Hepatozoon canis and Leishmania spp. coinfection in dogs diagnosed with visceral leishmaniasis / Coinfecção com Hepatozoon canis e Leishmania spp. em cães diagnosticados com leishmaniose visceral

Abstract This study describes the occurrence of dogs naturally co-infected with Hepatozoon canis and two Leishmania species: L. infantum or L. braziliensis. Four dogs serologically diagnosed with Visceral Leishmaniasis were euthanized. Liver and spleen samples were collected for histopathological analysis and DNA isolation. H. canis meronts were observed in tissues from all four dogs. H. canis infection was confirmed by PCR followed by sequencing of a fragment of 18S rRNA gene. Leishmania detection and typing was confirmed by ITS1' PCR-RFLP and parasite burden was calculated using ssrRNA quantitative qPCR. A DPP - Dual Path platform test was performed. One out (Dog #2) of four animals was asymptomatic. Dogs #1 and #4 were infected by L. infantum and were DPP test positive. Dogs #2 and #3 were infected by L. braziliensis and were DPP test negative. Furthermore, visceral dissemination was observed in Dogs #2 and #3, since L. braziliensis was detected in liver and spleen samples. The visceral dissemination of L. braziliensis associated with systemic signs suggested that this co-infection could influence the parasite burden and disease progression.

Resumo O presente estudo descreve a ocorrência de coinfecção com Hepatozoon canis e duas espécies de Leishmania (L. infantum ou L. braziliensis) em cães. Quatro cães sorologicamente diagnosticados com leishmaniose visceral foram eutanasiados. Amostras do baço e fígado foram submetidas à histopatologia e extração de DNA. Merontes de H. canis foram observados nos quatro cães. A infecção por H. canis foi confirmada por PCR e sequenciamento de um fragmento do gene 18S rRNA. A infecção por Leishmania e tipagem foram realizadas por PCR-RFLP do região intergênica ITS1. A carga parasitária foi calculada pela qPCR quantitativa baseada no gene ssrRNA. O teste DPP - Dual Path platform foi realizado. Apenas o Cão #2 era assintomático. Os cães #1 e #4 estavam infectados com L. infantum e foram positivos no DPP. Os cães #2 e #3 estavam infectados com L. braziliensis e foram negativos no DPP. Além disso, visceralização foi observada nos cães #2 e #3, nos quais L. braziliensis foi detectada em amostras de baço e fígado. A visceralização da L. braziliensis associada a sinais clínicos sistêmicos sugerem que esta coinfecção pode ter influenciado na carga parasitária e progressão da doença.

Análise da resposta imune celular in situ e in vitro de pacientes com lesão ativa ou cicatriz de leishmaniose tegumentar americana / Analysis of the cellular immune reply in situ and in vitro of patients with active injury or scar of American cutaneous leishmaniasis

A pele é a maior interface entre o corpo e o ambiente e promove a primeira linha de defesa contra a invasão de patógenos ou trauma. A cicatrização de lesões de pele envolve um processo complexo e depende do controle do processo inflamatório. Uma das doenças de acometimento cutâneo amplamente distribuída em nosso país é a Leishmaniose Tegumentar Americana (LTA). Nosso estudo de 19 lesões de LTA em atividade mostrou que o infiltrado inflamatório é principalmente constituído por células T e macrófagos, e que a dinâmica de infiltração muda durante a evolução da doença, havendo um aumento da concentração de células CD4(mais) e CD68(mais), e redução da carga parasitária. A associação entre a alta expressão de NOS2 (óxido nítrico sintase tipo 2) e a baixa quantidade de parasitos sugere a importância desta enzima na eliminação das formas amastigotas no sítio da lesão. Tendo em vista a possibilidade de persistência parasitária nas cicatrizes de LTA e a importância da resposta imune local para o controle da carga parasitária, consequentemente no controle do aparecimento de lesões tardias nos propusemos a avaliar a composição celular e os marcadores de atividade inflamatória presentes nos tecidos cicatriciais utilizando a técnica de imunohistoquímica e comparando com os dados observados em lesões em atividade. Foram estudados 18 pacientes divididos em 2 grupos: 1- cicatrizes recentes (1 ano de cura clínica, n=9); 2- cicatrizes tardias (3 anos de cura clínica, n=9). Foi observado que o infiltrado inflamatório anteriormente difuso e intenso nas lesões ativas, torna-se restrito a grupos de células bem delimitados em meio ao tecido fibrótico cicatricial e/ou associado aos anexos cutâneos e em torno de vaso sanguíneos. As cicatrizes com 1 ano de cura clínica, quando das análises pareadas com as lesões em atividade, apresentaram redução significativa do percentual de neutrófilos e dos seguintes marcadores de atvidade: NOS2, E-selectina, Ki67, BCI-2 e Fas. Esta...estabelecido.