Análise filogenética e implementação de ferramentas moleculares na identificação de isolados do complexo Sporothrix spp / Phylogenetic Analysis and implementation of molecular tools in identification of isolates of Sporothrix spp complex

A esporotricose, micose subcutânea causada pelo complexo Sporothrix schenckii, é cosmopolita e a mais frequente na América Latina. Nos últimos anos tem aumentado significativamente o número de casos no Brasil, com destaque para o aumento no estado do Rio de Janeiro. Atualmente, quatro novas espécies dentro do gênero Sporothrix têm sido consideradas, sendo essas: Sporothrix brasiliensis, Sporothrix globosa, Sporothrix mexicana e Sporothrix luriei, as quais são altamente associadas às duas espécies já existentes S. schenckii e S. albicans, sendo a última recentemente renomeada com o S. pallida . A caracterização destas espécies foi realizada por meio da utilização de provas fenotípicas: morfologia de conídios, teste de crescimento à 30ºC e 37ºC , teste de termotolerância, auxonograma e sequenciamento parcial do gene da calmodulina . O princ ipal objetivo deste estudo foi a caracterização de espécies do complexo Sporothrix por meio de taxonomia molecular através do desenvolvimento de metodologia baseada em ácidos nucléicos para a identificação das espécies e a determinação do perfil proteômico do complexo Sporothrix , utilizando metodologia baseada em espectrometria de massa em célula intacta (MALDI - TOF ICMS). No presente trabalho foi realizada a identificação em nível de espécie de isolados clínicos e ambientais oriundos da epidemia de esporotricose no Rio de Janeiro, de um surto zoonótico familiar no estado do Espírito Santo e dois isolados clínicos oriundos de Portugal. Por meio da identificação por taxonomia polifásica de 246 isolados clínicos e um ambiental obtidos da endemia de esporotricose no Estado do Rio de Janeiro foi demonstrado que esta abordagem é fundamental para a identificação das espécies do complexo Sporothrix...

A identificação em nível de espécies de cepas do complexo Sporothrix spp. provenientes de diferentes regiões geográficas, demonstrou S. globosa e S. mexicana circulando em Portugal, sugerindo que a esporotricose seja subdiagnosticada naquele país, e que esta micose poderia ser considerada emergente no sul da Europa. Também descrevemos o primeiro surto causado por S. brasiliensis fora da zona endêmica do Rio de Janeiro. Para a identificação das espécies de Sporothrix descrevemos uma PCR fingerprinting utilizando o primer universal T3B, o qual distinguiu com sucesso as espécies S. brasiliensis, S. globosa, S. mexicana, e S. schenckii. Essa metodologia gerou padrões de bandas distintos, permitindo a correta identificação de todos os 35 isolados clínicos estudados apresentando 100 por cento de concordância com o sequenciamento parcial do gene da calmoduli na , sendo uma técnica rápida e de fácil execução. A padronização da metodologia do MALDI - TOF ICMS, possibilitou a determinação de perfis proteômicos distintos entre as espécies do complexo Sporothrix , demostrando a aplicabilidade desta técnica na diferenciação das espécies. A caracterização de espécies do complexo Sporothrix em nosso estudo foi a maior reportada na literatura especializada até o presente. Concluimos que a taxonomia polifásica é fundamental para diferenciação das espécies de Sporothrix, podendo ser realizada com as técnicas de T3B Fingerprinting e MALDI - TOF ICMS, tendo importância na epidemiologia e clínica da esporotricose...

Possível relação entre estresse ocupacional e síndrome metabólica / Relationship between job stress and the metabolic syndrome

O crescente número de casos de síndrome metabólica está relacionado àa mudanças no estilo de vida e no padrão alimentar das populações e, possivelmente, às situações de estresse cotidiano. O objetivo do presente estudo é investigar a possível relação entre estresse ocupacional e síndrome metabólica. Em estudo transversal foram avaliados 94 indivíduos: 51 agentes penitenciários (Grupo 1) e 43 funcionários da administração pública, que constituíram o grupo controle (grupo 2), submetidos a exame físico, avaliação laboratorial (dosagens de glicose, colesterol total, colesterol HDL, triglicérides e ácido úrico) além da aplicação de questionário para avaliação do grau de estresse no trabalho. O diagnóstico de síndrome metabólica se baseou nos critérios do National Cholesterol Education Program - Adult Treatment Panel III (NCEP-ATPIII). Foi encontrada maior prevalência de obesidade abdominal, hipertensão arterial, hipertrigliceridemia e baixos níveis de colesterol HDL entre os agentes penitenciários, quando comparados ao grupo controle (p<0,05). O diagnóstico de síndrome metabólica foi realizado em 11 (26,2%) indivíduos do grupo 1 e em doi2 indivíduos (5,7%) do grupo 2 (p<0,05). A razão de prevalência do estresse ocupacional para o grupo 1, em relação ao grupo 2 foi de 3,909 (IC de 95%: 0,88 a 17,4, p=0,048). A frequência de síndrome metabólica foi mais elevada entre os indivíduos submetidos à maior demanda psicológica no exercício da profissão sendo provável a relação entre essa entidade clínica e o estresse ocupacional.

