Proposal of an iELISA for Mycoplasma bovis diagnosis in dairy cattle and associated risk factors / [Proposta de um iELISA para diagnóstico de Mycoplasma bovis em bovinos leiteiros e fatores de risco associados]

Mycoplasma bovis is a highly contagious agent associated with several pathologies in cattle. The detection of reactive antibodies to M. bovis by Indirect Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (iELISA) identifies if there was an exposure to the microorganism. The current study aimed to optimize an iELISA from M. bovis total cell antigen, applying it to bovine serum samples, and to evaluate risk factors. Serum samples were obtained from 400 cows from 17 herds from Southeast Brazil. In the optimization of iELISA, the following was established: 2 µg/mL of antigen, sera dilution 1:300, and conjugate dilution 1:15000. The frequency was 62.3% (249/400) of reactive animals and 100% (17/17) of reactive herds. Risk factors were: herds with more than 100 animals (OR= 3.1; CI= 95%); Holstein breed (OR= 72.5; CI= 95%); cows (OR= 29.7; CI= 95%); intensive breeding system (OR= 3.3; CI= 95%); associated small ruminant production (OR= 4.4; CI= 95%); milk production above 500L (OR= 2.9; CI= 95%); no quarantine (OR= 1.5; CI= 95%); mechanical milking (OR= 5.5; CI= 95%) and cases of mastitis (OR= 5.5; CI= 95%). The proposed iELISA was able to detect antibodies reactive to M. bovis in bovine serum. Knowledge of these risk factors can assist in the implementation of prophylactic measures.(AU)

Mycoplasma bovis é um agente altamente contagioso relacionado a várias patologias em bovinos. A detecção de anticorpos reativos a M. bovis por Ensaio de Imunoadsorção Enzimática Indireto (iELISA) identifica se houve exposição ao microrganismo. O presente estudo teve como objetivo otimizar um iELISA de antígeno celular total de M. bovis, aplicando-o a amostras de soro bovino, bem como avaliar fatores de risco. Amostras de soro foram obtidas de 400 vacas de 17 rebanhos da Região Sudeste do Brasil. Na otimização do iELISA foram obtidos: 2µg/mL de antígeno, diluição dos soros 1:300 e do conjugado 1:15000. A frequência de animais reativos foi de 62,3% (249/400) e de 100% (17/17) para os rebanhos. Os fatores de risco foram: rebanhos com mais de 100 animais (OR= 3,1; IC= 95%); raça Holandesa (OR= 72,5;IC= 95%); vacas (OR= 29,7;IC= 95%); sistema intensivo (OR= 3,3; C= 95%); produção de pequenos ruminantes (OR= 4,4;IC=95%); produção de leite acima de 500L (OR= 2,9;IC= 95%); sem quarentena (OR= 1,5;IC= 95%); ordenha mecânica (OR= 5,5;IC= 95%) e casos de mastite (OR= 5,5;IC= 95%). O iELISA proposto foi capaz de detectar anticorpos reativos a M. bovis no soro bovino. O conhecimento desses fatores de risco pode auxiliar na implementação de medidas profiláticas.(AU)

Prevalência e estudo genético de Mycoplasma gallisepticum e M. synoviae em poedeiras comerciais, na região centro-oeste do estado de São Paulo, Brasil / [Prevalence and genetic study of Mycoplasma gallisepticum and M. synoviae strains from commercial laying hens in the Midwest region of Sao Paulo state, Brazil]

O objetivo deste trabalho foi estudar a prevalência de MG e MS e a filogenia das cepas circulantes, comparando-as com outras já descritas em poedeiras comerciais no Brasil. Foram coletados 140 suabes traqueais de poedeiras comerciais com sinais respiratórios em seis granjas da região centro-oeste de São Paulo. As amostras foram avaliadas por PCR, com posterior sequenciamento e análise filogenética das cepas identificadas. Das 140 amostras, 16,4% foram positivas para MG e 68,6% para MS. Houve diferença significativa nas frequências de MG e MS por granja, segundo o teste G de independência (P<0,05). Todas as cepas identificadas de MG e MS de granjas distintas apresentaram similaridade tanto pela lipoproteína para MG quanto pela região 16s rRNA para MS. Neste estudo, foi possível observar altas prevalências dos agentes estudados, sendo a de MS maior que a de MG. Foi detectada infecção mista por MG e MS em 11,4% das amostras e sabe-se que esses micoplasmas podem agir de forma sinérgica, agravando o quadro respiratório. As cepas circulantes identificadas, pela análise das regiões gênicas da lipoproteína para MG e 16S rRNA para MS, são similares em todas as granjas estudadas.(AU)

