una fracción de biflavonoides de Garcinia madruno: Su inhibición de la oxidación de LDL humana y su mecanismo de estabilización de especies radicalarias / Phytochemycal characterization of a biflavonoid fraction from Garcinia madruno: Inhibition of human LDL oxidation and its free radical scavenging mechanism

A una fracción biflavonoide (FB) caracterizada fitoquímicamente de Garcinia madruno (Clusiaceae),se le evalúa su potencial inhibitorio de la oxidación de LDL y su capacidad estabilizadora de especies radicalarias, correlacionando dichas actividades con su contenido en biflavonoides. Los biflavonoides morelloflavona, volkensiflavona y amentoflavona se identifican a partir de la FB. El extracto que contiene la FB (extracto AcOEt) se determina como el principal factor involucrado en la actividad estabilizadora de radicales libres de esta especie vegetal, obteniendo la actividad estabilizadora del radical DPPH• a una concentración de 4,50 μg/mL. La peroxidación inducida con CuSO4 de las lipoproteínas de baja densidad, se reduce significativamente en presencia de FB (CE50 = 11,85 μg/mL). El biflavonoide morelloflavona se determina como el principal responsable de la protección ejercida por la FB frente a la actividad estabilizadora de radicales libres y la peroxidación lipídica, aunque posiblemente existan procesos de sinergismo. Estas propiedades sugieren que la FB de G. madruno es un excelente candidato para ser utilizado como antioxidante.

Los jugos de cítricos inhiben la oxidación de lipoproteínas de baja densidad: relación entre actividad captadora de radicales libres y movilidad electroforética / Citrus juice inhibits low density lipoprotein oxidation: relationship between free radical scavenger activity and electrophoretic mobility

Epidemiological studies have shown that consumption of fruits and vegetables are associated with beneficial effects on human health including the reduction of coronary artery disease (CAD) risk. Fruits and their juices contain phytochemicals that inhibit in vitro the low-density lipoprotein (LDL) oxidation, a key process involved in the generation of arterial lessions. We developed an study to examine the phenolics compound content of citrus juice cultivated in the southwest of Antioquia, Colombia, its free radical scavenger activity and in vitro effect on LDL oxidation. Five citrus varieties were analyzed: Citrus sinensis valencia, Citrus reticulata clementina, Citrus reticulata oneco, Tangelo Orlando and Tangelo mineola. The results showed that no correlation exists between phenolic compounds content and free radical scavenger activity in the citrus juices analyzed. However a high inhibitory capacity of LDL oxidation was found.

Estudios epidemiológicos han demostrado que el consumo de frutas y vegetales se asocia con efectos beneficiosos sobre la salud humana, incluyendo reducción del riesgo de enfermedades cardiovasculares (ECV). Las frutas y sus jugos contienen compuestos que inhiben la oxidación de Lipoproteínas de Baja Densidad (LDL), un proceso clave en el desarrollo de la lesión arterial. Se ha desarrollado un estudio para determinar el contenido de compuestos fenólicos, la actividad captadora de radicales libres y el efecto sobre la oxidación de LDL, de jugos de cítricos cultivados en el suroeste de Antioquia (Colombia). Cinco variedades de cítricos fueron analizadas: Citrus sinensis valencia, Citrus reticulata clementina, Citrus reticulata oneco, Tangelo orlando, Tangelo mineola. Se demostró que en estos jugos no existe correlación entre el contenido de compuestos fenólicos y la actividad captadora de radicales libres (ACRL), sin embargo, se encontró una alta capacidad para inhibir la oxidación de LDL.

Actividad antiplasmodial de alcaloides aporfínicos de rollinia pittieri y pseudomalmea boyacana (ANNONACEAE) / Antiplasmodial activity of aporphine alkaloids from rollinia pittieri and pseudomalmea boyacana (ANNONACEAE)

En el desarrollo de estudios etnobotánicos o quimiotaxonómicos en búsqueda de sustancias biológicamente activas con efectos antiparasitarios a partir de plantas colombianas de la familia Annonaceae, fue observada la actividad antiplasmodial sustancial para los extractos de acetato de etilo de tallos de Rollinia pittieri y Pseudomalmea boyacana (Annonaceae). Los alcaloides aislados a partir de éstas fueron estudiados. De los compuestos, liriodenina presentó la mayor actividad contra las cepas de Plasmodium falciparum, sensible y resistente a cloroquina (CI50 = 8.0-10,0 µg/ml). Igualmente fue evaluada la capacidad de inhibición de la formación de la â-hematina (If?-h) a los metabolitos aislados. O-metilmoschatolina y melosmina presentaron porcentajes de inhibición mayor del 96 (por ciento) cuando fueron evaluados a una concentración de 2 mg/ml. Algún grado de actividad citotóxica fue observada en todos los alcaloides oxoaporfínicos aislados contra células U-937

