Real-time quantitative polymerase chain reaction (QPCR) for the identification and quantification of streptococcus mutans in saliva and dental biofilm in children / Técnica de reacción de polimerasa en cadena (QPCR) en tiempo real para la identificación y cuantificación de streptococcus mutans en saliva y biopelícula dentaria de niños

ABSTRACT Introduction: the objective of this study was to use real-time qPCR to identify and quantify the Streptococcus mutans species in samples of saliva and dental biofilm. Methods: 27 children were randomly chosen with the following criteria: 8 years of age, low socio-economic levels, residing in the northern metropolitan area of Santiago de Chile; they were asked to attend an appointment while fasting with no teeth brushing for at least 12 hours, in order to collect non-stimulated saliva and a pool of supragingival dental biofilm of all the mesio-vestibular sides of anterior and posterior teeth. The amount of S. mutans in the samples was quantified by qPCR using primers that amplify a fragment of the gtfB gene of S. mutans. Results: the amplification showed 98% efficiency with a fluorescence of 3.36 cycles. The melting curve presented a single maximum at the same temperature for all samples. Conclusion: the methodology allows the specific identification and quantification of gene gtfB of S. mutans in saliva and dental biofilm in a quick and reliable manner, contributing to the identification of individual cariogenic risk.

RESUMEN. Introducción: el objetivo del presente estudio consistió en implementar la técnica de qPCR en tiempo real para identificar y cuantificar la especie Streptococcus mutans en muestras de saliva y biopelícula dentaria. Métodos: se seleccionaron al azar 27 niños de 8 años de edad, de nivel socio-económico bajo del área norte de la región metropolitana de Santiago de Chile, que se citaron en ayunas y sin cepillado durante al menos 12 horas, para colectar saliva no estimulada y un pool de biopelícula dentaria supragingival de todas las caras mesio-vestibulares de dientes anteriores y posteriores. Se cuantificó la cantidad de S. mutans en las muestras mediante qPCR empleando partidores que amplifican un fragmento del gen gtfB de S. mutans. Resultados: la amplificación presentó 98% de eficiencia con delta de fluorescencia de 3,36 ciclos. La curva de fusión (melting) presentó un solo máximo a una misma temperatura para todas las muestras. Conclusión: la metodología permite la identificación y cuantificación específica del gen gtfB de S. mutans en muestras de saliva y biopelícula dentaria, de forma rápida y exacta, aportando a la determinación del riesgo cariogénico individual.

Water and Physiological Saline to Prevent the Formation of P-Chloroaniline / Agua y Suero Fisiológico para Prevenir la Formación de Paracloroanilina

This study determined if p-chloroaniline (PCA) can be minimized by using distilled water and physiological saline solution following sodium hypochlorite but before chlorhexidine. Hypochlorite 5%, 0.5%, 0.05%, 0.005% and 0.0005% dissolved in 0.9% NaCl and in distilled water were mixed with 2% chlorhexidine for the formation of PCA. The PCA was determined using UV-VISIBLE spectrometry, with spectral curve was determined the wavelength of maximum absorption of PCA. Formed PCA absorbance was measured between 0.025%, 0.02%, 0.015%, 0.01%, 0.005% and 0.0025% hypochlorite and 2% chlorhexidine. 2% chlorhexidine and hypochlorite with physiological saline form a white precipitate which prevents the measurement of PCA. Colored PCA is formed with 0.05%, 0.005% hypochlorite aqueous dilutions and 2% chlorhexidine. The lwavelength of maximum absorption obtained was 470 nm and absorbance of PCA showed a linear decrease. 0.005% NaClO produces the least amount of PCA. The best solvent to prevent the formation of PCA during the interaction of sodium hypochlorite with chlorhexidine is distilled water.

Este estudio determinó si la p-cloroanilina (PCA) puede ser minimizada mediante el uso de agua destilada y solución salina fisiológica seguido de la aplicación de hipoclorito de sodio, previo a la aplicación de clorhexidina. Hipoclorito al 5%, 0,5%, 0,05%, 0,005% y 0,0005% fue disuelto en 0,9% de NaCl y en agua destilada se mezcló con 2% de clorhexidina para la formación de PCA. El PCA se determinó mediante espectrometría UV-Visible, y con curva espectral se determinó la longitud de onda máxima del PCA. La absorbancia del PCA formado se midió con 0,025%, 0,02%, 0,015%, 0,01%, 0,005% y 0,0025% de hipoclorito y 2% de clorhexidina. La combinación de 2% de clorhexidina e hipoclorito en solución salina fisiológica forman un precipitado blanco que impide la medición del PCA. El PCA coloreado es formado con 0,05%, 0,005% diluciones acuosas de hipoclorito y 2% de clorhexidina. La longitud de onda máxima obtenida fue de 470 nm y la absorbancia del PCA mostró una disminución lineal. NaClO al 0,005% produce menor cantidad de PCA. El mejor disolvente para evitar la formación de PCA durante la interacción de hipoclorito de sodio con clorhexidina es agua destilada.

