ABSTRACT
Abstract This study aimed to investigate the influence of a three-dimensional cell culture model and bioactive glass (BG) particles on the expression of osteoblastic phenotypes in rat calvaria osteogenic cells culture. Cells were seeded on two-dimensional (2D) and three-dimensional (3D) collagen with BG particles for up to 14 days. Cell viability and alkaline phosphatase (ALP) activity was performed. Cell morphology and immunolabeling of noncollagenous bone matrix proteins were assessed by epifluorescence and confocal microscopy. The expressions of osteogenic markers were analyzed using RT-PCR. Mineralized bone-like nodule formation was visualized by microscopy and calcium content was assessed quantitatively by alizarin red assay. Experimental cultures produced a growing cell viability rate up to 14 days. Although ALP activity at 7 days was higher on BG cultures, cells on 3D and 3D+BG had an activity decrease of ALP at 14 days. Three-dimensional conditions favored the immunolabeling for OPN and BSP and the expression of ALP and COL I mRNAs. BG particles influenced positively the OC and OPN mRNAs expression and calcified nodule formation in vitro. The results indicated that the 3D cultures and BG particles contribute to the expression of osteoblastic phenotype and to differentiated and mineralized matrix formation.
Resumo O objetivo deste estudo foi investigar a influência do modelo de cultura celular tridimensional e das partículas de vidro bioativo (BG) sobre a expressão fenotípica de culturas de células osteogênicas da calvária de ratos. As células foram mantidas em culturas sobre superfícies colágenas bi-dimensionais (2D) e em géis de colágeno tridimensional (3D) com e sem partículas de BG até 14 dias. Foram avaliadas: viabilidade celular, atividade de fosfatase alcalina (ALP), morfologia celular e imunomarcação de proteínas da matriz não-colágena do osso através de epifluorescência e microscopia confocal. As expressões de marcadores osteogênicos foram analisadas utilizando RT-PCR. A formação de nódulos mineralizados foi visualizada através de microscopia e o conteúdo de cálcio foi avaliado quantitativamente pelo Alizarina Red. As culturas experimentais produziram uma taxa crescente de viabilidade até 14 dias. Embora a atividade ALP em 7 dias tenha sido maior em culturas com BG, as células em 3D e 3D+BG apresentaram uma diminuição da atividade ALP aos 14 dias. As condições tridimensionais favoreceram a imunomarcação para OPN e BSP e a expressão de mRNAs para ALP e COL I. As partículas de BG influenciaram positivamente a expressão do mRNAs para OPN e OC e a formação de nódulos calcificados in vitro. Os resultados indicaram que as culturas em 3D e partículas BG contribuíram para a expressão do fenótipo osteoblástico e para a diferenciação e formação de matriz mineralizada.
Subject(s)
Animals , Biocompatible Materials , Glass , Osteoblasts/cytology , Osteogenesis , Skull/cytology , Alkaline Phosphatase/genetics , Alkaline Phosphatase/metabolism , Biomarkers/metabolism , Calcium/metabolism , Cell Culture Techniques , Cell Survival , Collagen Type I/genetics , Collagen Type I/metabolism , Fluorescent Antibody Technique, Indirect , Gene Expression Profiling , Integrin-Binding Sialoprotein/metabolism , Microscopy, Confocal , Microscopy, Fluorescence , Osteoblasts/enzymology , Osteoblasts/metabolism , Osteopontin/metabolism , Rats, Wistar , Real-Time Polymerase Chain Reaction , RNA, Messenger/genetics , Skull/enzymology , Skull/metabolism , Tissue ScaffoldsABSTRACT
The teeth of Azara's agouti (Dasyprocta azarae) were described macroscopically in order to provide biological data on one of the largest wild rodents of the Americas. Radiography was taken on six heads and the teeth were described. Enamel surrounds the coronal dentin, projects to the roots and is present as parallel inner laminae in buccolingual direction. The dentin is located among the enamel laminae and surrounds the pulp horns. The cementum is located internally to the enamel laminae. On the lingual surface, the cementum and dentin are the outer elements.
Os dentes de cutias (Dasyprocta azarae) foram descritos macroscopicamente para fornecer informações sobre um dos maiores roedores das Américas. Radiografias foram realizadas em seis cabeças, e os dentes foram descritos. O esmalte envolve a dentina coronal e se projeta até a raiz e é presente como lâminas dispostas paralelamente em direção vestíbulolingual. A dentina é localizada entre as lâminas do esmalte e envolve os cornos pulpares. O cemento é localizado internamente às lâminas de esmalte. Na superfície lingual, o cemento e a dentina são os elementos mais externos.