Productos naturales alcaloidales con actividad antiprotozoaria / Alkaloidal natural products with antiprotozoal activity

La morbilidad y la mortalidad asociadas con las enfermedades causadas por parásitos protozoarios, han motivado la investigación de nuevos agentes más potentes y selectivos. Los productos naturales como parte de esta investigación, juegan un papel crucial en el desarrollo de una nueva generación de fármacos antiparasitarios. Este trabajo cubre los compuestos de tipo alcaloide aislados a partir de fuentes naturales con actividad antiparasitaria, principalmente contra Leishmania spp, Tripanosoma cruzi y Plasmodium falciparum. Los compuestos están organizados de acuerdo a su estructura química y se discuten temas como mecanismos de acción (en donde hay disponibilidad de trabajos), desarrollos recientes en el campo y nuevas estrategias experimentales

Actividad captadora de radicales libres de alcaloides de rollinia pittieri (anonnaceae) por el método del dpph / Free radicals scavenging activity of alkaloids from rollinia pittieri (anonnaceae) by the dpph method

La búsqueda de compuestos con actividad antioxidante es de gran interés para las industrias farmacéuticas y de alimentos. A través del fraccionamiento cromatográfico de los tallos de Rollinia pittieri (Annonaceae) se aislaron 2 alcaloides con actividad antioxidante según el método del DPPH, la O-metil-moschatolina ?1? con núcleo oxoaporfínico y la melosmina ?2? con núcleo 7,7-dimetil-1,2,3,9- tetrahidoraporfínico. Se evalúa además un derivado acetilado hemisintético de la melosmina, la O,O-diacetil-melosmina ?3?, el cual es sometido al mismo ensayo realizado a las moléculas anteriormente mencionadas. La actividad de los tres compuestos es comparada con 2 estándares antioxidantes frecuentemente empleados en la industria de alimentos, el 2-terbutil-hidroxitolueno (BHT) y el ácido ascórbico. La melosmina reporta una IC50 igual a 3.037 µg/mL, 70 veces mayor a la presentada por el BHT con una IC50 de 207.4 µg/mL. El ácido ascórbico presenta una IC50 de 1.58 µg/mL. La identificación de los alcaloides se realizó por métodos espectroscópicos

Variabilidad genética en cepas de Sporothrix schenckii aisladas en Abancay, Perú / Genetic variability in Sporothrix schenckii strains isolated in Abancay, Peru

Objetivo: Identificar los genotipos de S. schenckii que circulan en 2 distritos de la provincia de Abancay, Perú. Material y Métodos: Se evaluaron 17 cepas procedentes de pacientes con lesiones linfocutáneas y lesión cutánea fija mediante la técnica del ADN Polimorfo Amplificado Aleatorio - Reacción en Cadena de la Polimerasa (RAPD - PCR) con el cebador GTG 5 (GTG GTG GTG GTG GTG). Resultados: Identificamos 6 genotipos, siendo el genotipo I el predominante en las áreas de estudio. No se logró asociar los genotipos obtenidos con caracteres clínicos y geográficos. Conclusiones: Nuestros resultados evidencian que existe biodiversidad genética entre las cepas de S. schenckii que circulan en ambas zonas.

Objective: To identify S. schenckii genotypes circulating in 2 districts from the Abancay province in Peru. Material and Methods: 17 strains from patients with lymphocutaneous and fixed cutaneous lesions using RAPD-PCR techniques (Randomized Amplified Polymorphic DNA-Polymerase Chain Reaction) with A GTG 5 primer (GTG GTG GTG GTG GTG). Results: We identified 6 genotypes, being genotype I the most frequent in the studied geographical areas. There was not any association with clinical and geographical characteristics. Conclusions: Our results prove that there is genetic biodiversity between circulating S. schenckii strains in the two districts assessed.