Efecto del ultrasonido endodóntico sobre clorhexidina al 2 por ciento en la formación de paracloroanilina: estudio in vitro / Effect of endodontic ultrasound on 2 percent chlorhexidine in the formation of parachloraniline: in vitro study

Introducción: La clorhexidina (CHX) en solución acuosa se hidroliza generando paracloroanilina (PCA), proceso acelerado por el aumento de temperatura y pH. El uso de ultrasonido endodóntico (USE), basado en fenómenos de oscilación, cavitación, microcorriente acústica, genera calor afectando la CHX. Objetivo Identificar y cuantificar in vitro cambios fisicoquímicos, temperatura y pH, y la cantidad de PCA formada con el uso de ultrasonido endodóntico sobre soluciones de CHX al 2 por ciento. Materiales y métodos La CHX 2 por ciento se activó durante 30, 60, 90 y 120 seg con USE a 24.500 Hz, midiendo antes y después de activación: pH, temperatura y cantidad de PCA, leyendo a 375 nm en curva de calibración de estándares de PCA y formación, registrando el espectro de absorción mediante espectrofotómetro UV-visible. Resultados El USE aumentó la temperatura en 1 °C independiente del tiempo de aplicación y acidificó la solución de CHX 2 por ciento, sin variaciones significativas en pH y temperatura. No se observó coloración ni formación de precipitado en muestras activadas por USE a los diferentes tiempos. Las muestras no presentaron valores medibles de PCA a 375 nm. Los espectros de absorción de CHX 2 por ciento y activadas por USE por más de 60 seg presentaron curvas espectrales, peaks y valores de absorbancia diferentes. Conclusiones El USE aumenta la temperatura y acidifica la solución de la CHX en todos los tiempos de aplicación. No se detectó presencia de PCA por espectrofotometría visible. Muestras activadas por USE por 60 seg o más presentan espectros de absorción diferentes a las muestras sin activar. Diferencias en los espectros de absorción entre CHX activadas con USE y con CHX sin activar indicarían degradación de la CHX y posible presencia de PCA.

Introduction: Chlorhexidine (CHX) in aqueous solution is hydrolysed to p-chloroaniline (PCA), a process accelerated by increasing temperature and pH. Using endodontic ultrasound based on oscillation phenomena, cavitation, and acoustic microstreaming generates heat, affecting the CHX. Objective The aim of this in vitro study was to identify and quantify the physical-chemical changes, temperature and pH, and the amount of PCA formed by increasing the temperature of 2 percent CHX by endodontic ultrasound. Materials and methods Samples of 2 percent CHX were activated for 30, 60, 90, and 120 seconds with endodontic ultrasound 24,500 Hz. The pH and temperature were measured before and after activation, as well as the formation and amount of PCA, by reading and recording the result obtained from a standard calibration curve reading at 375 nm in a UV-visible light spectrophotometer. Results Independent of time, ultrasound increased the temperature of 2 percent CHX by 1 °C and acidified the solution. No significant changes were recorded in pH and temperature. No staining or precipitates were observed in samples ultrasonically activated at different times. Samples read at 375 nm showed no measurable PCA values. Absorption spectra of 2 percent CHX and 2 percent CHX activated for more than 60 seconds showed different spectral curves, peaks, and absorbance values. Conclusions Ultrasound increased the temperature and acidified the solution of CHX for all application times. No PCA was detected by visible spectrophotometry. Absorption spectra of 2 percent CHX activated with ultrasound at different times differs from 2 percent CHX without activation. These differences indicate degradation of CHX and possible presence of PCA.

Caries-free subjects have high levels of urease and arginine deiminase activity

Objectives: This study investigated the relationship between urease and arginine deiminase system (ADS) activities and dental caries through a cross-sectional study. Material and Methods: Urease and ADS activities were measured in saliva and plaque samples from 10 caries-free subjects and 13 caries-active. Urease activity was obtained from the ammonia produced by incubation of plaque and saliva samples in urea. ADS activity was obtained from the ammonia generated by the arginine-HCl and Tris-maleate buffer. Specific activity was defined as micromoles of ammonia per minute per milligram of protein. Shapiro-Wilk statistical test was used to analyze the distribution of the data, and Mann-Whitney test was used to determine the significance of the data. Results: The specific urease activity in saliva and plaque was significantly higher in individuals with low DMFT scores. ADS activity in saliva (6.050 vs 1.350, p=0.0154) and plaque (8.830 vs 1.210, p=0.025) was also higher in individuals with low DMFT scores. Conclusions: Caries-free subjects had a higher ammonia generation activity by urease and arginine deiminase system for both saliva and plaque samples than low caries-active subjects. High levels of alkali production in oral environment were related to caries-free subjects. .

Aneurisma aortico como complicaión de cateterización de la arteria umbilical

La cateterización de la arteria umbilical es un procedimiento frecuentemente utilizado en las Unidades de Cuidado Intensivo Neonatal. A partir de 1970 se han reportado aneurismas aórticos como complicaciones de este procedimiento. En el presente artículo se describe el caso de un lactante menor a quien se diagnóstica mediante diferentes modalidades por imágen aneurisma de la aorta abdominal