Characterization of Acinetobacter spp. from raw goat Milk / Caracterização de Acinetobacter spp. isolados de leite caprino cru

ABSTRACT: Goat's milk has been suggested as an alternative to cow's milk, being a better digestible and hypoallergenic option. However, the presence of contaminating bacteria may significantly affect the safety of the product. In this research, we reported the isolation and characterization of Acinetobacter spp. isolates from raw goat milk samples purchased in the state of Rio de Janeiro, Brazil. Twenty-one samples were analyzed and ten isolates of Acinetobacter spp. were obtained. Six were identified as A. guillouiae, three as A. ursingii, and one as A. bereziniae. These isolates were characterized and eight showed proteolytic activity, seven showed lipolytic activity, and five isolates were able to produce both enzymes. None of the isolates was biofilm producer. However, when the production of antibiotic resistance enzymes KPC and ESBL were investigated, all isolates presented ESBL-positive phenotype, while eight (80%) were KPC-positive. This research, therefore, demonstrated that raw goat's milk can also be a source of Acinetobacter spp., which can produce important thermostable deteriorating enzymes and may play a role of reservoirs of antibiotic resistance genes.

RESUMO: O leite de cabra tem sido sugerido como alternativa ao leite de vaca, sendo uma opção com melhor digestibilidade e menor alergenicidade. No entanto, a presença de bactérias contaminantes pode afetar significativamente a segurança do produto. Neste trabalho, relatamos o isolamento e caracterização de Acinetobacter spp. isolados de amostras de leite cru de cabra adquiridas no Estado do Rio de Janeiro, Brasil. Vinte e uma amostras foram analisadas e dez isolados de Acinetobacter spp. foram obtidos, sendo seis identificados como A. guillouiae, três como A. ursingii e um como A. bereziniae. Estes isolados foram caracterizados e oito apresentaram atividade proteolítica, sete mostraram atividade lipolítica e cinco foram capazes de produzir ambas as enzimas. Nenhum dos isolados foi produtor de biofilme. No entanto, todos os isolados apresentaram fenótipo ESBL-positivo, enquanto oito (80%) foram positivos para KPC. Este trabalho demonstra, portanto, que o leite de cabra cru também pode ser uma fonte de Acinetobacter spp., que podem produzir enzimas deteriorantes termoestáveis e desempenhar, também, um papel de reservatórios de genes de resistência a antibióticos.

Avaliação do crescimento de Salmonella enterica em fórmulas lácteas infantis sob diferentes condições de preparo e armazenamento / Evaluation of the growth of Salmonella enterica in infant milk formulas under different preparation and storage conditions

Salmonella enterica é um dos mais importantes patógenos associados a fórmulas lácteas infantis (FLI). Neste trabalho, foi avaliada a sobrevivência e crescimento de uma estirpe padrão de Salmonella enterica sorotipo Typhi em duas FLI reconstituídas (F1 e F2) sob diferentes condições de preparo e armazenamento similares às utilizadas em lactários hospitalares. Para ambas as FLI inoculadas e incubadas à temperatura ambiente, observou-se um aumento de 3,3 log na população de S. enterica logo nas primeiras 24 horas de incubação e um aumento superior a 4,5 log ao término de 72 horas. A 4ºC, nas primeiras 48 h de incubação, houve leve aumento populacional (< 1,0 log) e, após 72 horas, o crescimento foi similar ao observado sob temperatura ambiente. Em relação ao aquecimento em banho-maria, verificou-se que a 60ºC/ 5 min houve uma redução de um pouco mais de 1 log UFC/ml, entretanto, a 60ºC/ 10 min, a queda observada foi de 2,8 log em F1 e de 2,3 log em F2. Já a 70ºC/ 5 min, ocorreu redução de cerca de 3 log UFC/ml para F1 e F2, enquanto que por 10 min, essa redução foi cerca de 1 log maior. O aquecimento em forno de micro-ondas mostrou ser a forma mais rápida e eficiente de redução da população de Salmonella nas FLI, uma vez que não foi detectada contagem celular após nenhum dos tratamentos utilizados. Os resultados sugerem que FLI contaminadas durante a etapa de preparo podem apresentar um crescimento bacteriano mesmo sob temperatura de refrigeração se mantidos por tempo prolongado e que determinados métodos de tratamento térmico não são suficientes para inibição completa de S. enterica.

Salmonella enterica is one of the most important pathogens associated with infant milk formulas (IMFs). In this study, the survival and growth of an S. enterica serovar Typhi strain in two reconstituted IMFs (F1 and F2) under different conditions of preparation and storage, similar to those used in hospital lactaries, was evaluated. For both IMFs inoculated at room temperature, there was 3.3 log increase in the population of S. enterica by the first 24 h of incubation and > 4.5 log increase at the end of 72 h. At 4ºC, in the first 48 h of incubation, there was a slight increase in population (< 1.0 log) and after 72 h, growth was similar to that observed at room temperature. A heated water bath was used to test the effect of thermal treatment methods on bacterial viability. At 60ºC for 5 min, there was a reduction of slightly more than 1 log CFU/mL; however, at 60ºC for 10 min, the observed decrease was 2.8 log for F1 and 2.3 log for F2. At 70ºC for 5 min, there was a reduction of approximately 3 log CFU/ml for both IMFs and for 10 min, this reduction was approximately 1 log higher. Heating in a microwave oven was the most efficient way of reducing populations of Salmonella in the IMFs, as bacterial cell counts were not detected after any of the treatments used. Our results suggest that IMF contamination during the preparation step may support bacterial growth even under refrigeration if kept for a prolonged time and that some thermal treatment methods are not sufficient for the complete inhibition of S. enterica.