The increasing number in the cases of metabolic syndrome is related to changes in the life style and food patterns of the populations and, possibly, to daily stress circumstances. The aim of the present study is to investigate the relationship between work stress and the metabolic syndrome. In a transversal study 94 individuals were evaluated: 51 prison guards (group 1) and 43 civil employees as the control group (group 2), who were submitted to physical examination, laboratory evaluation (fasting plasma glucose, total cholesterol, HDL cholesterol, triglycerides, and uric acid) in addition to a questionnaire to evaluate the level of stress at work. The diagnosis of metabolic syndrome was based on the National Cholesterol Education Program - Adult Treatment Panel III (NCEP-ATPIII) criteria. Prison guards showed greater prevalence of abdominal obesity, hypertension, high triglycerides and low HDL-cholesterol levels when compared to control group (p<0.05). The metabolic syndrome diagnosis was accomplished in 11 (26.2%) individuals, in group 1 and 2 (5.7%) in group 2 (p<0.05). The prevalence ratio of work stress of group 1 vs group 2 was 3.91 (95% CI: 0.88 to 17.4, p=0.048). The metabolic syndrome prevalence was higher among individuals who were submitted to greater psychological demand in the job, and the relationship between this clinical entity and work stress is probable.

Identificação e análise filogenética de espécies do gênero Sporothrix isoladas em área endêmica de esporotricose no Estado do Rio de Janeiro / Identification and phylogenetic analysis of species of the Genus Sporothrix from endemic are of sporothrichosis in the Rio de Janeiro State

A esporotricose, micose subcutânea causada pelo complexo Sporothrix schenckii, é cosmopolita e a mais freqüente na América Latina. Nos últimos anos tem aumentado significativamente o número de casos no Brasil, com destaque para o aumento no Estado do Rio de Janeiro na última década. Recentemente, foram consideradas quatro novas espécies dentro do gênero Sporothrix, sendo essas: Sporothrix brasiliensis, S. globosa, S. mexicana e S. luriei. Entretanto somente 25 isolados de área endêmica no Rio de Janeiro foram incluídos nos estudos prévios. A caracterização destas foi realizada por meio da utilização de provas fenotípicas: morfologia de conídios, teste de crescimento à 30ºC, teste de termotolerância e auxonograma. No presente trabalho realizamos a caracterização de 248 isolados oriundos de pacientes atendidos no ambulatório de Dermatologia do IPEC, os quais tiveram diagnóstico de esporotricose durante a epidemia de esporotricose, no período de 1998 e 2008. De acordo com as características fenotípicas, 206 isolados (83,1 porcento) foram caracterizados como S. brasiliensis, um isolado (0,4 porcento) como S. mexicana, 15 (6,0 porcento) como S. schenckii e em 26 isolados (10,5 porcento) não foi possível realizar a caracterização da espécie sendo classificadas como Sporothrix sppDentre esse isolados foi realizada a análise molecular de 8 (31 porcento) isolados que apresentaram resultados inconclusivos nos estudos fenotípicos através do sequenciamento de um locus do gene calmodulina possibilitou a formação de um grande grupo constituído por 7 isolados todos caracterizados genotipicamente como pertencentes à espécie S. brasiliensis. A análise em nível de genótipo deve ser utilizada como ferramenta complementar na identificação de espécies do complexo Sporothrix. A correlação entre dados moleculares e características fenotípicas é fundamental na identificação de espécies complexo Sporothrix, possibilitando a implementação da taxonomia polifásica.

Sporothrix schenckii is the species responsible for sporotrichosis, an important subcutaneous mycosis with a worldwide distribution, and very frequent in Latin America, and it has been reported as endemic in Rio de Janeiro, Brazil. Recent molecular studies have demonstrated that this species constitutes a complex of numerous phylogenetic species, which were phenotipically characterized using different culture media, growth rates at different temperatures, and nutritional tests as well comparison calmodulin genes and it was proposed four new species Sporothrix brasiliensis, Sporothrix globosa, Sporothrix mexicana and Sporothrix luriei. And just 25 isolates from the endemic occurring in Rio de Janeiro were included in this previous study. We have studied a total of 248 Sporothrix isolates from this endemic obtained during the period of 1998 and 2008. The phenotypic characterization was based on the morphology of conidia, growth rates at 30ºC and 37 ºC, ability to grow at 37 ºC, and auxonographic method. According to the key features for species differentiation, 206 isolates (83.1 percent) were characterized as S. brasiliensis, one as S. mexicana (0.4 percent), 15 (6.0 percent) as S. schenckii and in 26 isolates (10.5 percent) the species was not differentiated being classified as Sporothrix spp. Among 8 (31 percent) of these unidentified isolates, molecular methodology, by sequence analysis of on protein coding locus (calmodulin) was performed, revealing the presence of one major clade, grouping 7 of these isolates with S. brasiliensis, representing this phylogenetic species. The analysis in genotype level should be used as complemental tool in the identification of species of the Sporothrix complex. The correlation among molecular data and phenotipe is fundamental in the identification of species Sporothrix complex, making possible the implementation of the polyphasic taxonomy.