The aim of this study was to evaluate the prevalence of MG and MS and the phylogeny of the circulating strains, comparing them with others already described in commercial laying hens from Brazil. A total of 140 tracheal swabs were collected from commercial laying hens with respiratory signs in six farms from the western region of São Paulo state. The samples were analyzed by PCR with subsequent sequencing and phylogenetic analysis of the identified strains. From the 140 samples, 68.6% were positive for MS and 16.4% for MG. There was a significant difference in the frequencies of MG and MS per farm according to G Test of independence (P<0.05). All strains identified as MG and MS from distinct farms presented similarity both by lipoprotein to MG and by 16s rRNA region to MS. In this study, it was possible to observe a high prevalence of MS compared to MG. Mixed MG and MS infection was detected in 11.4% of the samples. These mycoplasmas may act synergistically, worsening the respiratory signs. The circulating strains identified by analysis of the lipoprotein for MG and 16S rRNA for MS are similar on all poultry farms studied.(AU)

Caracterização macroscópica e microscópica da pododermatite em relação à classificação industrial de pés de frango para consumo humano / Pododermatitis macroscopic and microscopic characterization related to industrial classification of chicken feet for human consumption

O presente trabalho teve como objetivo identificar e classificar a pododermatite em frangos de corte, comparando as lesões microscópicas com os aspectos macroscópicos utilizados pela inspeção sanitária. Foi realizada coleta de pés de frangos de corte, em matadouro de aves sob inspeção sanitária, após classificação utilizada nos padrões para exportação. Foram coletados 30 pés tipo A, 30 pés tipo B e 33 pés tipo C, escolhidos aleatoriamente dentro de cada grupo. Para análise histopatológica, foram desenvolvidos escores de acordo com a gravidade das lesões, variando de 0 a 2. Foi observada associação (qui-quadrado, P<0,05) entre a classificação macroscópica (A, B e C) e as alterações histológicas (0, 1 e 2). A classificação A diferiu significativamente (ANOVA, Tukey-Kramer, P<0,05) das classificações B e C quanto aos escores histopatológicos observados. Não houve diferença no comprometimento dos pés pelas lesões que justificassem a separação entre os pés classificados em B e C, uma vez que ambos apresentaram delimitação linear das lesões, sugerindo superficialidade e restrição ao epitélio queratinizado. Portanto, sugere-se o aproveitamento dos pés para consumo humano após remoção mecânica do "calo de pé", uma vez que este produto não oferece riscos ao consumidor.(AU)

The aim of this study was to identify and classify pododermatitis in broilers, comparing the microscopic lesions with the macroscopic aspects used by the Sanitary Inspection. Broiler chicken feet were collected at a Poultry slaughterhouse under Sanitary Inspection, after classification according to the exportation standards. The chicken feet were randomly selected in each group, 30 feet type A, 30 feet type B and 33 feet type C. For the histopathological analysis, scores were developed according to the severity of the lesions, varying from 0 to 2. There was association (Chi-square, P< 0.05) between the macroscopic classification (A, B and C) and histological changes (0, 1 and 2). The A classification differed significantly (ANOVA, Tukey-Kramer, P< 0.05) from the B and C classifications regarding the histopathological scores observed. There was no difference in feet lesions that justified the separation between the feet classified in B and C, since both presented a linear delimitation of the lesions, suggesting superficiality and restriction to the keratinized epithelium. Therefore, the use of the feet for human consumption after mechanical removal of the footpad lesions is suggested since the product does not pose risks to the consumer.(AU)

Bacterial microbiota present in the gallbladder of cattle and antimicrobial resistance of Staphylococcus isolates / Microbiota bacteriana presente na vesícula biliar de bovinos e resistência antimicrobiana de isolados de Staphyloccocus

