Bone resorptive activity of osteoclast-like cells generated in vitro by PEG-induced macrophage fusion

Normal bone remodeling is maintained by a balance between osteoclast and osteoblast activity, whereas defects in osteoclast activity affecting such balance result in metabolic bone disease. Macrophage-macrophage fusion leading to multinucleated osteoclasts being formed is still not well understood. Here we present PEG-induced fusion of macrophages from both U937/A and J774 cell lines and the induced differentiation and activation of osteoclast-like cells according to the expression of osteoclast markers such as tartrate resistant acid phosphatase (TRAP) and bone resorptive activity. PEG-induced macrophage fusion, during the non-confuent stage, signifcantly increased the osteoclastogenic activity of macrophages from cell lines compared to that of spontaneous cell fusion in the absence of PEG (polyethylene glycol). The results shown in this work provide evidence that cell fusion per se induces osteoclast-like activity. PEG-fused macrophage differential response to pretreatment with osteoclastogenic factors was also examined in terms of its ability to form TRAP positive multinucleated cells (TPMNC) and its resorptive activity on bovine cortical bone slices. Our work has also led to a relatively simple method regarding those previously reported involving cell co-cultures. Multinucleated osteoclast-like cells obtained by PEG-induced fusion of macrophages from cell lines could represent a suitable system for conducting biochemical studies related to basic macrophage fusion mechanisms, bone-resorption activity and the experimental search for bone disease therapeutic alternatives.

Coinjerto de nervio periferico y celulas neuronales embrionarias en corteza motora murina / Cografts of peripheral nerve and embrionic neuronal cells in murine motor cortex

El uso de injertos en el sistema nervioso central (SNC) ha sido una alternativa experimental muy usada en los últimos 15 años con el propósito de descifrar algunos de los enigmas concernientes a la falta de regeneración de las neuronas en el SNC. El remplazo de las células muertas o dañadas, y la aplicación de factores de crecimiento son hasta ahora las mejores estrategias para recuperar las funciones perdidas. Por medio de un modelo de lesión en la corteza motora murina (rata, cepa Sprague-Dawley), se evaluó el beneficio de un coinjerto de neuronas cerebelosas embrionarias de ratón (multipotentes e inmortalizadas C17-8) y de nervio periférico de rata, que actúa como reservorio del factor de crecimiento nervioso (Nerve Growth Factor, NGF) principalmente, con respecto a los injertos individuales de los mismos. Se incluyeron las variables peso y sexo para determinar si el modelo de lesión se puede aplicar a un amplio espectro experimental. Se encontró que no existe una covarianza del peso y del sexo respecto al desempeño funcional motor, comprobando así que el modelo de lesión es adecuado para un amplio espectro experimental. El análisis estadístico de los datos de la evaluación funcional motora reveló diferencias significativas entre los grupos que involucraron injerto (ciático, neuronas y coinjerto) y el grupo control de lesión, pero entre los grupos con injerto no existen diferencias significativas, por lo tanto son muy similares entre sí; así como tampoco existen diferencias en el desempeño funcional motor entre los tiempos de evaluación para todos los grupos. De esta forma se concluye que todos los tratamientos conllevan a una recuperación funcional motora con el tiempo, y que los injertos que contienen neuronas muestran una recuperación mayor en un menor tiempo...