ABSTRACT
Background: treatments with lipopolysaccharide (LPS) from E. coli are an accepted way of inducing inflammation in immunological studies since they have the ability to activate a coordinate series of signs through the synthesis of pro-inflammatory cytokines such as interleukin 8 (IL-8), IL-18 and tumor necrosis factor alpha (TNF-α), which can cause significant changes in intestinal structure and functionality. Objective: the aim of this study was to evaluate the effect of adding LPS of E. coli on pro-inflammatory cytokine gene expression IL-8, IL-18 and TNF-α in early-weaned pigs. Methods: fieldwork was conducted at Centro San Pablo, belonging to the Universidad Nacional de Colombia with 32 pigs at 21 days of age, with 6.5 ± 0.5 kg of weight. Animals were fed with a basal diet supplemented with two levels of inclusion of LPS of E. coli serotype 0111:B4 (0 to 0.3 μg/mg of food). Pigs were slaughtered in stages on days 1, 5, 7 and 10 postweaning and complete extraction of small intestine was made. Gene expression was evaluated by qPCR. Blocks at random in a factorial arrangement 2 x 4 were used as statistical design. Results: the basal diet (without addition of LPS) presented increase in mRNA expression (p<0.01) of all the cytokines in jejunum for each post-weaning day, which suggests an inflammatory response and extensive tissue damage in pigs after early weaning. In diet 1 (with consumption of 0.3 μg LPS / mg diet) cytokines TNF-α, IL-8 and IL- 18 showed a significant increase in their levels of expression (p<0.01). All cytokines presented significant increase (p<0.01) in jejunum for each post-weaning day. Conclusion: The increase observed in the expression of TNF-α can be involved in the development of post-weaning diarrhea.
Antecedentes: los tratamientos con lipopolisacáridos (LPS) de E. coli son una forma aceptada para inducción de inflamación en estudios inmunológicos ya que tienen la capacidad de activar una gran variedad de rutas de señalización a través de la síntesis de citoquinas proinflamatorias, tales como interleuquina 8 (IL- 8), IL-18 y factor de necrosis tumoral alfa (TNF-α), las cuales pueden provocar cambios importantes en la estructura y funcionalidad intestinal. Objetivo: el presente estudio tuvo como objetivo evaluar el efecto de la adición de LPS de E. coli sobre la expresión génica de las citoquinas proinflamatorias IL-8, IL-18, y TNF-α en lechones recién destetados. Métodos: este trabajo se realizó con 32 lechones de 21 días de edad, con un peso de 6,5 ± 0,5 kg en el Centro San Pablo, perteneciente a la Universidad Nacional de Colombia. Los animales fueron alimentados con una dieta basal adicionada con dos niveles de inclusión de LPS de E. coli serotipo 0111:B4 (0 y 0,3 μg/mg de alimento). Los animales se sacrificaron escalonadamente los días 1, 5, 7 y 10 posdestete, y se realizó extracción completa del intestino delgado. Se evaluó la expresión génica por qPCR. El diseño estadístico empleado fue de bloques al azar en un arreglo factorial de 2X4. Resultados: la dieta basal (sin adición de LPS) presentó incremento en la expresión de mRNA (p<0,01) de todas las citoquinas en yeyuno para cada día posdestete, lo que sugiere una respuesta inflamatoria y grandes daños tisulares en el lechón luego del destete precoz. En la dieta 1 (con consumo de 0,3 µg LPS /mg dieta) las citoquinas TNF-α, IL-8, e IL-18 presentaron incrementos significativos en sus niveles de expresión (p<0,01). Todas las citoquinas presentaron incremento significativo (p<0,01) en yeyuno para cada uno de los días posdestete. Conclusión: el incremento observado en la expresión de TNF-α puede estar implicado en el desarrollo de diarreas posdestete.