Pathogenic microorganisms can reside transiently or permanently in the gallbladder of cattle. Thus, during slaughter, more attention should be given to the gastrointestinal tract, especially to the accessory organ, the gallbladder. The main aim of this study was to characterize the bacterial microbiota present in bile and gallbladder epithelium of cattle slaughtered in a slaughtering plant under sanitary conditions and to evaluate the antimicrobial resistance in strains of the genus Staphylococcus. Thirty intact gallbladders were collected and the in bile and epithelium were researched for the presence of Aerobic Mesophilic Heterotrophic Bacteria (AMHB), Staphylococcus spp., total Enterobacteriaceae, Enterococcus spp. and Salmonella spp.The frequency of isolation of the microorganism mentioned above were, respectively: 23.02 percent, 14.39 percent, 13.67 percent, 24.46 percent, 0 percent and 24.46 percent. Concerning both gallbladder environments, the frequency of isolation of the microorganisms in the epithelium was 64.03 percent, and in the bile 35.97 percent, with no statistical difference, but with significant difference between the population averages. In antimicrobial susceptibility testing, strains of Staphylococcus from both bile and gallbladder epithelium showed sensitivity to the antimicrobials: penicillin G, ceftriaxone, chloramphenicol and gentamicin. The observation that the gallbladder supports a high frequency of microorganisms brings us to the possible fact that cattle might be a persistent carrier of pathogens of great importance to public health...

Microrganismos patogênicos podem residir temporariamente ou permanentemente na vesícula biliar de bovinos. Assim, durante o abate, maior atenção deve ser dada ao trato gastrointestinal, especialmente para o órgão acessório, a vesícula biliar. O principal objetivo deste estudo foi caracterizar a microbiota bacteriana presente na bile e no epitélio de vesículas biliares de bovinos abatidos em matadouro frigorífico sob inspeção sanitária e avaliar a resistência antimicrobiana de estirpes do gênero Staphyloccocus. Foram coletadas 30 vesículas biliares íntegras e foi pesquisada na bile e no epitélio do órgão a presença de bactérias heterotróficas aeróbias mesófilas (BHAM), Staphylococcus spp. e Enterobacteriaceae totais, Escherichia coli, Enterococcus spp. e Salmonella spp. A frequência de isolamento dos microrganismos citados acima foi, respectivamente: 23,02 por cento, 14,39 por cento, 13,67 por cento, 24,46 por cento, 0por cento e 24,46 por cento. Em relação aos dois ambientes da vesícula, a frequência de isolamento dos microrganismos no epitélio foi de 64,03 por cento, e na bile 35,97 por cento, não sendo diferente estatisticamente, mas com diferença significativa entre as médias populacionais.No teste de susceptibilidade aos antimicrobianos, as estirpes de Staphylococcus isoladas a partir da bile e do epitélio da vesícula biliar apresentaram sensibilidade a: penicilina G, ceftriaxona, cloranfenicol e gentamicina. A observação de que a vesícula biliar comporta microrganismos em elevadas frequências atenta para o fato de que o bovino possa ser um portador persistente de patógenos de grande importância em saúde pública...

PCR for the detection of the gene fel a of escherichia coli in broiler condemned for airsacculitis by the Brazilian Federal Sanitary Inspection / PCR na detecção de gene Fel A de Escherichia Coli em frangos de corte condenados por aerossaculite pela Inspeção Sanitária Federal

Collibacillosis is considered one of the major diseases of the modern poultry industry, due to the significant losses it causes. Escherichia coli contributes not only to the disease itself, by causing weight loss of the birds, but also to the increase in carcasses condemnation during slaughter and processing. Detection of virulence factors in E. coli strains of the APEC pathotype contributes to the characterization and pathogenicity of this agent. PCR techniques have been very helpful in the search for genes that encode those virulence factors. This study aimed to detect the gene Fel A of E. coli by PCR and relate its positivity to low weight in broiler flocks with airsacculitis as diagnosed by the health inspection service. The study involved 40 flocks of broilers slaughtered in a single poultry slaughterhouse, under Federal Sanitary Inspection, located in the state of Rio Grande do Sul, Brazil. Three broilers were randomly selected to obtain one "pool" of three tracheas for each PCR. DNA was extracted using phenol-chloroform and amplified using a pair of primers specific to gene Fel A of E. coli. Of the 40 flocks analyzed by PCR, 35% (14/40) were positive for the gene Fel A. PCR was an effective technique for the detection of gene Fel A in broiler flocks. There was a relationship between the presence of the gene Fel A, weight loss, and increase of the airsacculitis rate...