Evaluación serológica de una proteína recombinante a partir de una cepa aislada del virus de la fiebre amarilla en el Perú: un estudio piloto / Serologic assessment of a recombinant protein from an isolated strain of yellow fever virus in Peru: a pilot study

Objetivo: Evaluar serológicamente una proteína recombinante de 66 kDa (Er66) de una cepa del virus de la fiebre amarilla aislada en el Perú usando anticuerpos inmunoreactivos. Material y métodos: La proteína Er66 fue expresada in virtro en la bacteria Escherichia coli y enfrentada a títulos de 1/100, 1/50 y 1/25 de anticuerpos monoclonales, y a sueros con anticuerpos IgM e IgG inmunoreactivos contra el virus de la fiebre amarilla mediante ensayos de Western blot (WB). Asimismo, se evaluaron proteínas totales de las cepas de referencia del virus dengue (DEN) y fiebre amarilla como controles de antigenicidad. Resultados: La proteína recombinante Er66 presentó antifenicidad contra títulos de 1/50 y 1/25 de anticuerpo monoclonal (MAB8701); sin embargo, no se observó inmunoreactividad en suerpos positivos para fiebre amarilla y dengue. Los ensayos con extractos crudos de la cepa de fiebre amarilla Asibi 17D (PFTA) revelaron que la antigenicidad de las proteínas virales comprendidas entre 60 y 80 kDA fue afectada negativamente a temperaturas desnaturalizantes de 100grados centígrados. En cambio, tratamientos con ß-mercaptoetanol sin calor generó un aumento de la antigenicidad de dichas proteínas. Siguiendo este mismo principio, la proteína Er66 fue sometida a tratamientos desnaturalizantes con ß-mercaptoetanol sin incluir calor y fue enfrentada nuevamente a los sueros reactivos. El resultado final reveló que la proteína Er66 generó generó inmunoreactividad frente a sueros con altos títulos de anticuerpos IgM e IgG para fiebre amarilla mientras que en otras muestras se observó una débil señal. Conclusiones: Los datos obtenidos en este trabajo demuestran que la Er66 pudo ser reconocida por anticuerpos frente a sueros con altos tíulos de anticuerpos IgM e IgG específicos para fiebre amarilla presentes en sueros de pacientes infectados. Los datos presentados en este artículo sugieren el uso de proteínas recombinantes como posibles candidatas de valor diagnóstico para la FA

Caracterización molecular de Klebsiella pneumoniae y Enterobacter cloacae productoras de ß-lactamasas de espectro extendido tipo SHV-5 en una unidad de cuidados intensivos neonatal de Lima / Molecular characterization of extended-spectrum type SHV-5 ß-Lactamases producing Klebsiella pneumoniae and Enterobacter cloacae in a neonatal intensive care unit in Lima

Objetivo: Determinar los mecanismos implicados en la transmisión y resistencia antimicrobiana de aislamientos hospitalarios de Klebsiella pneumoniae y Enterobacter cloacae. Materiales y métodos: Se determinó la diversidad genética de 10 aislamientos bacterianos provenientes de pacientes hospitalizados y muestras ambientales procedentes de una unidad de cuidados intensivos de neonatos de un hospital de Lima utilizando el patrón de banda de ADN ribosomal y plasmídico. Posteriormente, se caracterizó la resistencia antimicrobiana y sus principales factores utilizando electroforesis de punto isoeléctrico, Southern Blotting y PCR. Finalmente se evaluó la capacidad de transferencia de la resistencia mediante ensayos de conjugación bacteriana. Resultados: Todos los aislamientos de K. pneumoniae y E. cloacae presentaron el mismo perfil plasmídico. Los aislamientos de E. cloacae presentaron un mismo patrón genético, por el contrario se encontraron cuatro genotipos distintos de K. pneumoniae altamente relacionados. Todos los aislamientos produjeron ßlactamasa de especto extendido Tipo SHV-5 transferible a otras especies. Conclusiones: El estudio sugiere que la diseminación de estas bacterias en los neonatos pudo haber sido favorecida por un inadecuado manejo asistencial, una defectuosa conservación de leche para el consumo neonatal y el indiscriminado uso de antibióticos, el cual generó una activa transmisión de genes responsables de la resistencia antimicrobiana

Caracterización e inmunoreactividad de la proteína acídica ribosomal P2ß de L. (V.) braziliensis / Characterization and immunoreactivity of Leishmania braziliensis P2ß acidic ribosomal protein