Antecedentes: os tratamentos com lipopolissacarídeos (LPS) de E.coli são uma forma aceita de indução de inflamação para estudos imunológicos quanto que têm a capacidade de ativar uma grande variedade de vias de sinalização através da síntese de citocinas pró-inflamatórias tais como a interleucina 8 (IL-8), IL-18 e fator de necrose tumoral alfa (TNF-α), o que pode causar alterações importantes na estrutura e funcionalidade do intestino. Objetivo: o presente estudo teve como objetivo a adição de LPS de E. coli sobre a expressão génica das citocinas pró-inflamatórias IL-8, IL-18 e TNF-α em leitões desmamados. Métodos: este trabalho foi feito com 32 leitões de 21 dias de idade, com um peso de 6,5 ± 0,5 kg no Centro San Pablo, pertencente à Universidade Nacional de Colômbia. Os animais foram alimentados com uma dieta basal adicionada com dois níveis de inclusão de LPS de E. coli serotipo 0111:B4 (0 y 0,3 μg/mg de alimento). Os animais foram sacrificados nos dias 5, 7 e 10 após o desmame, e foi realizada a remoção completa do intestino delgado. A expressão do gene foi avaliada por qPCR. O desenho estatístico empregado foi de bloco ao acaso num fatorial de 2x4. Resultados: a dieta basal (sem LPS adicionado) mostrou aumento da expressão de mRNA (p<0,01) de todas as citocinas no jejuno para cada dia após o desmame, sugerindo uma resposta inflamatória e grande danos teciduais no porco após o desmame precoce. Na dieta 1 (com um consumo de 0,3 mg de LPS / mg dieta) citocinas TNF-a, IL-8 e IL-18 mostraram aumentos significativos nos níveis de expressão (p<0,01). Todas as citocinas mostraram aumento significativo (p<0,01) no jejuno, para cada um dos dias após o desmame. Conclusão: o aumento observado na expressão de TNF-α pode estar envolvido no desenvolvimento de diarreia pós-desmame.
ABSTRACT
Objetivo. Evaluar el uso de la Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR) para la detección de Brucella abortus en muestras de sangre y leche de vacunos. Materiales y métodos. Este estudio de tipo descriptivo fue realizado durante los años 2004 y 2005. Se analizaron 136 animales de tres fincas localizadas en el municipio de Durania, Norte de Santander, Colombia. Se evaluó la presencia de anticuerpos en la leche mediante la prueba del anillo (PAL). Se amplificó el fragmento de 223pb del gen BCSP31. Se emplearon los cebadores B4 y B5 de la región interna de la secuencia del gen BCSP31 (GenBank, número M20404). Resultados. En aquellos animales positivos se obtuvo una muestra de sangre y leche para el análisis por PCR, la sangre no fue analizada por serología. Se evaluaron diferentes métodos de extracción de ADN. Se encontró que un 13.2% (18/136) de las muestras de leche fueron positivas a la PAL. Se analizaron 33 muestras de leche negativas por PAL de las cuales el 30.3% (10/33) resultaron positivas por PCR. Al analizar las muestras de sangre de los animales positivos por PAL el 94.1% (16/17) fueron positivas por PCR, mientras que el 47% (8/17) de las muestras de leche positivas por PAL, fueron positivas por PCR. Conclusiones. Se demostró la amplificación de un fragmento de ADN de Brucella abortus en muestras de sangre y leche de vacunos. Los resultados preliminares demostraron que es posible usar PCR como prueba diagnóstica de brucelosis en Colombia.
Objective. To evaluate the use of Polymerase Chain Reaction in the detection of Brucella abortus in cattle blood and milk samples. Materials and methods. Between 2004 and 2005 a descriptive study was carried out. One hundred and thirty six females from three different herds located in Durania, Norte de Santander, Colombia were used. The antibodies to Brucella were detected using ring test (RT). Primers B4 and B5 of internal region of gen BCSP31 (GenBank, number access M20404) were used. From those RT positive animals, blood and milk samples were obtained and along with 33 negative milk samples were evaluated by PCR. Blood samples were not analyzed for antibody detection. Different DNA extraction protocols were evaluated and a Brucella abortus gene was amplified using specific primers. Results. The 13.2% of milk samples were positive to RT (18/136), 30.3% (10/33) of negative samples for RT and 94.1% (16/17) of positive samples were both positive by PCR. It was demonstrated that PCR is an useful tool to detect Brucella abortus DNA, either in milk and blood samples. Conclusions. It was determined by PCR a DNA fragment of Brucella abortus in blood and milk of cattle. The preliminary results showed that it is possible to perform PCR as diagnostic test of brucellosis in Colombia.