Desenvolvimento de material de referência para microbiologia de alimentos contendo Listeria monocytogenes em matriz queijo / Development of reference material for food microbiology containing Listeria monocytogenes in matrix

A NBR ISO/IEC 17025:2005, uma das normas mais utilizadas em laboratórios de ensaio, descreve como um de seus critérios para a garantia da qualidade dos resultados analíticos a participação periódica dos laboratórios em ensaios de proficiência (EP). Os analitos, utilizados nos EP são materiais de referência (MR) provenientes de um mesmo lote, e devem apresentar características de homogeneidade e estabilidade. O objetivo deste estudo foi produzir um MR qualitativo destinado ao ensaio de pesquisa de Listeria monocytogenes em matriz queijo pela técnica de liofilização. Para a produção do MR, foi utilizado como matriz o queijo Minas frescal (QMF) ultrafiltrado. A matriz foi distribuída em frascos, contaminada com a bactéria alvo e submetida à liofilização, tendo a sacarose como crioprotetor. O MR produzido foi considerado homogêneo e estável na temperatura de ≤-70°C durante todo o período estudado (10 meses). O material apresentou estabilidade a 4, 25, 30 e 35°C por quatro dias e a -20°C por 48 dias, e os resultados estatísticos indicam tendência à estabilidade. Conclui-se que o material apresentou todos os requisitos necessários de um MR de qualidade e poderia ser transportado aos laboratórios participantes de um EP à temperatura máxima de 35°C por até quatro dias, uma vez que os resultados indicaram a manutenção da concentração celular nesse período. Esse foi o primeiro trabalho a descrever uma metodologia de produção de MR contendo L. monocytogenes em matriz queijo.

The standard most used in testing laboratories, ISO/IEC 17025:2005, describes the participation of laboratories in periodic proficiency testing (PT), as a criteria for quality assurance of analytical results. The analyses used in PT are reference materials (MR) from the same lot, and must have characteristics of homogeneity and stability. This study aimed to produce a qualitative RM for detection of Listeria monocytogenes assays in cheese matrix. For the production of RM, Minas Frescal cheese (MFQ) was used as matrix. The matrix was distributed in flasks, contaminated with the target bacteria and submitted to freeze-drying. Sucrose was used as cryoprotector. The RM produced was considered homogeneous and stable at -70°C during the entire period of study (10 months). The material showed stability at 4, 25, 30 and 35°C for 4 days and at -20°C the RM showed stability for 48 days, and the statistical results indicate a tendency to maintain stability. It was concluded that the material showed all the requirements of an RM quality and could be transported to the laboratory participants of a PT at 35°C up to 4 days, since the results indicate the maintenance of cell concentration during this period. This is the first study to describe a methodology for producing MR containing L. monocytogenes in cheese matrix.

Substâncias antimicrobianas produzidas por bacillus spp. isolados de frutas / Antimicrobial substances produced by bacillus spp. isolated from fruit

O objetivo deste trabalho consistiu na investigação da produção de substâncias antimicrobianas por estirpes de Bacillus, isoladas de frutas, e verificar o potencial dessas substâncias na inibição de patógenos, associados à deterioração ou à transmissão de doenças por alimentos, como fungos e bactérias Gram-negativas ou Gram-positivas. Dez estirpes submetidas à coloração de Gram que mostraram ser bacilos foram testadas quanto à produção de substâncias antimicrobianas, utilizando-se como indicadoras diferentes bactérias Gram-positivas e Gram-negativas. Três estirpes, denominadas de Ame3, Mam1 e Pes1 apresentaram os maiores espectros de ação contra bactérias Gram-positivas, sugerindo que as substâncias produzidas por essas estirpes possam apresentar potencial de aplicação como biopreservativo de alimentos.Dez estirpes submetidas à coloração de Gram que mostraram ser bacilos foram testadas quanto à produção de substâncias antimicrobianas, utilizando-se como indicadoras diferentes bactérias Gram-positivas e Gram-negativas. Três estirpes, denominadas de Ame3, Mam1 e Pes1 apresentaram os maiores espectros de ação contra bactérias Gram-positivas, sugerindo que as substâncias produzidas por essas estirpes possam apresentar potencial de aplicação como biopreservativo de alimentos. Dez estirpes submetidas à coloração de Gram que mostraram ser bacilos foram testadas quanto à produção de substâncias antimicrobianas, utilizando-se como indicadoras diferentes bactérias Gram-positivas e Gram-negativas. Três estirpes, denominadas de Ame3, Mam1 e Pes1 apresentaram os maiores espectros de ação contra bactérias Gram-positivas, sugerindo que as substâncias produzidas por essas estirpes possam apresentar potencial de aplicação como biopreservativo de alimentos.