Introducción: El diagnóstico serológico de la Leishmaniasis usando proteínas totales presenta reacciones cruzadas. la caracterización de nuevos antígenos de Leishmania mejorará el uso de herramientas serológicas en el diagnóstico de esta enfermedad. Objetivo: Caracterizar un nuevo antígeno de Leishmania. Materiales y métodos: Se selecionó el bacteriófago T166-U19 de una biblioteca de cADN de L. (V.) Brasiliensis el cual es reactivo a mezclas de sueros de Leishmaniasis cutánea y mucocutánea. El cADN del clon T166-U19 fue subclonado en el plásmido pGEX, luego secuenciado y la proteína recombinante fue expresada.La reactividad de esta proteína reombnante se evaluó por ELISA. Resultados: El cADN del clon T166-U19 presentó un marco de lectura abierto de 318 pb que traduce una proteína de 105 animoácidos con 81,1 por ciento, 82,9 por ciento y 60,7 por ciento de identidad total con la proteína acídica ribosomal LiP de L. (L.) infantum, P2 de L.(L.) donovani, y P2 de T. cruzi, respectivamente. Además, la proteína recombinante presentó baja reactividad (50 por ciento) con sueros de pacientes con Leishmaniosis, mientras que presentó reactividad cruzada con sueros de pacientes chagásicos. Conclusiones: Se caracterizó por primera vez la proteína acídica ribosomal P2ß de L. (V.) brasiliensis, y presentando baja reactividad con sueros de pacientes con Leishmaniasis

Variabilidad genética de plasmodium falciparum en pacientes con malaria grave y malaria no complicada en Iquitos - Perú / Genetic viability of plasmodium falciparum in patients with severe malaria and with non-complicated malaria in Iquitos-Peru

Objetivo: Determinar la diversidad genética del gen que codifica la proteína rica en glutamato (GLURP) de Plasmodium falciparum en pacientes con malaria complicada y no complicada circulante en un área del departamento de Loreto, distrito de Maynas. Materiales y métodos: La diversidad genética fue analizada usando reacción en cadena de la polimerasa (PCR) en 30 muestras sanguíneas de pacientes con malaria no complicada (MNC) y 46 con malaria grave complicada (MGC). Resultados: Ocho genotipos fueron detectados en pacientes con MNC (Genotipo I, II, III, IV, V, VI, VII y VIII y cuatro genotipos en los pacientes con MGC (Genotipo V, VI, VII, VIII). Asimismo, en 50 por ciento de las muestras con MNC fueron detectadas infecciones múltiples, a diferencia de las muestras de MGC en donde no se detectó infecciones múltiples. Conclusión: Existe una diversidad genética en esta región del gen GLURP de P. falciparum, para esa época (marzo 1998 - abril 1999) y esa área del país. En tal sentido, nuestros resultados podrían servir de base para llevar a cabo estudios epidemiológicos posteriores, ya que permitiría conocer la distribución de las cepas circulantes en nuestro país.

Análisis genético del virus peruano de la fiebre amarilla / Genetic analysis of the peruvian yellow fever virus

Objetivo: Determinar las variantes genÚticas de aislamientos del virus peruano de la Fiebre Amarilla (FA). Materiales y mÚtodos: La región carboxiterminal del gen de la envoltura (E) de cinco aislamientos de FA obtenidas de pacientes provenientes de Ayacucho 1978 (PER1), JunÝn 1995 (PER2), Cerro de Pasco (PER3), Cusco (1998) y San MartÝn (1999) fue amplificada por PCR, secuenciada y analizada con programas software de ADN. Resultados: El Ýndice de similaridad de la secuencia de aminoßcidos presentó valores entre 97,6 por ciento y 99,7 por ciento de similiridad. El anßlisis filogenÚtico demostró una distancia genÚtica entre 0,40 y 6,50 mediante la secuencia de nucleótidos y, a travÚs de la secuencia de animoßcidos se observó un rango de 0,30 y 4,29. Sin embargo, las secuencias correspondientes a los sitios de glicosilación y a los apitopes de reconocimiento humoral fueron conservadas entre los cinco aislamientos, con excepción de algunos aislamientos de referencia reportados por otros autores. Conclusiones: Los virus de FA peruanos forman un grupo filogenéico distintoa otros virus de FA sudamericanos, basados en el anáisis genéico del gen E.

