The clinical impact of MTHFR polymorphism on the vascular complications of sickle cell disease

Sickle cell disease (SCD) is one of the most common inherited diseases in the world and the patients present notorious clinical heterogeneity. It is known that patients with SCD present activation of the blood coagulation and fibrinolytic systems, especially during vaso-occlusive crises, but also during the steady state of the disease. We determined if the presence of the factor V gene G1691A mutation (factor V Leiden), the prothrombin gene G20210A variant, and methylenetetrahydrofolate reductase (MTHFR) C677T polymorphism may be risk factors for vascular complications in individuals with SCD. We studied 53 patients with SCD (60 percent being women), 29 with SS (sickle cell anemia; 28 years, range: 13-52 years) and 24 with SC (sickle-hemoglobin C disease; 38.5 years, range: 17-72 years) hemoglobinopathy. Factor V Leiden, MTHFR C677T polymorphism, and prothrombin G20210A variant were identified by PCR followed by further digestion of the PCR product with specific endonucleases. The following vascular complications were recorded: stroke, retinopathy, acute thoracic syndrome, and X-ray-documented avascular necrosis. Only one patient was heterozygous for factor V Leiden (1.8 percent) and there was no prothrombin G20210A variant. MTHFR 677TT polymorphism was detected in 1 patient (1.8 percent) and the heterozygous form 677TC was observed in 18 patients (34 percent, 9 with SS and 9 with SC disease), a prevalence similar to that reported by others. No association was detected between the presence of the MTHFR 677T allele and other genetic modulation factors, such as alpha-thalassemia, ß-globin gene haplotype and fetal hemoglobin. The presence of the MTHFR 677T allele was associated with the occurrence of vascular complications in SCD, although this association was not significant when each complication was considered separately. In conclusion, MTHFR C677T polymorphism might be a risk factor for vascular complications in SCD.

Uso de concentrado de antitrombina III em cirróticos com distúrbios de coagulaçäo / Antithrombin III concentrate use in patients with cirrhosis with coagulation disorders

A deficiência de antitrombina III (ATIII) é observada na hepatopatia grave e pode ser decorrente da reduçäo de síntese ou de consumo aumentado, o que poderia ser compensado com o uso de concentrado de ATIII. OBJETIVO. Avaliar a eficiência da administraçäo de uma dose fixa de concentrado de ATIII, em pacientes com hepatopatia descompensada com distúrbio de hemostasia. CASUISTICA E MÉTODO. Foram avaliados seis pacientes, com idade média de 44 anos, variando de 14 a 63 anos, portadores de cirrose (quatro de etiologia alcoólica, um viral e um doença de Wilson), com alteraçäo de pelo menos dois dos parâmetros da hemostasia (TP> 1,40, TTPA> 1,25, fibrinogênio < 1,5g/L, plaquetas < 80.000/mm3). A média do nível de albumina foi de 2,6g/dL (1,9 a 3,8g/dL). O concentrado de ATIII (Kybernin) foi administrado na dose de 50U/kg, em dias alternados. Foi colhido sangue antes da primeira infusäo, 4 horas após e, depois, diariamente, antes da infusäo do dia, para medida da ATIII plasmática (amidolítico). Nenhum paciente recebeu hemoderivados. RESULTADOS. As médias da dosagem de ATIII foram: inicial = 35,8 por cento, 4 horas = 56,2 por cento*, 2 dias = 48,7 por cento*, 4 dias = 45,7 por cento* e 8 dias = 42,3 por cento*. Após a infusäo houve elevaçäo significante dos níveis de ATIII (* = p < 0,02, teste de Friedman), que se manteve até o 4§ dia. Näo houve alteraçäo dos demais parâmetros de coagulaçäo. CONCLUSÕES. O uso de concentrado de ATIII na dose utilizada é suficiente para elevar os níveis desse inibidor na hepatopatia; entretanto, com essa dose näo se obteve normalizaçäo de seus níveis. Esses dados sugerem que doses mais elevadas devem ser usadas em pacientes com hepatopatias graves, que apresentam näo apenas reduçäo de síntese, mas aumento de consumo dos fatores da coagulaçäo e de seus inibidores.