A colibacilose é considerada uma das principais doenças da indústria avícola moderna, devido aos grandes prejuízos econômicos causados. A Escherichia coli contribui não só para a doença em si, levando à perda de peso das aves, bem como para o aumento da taxa condenação de carcaças durante o abate e processamento. A detecção de fatores de virulência de cepas de E. coli do patotipo APEC colabora para a caracterização de sua patogenicidade e as técnicas de PCR têm sido muito úteis na pesquisa de genes que os codificam. Este estudo objetivou diagnosticar E. coli pela detecção o gene Fel A por PCR e relacionar a positividade para este agente com o baixo peso em frangos de corte provenientes de lotes condenados por aerossaculite. Foram estudados 40 lotes de frangos de corte abatidos em um matadouro avícola sob Inspeção Sanitária Federal, localizado no Estado do Rio Grande do Sul. Foram colhidos aleatoriamente 3 frangos e obtidos "pools" de três traqueias em cada um deles para PCR. O DNA foi extraído pelo método de fenol-clorofórmio e amplificado com pares de "primers" específicos para gene Fel A de E. coli. Dos 40 lotes analisados pela PCR, 35% (14/40) foram positivos para o gene Fel A. A PCR foi eficaz para a detecção do gene Fel A em lotes de frangos de corte e houve relação entre a presença do gene Fel A, a queda de peso e aumento na taxa de aerossaculite...

Principais alterações no leite por agentes causadores de mastite no rebanho caprino dos estados de Minas Gerais e Rio de Janeiro / Major changes in milk by mastitis causative agents in goat herd from the states of Minas Gerais and Rio de Janeiro, Brazil

A mastite subclínica caprina ocasiona prejuízos econômicos em decorrência do descarte, dos gastos com medidas terapêuticas e da redução da quantidade e qualidade do leite e seus derivados.Nesse estudo, 129 amostras de leite de cabra in natura, provenientes de 11 propriedades foram avaliadas pelo teste da caneca telada, California Mastitis Test (CMT), exame bacteriológico, pesquisa de Mycoplasma spp. e pela determinação dos parâmetros físico-químicos. No teste da caneca telada e no CMT, 3,1% e 4,6% das amostras foram positivas, respectivamente. No exame bacteriológico, 57,4% das amostras foram positivas e o patógeno mais frequente foi Staphylococcus coagulase negativa com 56% das cepas resistentes à penicilina e 100% de sensíveis à gentamicina. Mycoplasma spp. não foi identificado nas amostras. O diagnóstico da mastite subclínica pelo CMT e pelo exame bacteriológico diferiu de forma significativa e não houve associação entre o número de UFC/mL obtidas no exame microbiológico e o resultado do CMT (Qui-quadrado p 0,05). Com base nos resultados obtidos, recomenda-se a associação do exame bacteriológico quando na utilização do CMT para diagnóstico da mastite subclínica caprina.

Major changes in milk by mastitis causative agents in goat herd from the states of Minas Gerais and Rio de Janeiro, Brazil. Goat mastitis causes significant economic losses due to the discarding of milk, costs of drugs and veterinary care, reducing the quantity and quality of milk and dairy products. In this study, 129 raw milk samples from 11 goat farms were investigated by the Tamis test, California mastitis test (CMT), bacteriological exam, presence of Mycoplasma spp. and physicochemical parameters. Seven (4.6%) and four samples (3.1%) were positive by CMT and Tamis test respectively. Bacteriological exam was positive from 57.4% of samples and coagulase-negative Staphylococcus was the most frequent bacteria isolated showing 56% of the strains resistant to penicillin and no resistance to gentamicin. Negative results were obtained from traditional culture as well as by PCR for Mycoplasma spp. The diagnosis of mastitis, the bacteriological exam and the CMT results differed significantly and no association was observed (chi squared, p 0.05). The physicochemical parameters differed significantly (ANOVA, Tukey-Kramer, p < 0.05) among the herds. These results indicate the need to associate microbiological exam when the CMT is used for the diagnosis of goat mastitis.

Infection by Mycoplasma agalactiae in dairy goat herds in the microregions of Cariri in Paraíba State, Brazil / Infecção por Mycoplasma agalactiae em rebanhos caprinos leiteiros nas microrregiões do Cariri na Paraíba

O objetivo deste trabalho foi verificar a ocorrência de Mycoplasma agalactiae, com o uso da reação em cadeia da polimerase (PCR), em 30 rebanhos caprinos leiteiros nas microrregiões do Cariri Ocidental e Oriental do estado da Paraíba. Das 120 amostras de leite testadas, nove (7,5 por cento) apresentaram amplificação de apenas um fragmento com 360pb. As amostras que amplificaram este fragmento estavam presentes em 6/30 (20 por cento) fazendas localizadas nos municípios de Amparo, Santo André e Gurjão.