Loci geneticos asociados al trastorno bipolar: estudios en poblacion colombiana / Genetic loci associated to bipolar disorder: studies in colombian population

Objetivos: Caracterizar una muestra de familias y tríos de una población colombiana aislada para mapear loci involucrados en la vulnerabilidad al Trastorno Afectivo Bipolar tipo I (TAB- I). Métodos: Se recolectan tríos y genealogías utilizando las entrevistas FIGS-DIGS en miembros de las familias y posibles afectados. El poder para detectar ligamiento (PDL) se estima por simulación. El modelo utilizado asume una frecuencia para el alelo afectado de 0.003, penetrancias de 0.01,0.81 y 0.9 y un marcador de cuatro alelos a 5cM del locus. Resultados: Se identificaron 28 familias con TAB-I, con 3.603 individuos y 160 afectados, y 246 tríos. Asumiendo homogeneidad genética y teniendo en cuenta la evidencia genética del mestizaje, las simulaciones mostraron PDL significativos de 100 por ciento para un LOD-score>3. Estamos examinando el desequilibrio promedio en tríos y tamizando en familias los cromosomas 12,18 y 21. Conclusión: Tenemos un grupo significativo de familias y trios pertenecientes a una población aislada con un poder para detectar ligamiento al Trastorno Afectivo Bipolar. Esto permite realizar estudios de ligamiento buscando genes involucrados en la vulnerabilidad al TAB-I en población Colombiana

Síntesis in vitro de la proteína de la envoltura del virus peruano de la fiebre amarilla / In vitro synthesis of the envelope protein of the peruvian yellow fever virus

Objetivo: Sintetizar la proteína recombinante de la envoltura (Er) del virus peruano de la Fiebre Amarilla (FA) utilizando técnicas moleculares. Materiales y métodos: El gen de la proteína de interés fue amplificado por transcripción reversa - reacción en cadena e la polimerasa (RT-PCR) y clonado en un vector plasmídico para ser analizado mediante secuenciamiento de ADN. El inserto de ADN fue subclonado en un vector de expresión para ser traducido a proteína. Se purificó la proteína mediante cromatografía de afinidad bajo condiciones denaturantes, siendo visualizada por electroforésis en SDS-PAGE.Resultados: Se sintetizó y purificó la pr E del virus de la FA. Presentó un peso de && kDa, y luego de tres horas de inducción a partir de 1x10 células (OD=0,5) se obtuvo 10mg/mL de la proteína a miniescala. Conclusión: El análisis de la secuencia de aminoácidos demostró que Er podría ser un buen candidato a ser evaluado serológicamente y luego usado como herramienta de diagnóstico específico para la FA

Primer aislamiento de Escherichia coli O157:H7 Enterohemorrágica en el Perú

En Febrero del año 2001 como parte del "Estudio transversal de los agentes etiológicos de diarrea aguda" en la Macrorregión Sur del país, el Laboratorio Referencial de Tacna aisló una cepa procedente de una muestra de heces de un lactante de 11 meses de edad con un cuadro de diarrea disentérica, identificándola como Escherichia coli O157. Esta cepa fue confirmada y caracterizada en el Instituto Nacional de Salud como E. coli O157:H7 toxina shiga tipo II, siendo el primer aislamiento reportado de Escherichia coli enterohemorrágica en el Perú.

In February 2001, as a part of the "Cross-sectional study of the etiology agents of acute diarrea" in the South Macro region of the country, the Reference Laboratory of Tacna isolated a strain from a stool sample of a eleven months breast feeding infant who suffered an episode of dysenteric diarrhea, identifying the strain as Escherichia coli O157. The strain was confirmed and characterized in the National Institute of Health as E. coli O157:H7 which carried a shiga like type II toxin, being the first report of an isolation of enterohemorragic Escherichia coli in Peru.

Tipificación molecular del Vibrio cholerae 01 en el Perú / Molecular typification of Vibrio cholerae 01 from Peru

Este estudio de ribotipificación en 75 cepas de Vibrio cholerae 01 permitió identificar tres variantes ribotípicas, referidas como Per1, Per2 y Per3, aisladas durante el periodo 1991-1999 en el Perú. La variante Per1 fue reportada tanto en la etapa epidémica y endémica del cólera, mientras que Per2 y Per3 se relacionan sólo con la etapa endémica. Los resultados mostraron además una aparición constante y mayoritaria de la variante Per1, poniendo en evidencia la emergencia de un mismo grupo clonal en los brotes epidémicos del Perú. Las variantes ribotípicas encontradas fueron comparadas con los ribotipos de diferentes cepas referenciales de V. cholerae previamente caracterizadas. Se observó una identidad total del ribotipo Per1 con la variante ribotípica de aislamientos Asiáticos (Tailandia), encontrándose además altos índices de similitud entre los ribotipos Per1, Per2 y Per3, y evidenciándose una estrecha relación entre las cepas peuansa y los aislamientos asiáticos