Dosagem da antitrombina III usando o substrato cromogênico Tos-Gly-Pro-Arg-NAN, em diversas situaçöes patológicas / Antithrombin III dosage using the chromogenic substrate Tos-Gly-Pro-Arg-NAN, in several pathological situations

O uso de método funcional para dosagem de antitrombina III (ATIII) é fundamental para o diagnóstico de deficiência deste inibidor da coagulaçao. OBJETIVO. Padronizar metodologia para dosagem da ATIII no plasma, utilizando-se microplacas, em diferentes situaçoes clínicas. MÉTODOS. A dosagem de ATIII foi feita utilizando-se o substrato cromogênico Tos-Gly-Pro-Arg-NAN, específico para trombina, e sintetizado no Departamento de Biofísica da Escola Paulista de Medicina. RESULTADOS. Dos 21 pacientes com trombose venosa (TV-P), 20 apresentaram valores superiores a 70 por cento (ll3 ñ 22 por cento), dos quais uma paciente de 22 anos apresentava deficiência congênita, com ATIII de 56 por cento e história de TVP recorrente, além de história familiar de TVP. O nível de ATIII em seis pacientes portadores de doença de von Willebrand foi normal (lO9 ñ 28 por cento), como esperado. Em 20 pacientes com insuficiência hepática foi observada reduçao importante do nível de ATIII (42 ñ 19 por cento), pois este inibidor é produzido no hepatócito, sendo bom parâmetro para avaliar a funçao hepática. Os três pacientes portadores de sepse com CIVD apresentaram níveis reduzidos de ATIII (45 + 5 por cento), que é consumida durante processo de ativaçao intravascular da coagulaçao. Os níveis de ATIII mostraram correlaçao significante com o TP e os níveis de fator V, ambos bons parâmetros para avaliaçao da funçao hepática e para monitorizaçao da CIVD. Houve correlaçao significante entre as dosagens realizadas com o substrato Tos-Gly-Pro-Arg-NAN, sintetizado na EPM, e o substrato S-2238 do laboratório Kabi. CONCLUSOES. A medida da ATIII usando substrato cromogênico Gly-Pro-Arg-NAN é de fácil execuçao e é sensível para o diagnóstico da deficiência deste inibidor em pacientes com insuficiência heopática, coagulaçao intravascular disseminada e trombofilia.

Partial purification and properties of rat urine arylamidases

Arylamidases were isolated from rat urine using L-aminoacyl-2-naphthylamides and L-Leu-p-nitroanilide as substrates to monitor the purification. Ion-exchange chromatography separated three peaks of activity (A, B and C). after gel filtration chromatography, the second and third peaks (B and C) were further purified to provide B1 and C1. Each behaved like a single active protein band on 7.5% polyacrylamide gel electrophoresis without SDS. he molecular weights of fractions B1 and C1 determined by SDS-PAGE were 440 and 270 kDa, respectively. The pH optimum for arylamidase activity was 7.5 for both forms on all substrate for both forms. The arylamidase activity of B1 and C1 was not affected by the presence of chloride ions and was increased in the presence of CaCl2 and MnCl2 only when L-Glu-2-naphthylamide was used as substrate. EDTA (3.3-33.0 micronM) and o-phenanthroline (0.1-1.0mM) but not -SH(0.08-0.67 mM) or -S-S-(0.42-3.3mM) group reagents inhibited the arylamidase activity. Hydrolysis of L-Leu-2-naphthylamide by fractions B1 and C1 was competitively inhibited by leucine (0.14-0.56 mM), indomethacin and puromycin (67-267 micronM) and bestatin (8.3-33.3 micronM). For each inhibitor, the Ki values were similar in the two fractions: 100 micronM for L-leucine, 10 micronM for indomethacin and puromycin and 1.0 micronM for bestatin. The enzymatic properties of fractions B1 and C1 were similar to those reported for fraction A1 by Alves et al. (Brazilian Journal of Medical and Biological...

Purification and characterization of aminopeptidase activity from rat urine

The aminopeptidase activity of rats urine was tested using L-aminoacy1-2-naphtylamides and L-Leu-p-nitroanilide. The enzyme preparation was purified by ion-exchange and gel filtration chromatography and showed only a single active protein active protein band on 7.5% polyacrylamide gel electrophoresis. The enzyme was characterized by studying the effects of ions (divalent cations and chloride), chelating agents and -SH and -S-S- group reagents and by determining kinetic parameters (Km and Vmax for different substrates and K1 for amino acids, antibiotics and anti-inflammatory drugs)