ABSTRACT
Objective: To characterize the Entamoeba histolytica (E. histolytica) antigen(s) recognized by moribound amoebic liver abscess hamsters.Methods:in 1D- and 2D-Western blot analyses. The antigenic protein was then sent for tandem mass spectrometry analysis. The corresponding gene was cloned and expressed in Escherichia coli BL21-AI to produce the recombinant E. histolytica ADP-forming acetyl-CoA synthetase (EhACS) protein. A customised ELISA was developed to evaluate the sensitivity and specificity of the recombinant protein.Results:Crude soluble antigen of E. histolytica was probed with sera of moribund hamsters detected by sera of hamsters in the control group. Tandem mass spectrometry analysis revealed the protein to be the 77 kDa E. histolytica ADP-forming acetyl-CoA synthetase (EhACS). The customised ELISA results revealed 100% sensitivity and 100% specificity when tested against infected (n=31) and control group hamsters (n=5) serum samples, respectively.Conclusions:This finding suggested the significant role of EhACS as a biomarker for moribund A ~75 kDa protein band with a pI value of 5.91-6.5 was found to be antigenic; and not hamsters with acute amoebic liver abscess (ALA) infection. It is deemed pertinent that future studies explore the potential roles of EhACS in better understanding the pathogenesis of ALA; and in the development of vaccine and diagnostic tests to control ALA in human populations.
ABSTRACT
Para examinar si la extensión de la necrosis tisular en la amibiasis hepática experimental en hamsters es proporcional a la magnitud de la respuesta inflamatoria inicial se comparó la evolución morfológica de las lesiones en presencia y en ausencia de dosis altas de metilprednisolona a las 10 hrs, 24 hrs, 72 hrs y 7 días. Se observó en los animales con metilprednisolona una respuesta inflamatoria inicial menor que en los controles y una extensión de las lesiones menor a los 7 días de evolución. La metilprednisolona no altera ni la actividad proteolítica ni la eritrofagocitosis de Entamoeba histolytica in vitro.
Subject(s)
Animals , Cricetinae , Entamoeba histolytica , Liver Abscess, Amebic/etiology , Liver Abscess, Amebic/pathology , Liver Abscess, Amebic/physiopathology , Prednisolone/administration & dosage , Prednisolone/therapeutic useABSTRACT
Los cromosomas de Estamoeba histolytica I. Se cultivaron trofozoítos de E. Histolytica cepa IMSS-M1 en medio axénico por un método ya descrito y se cosecharon a las 24, 48 y 72 hs., se fijaron y se tiñeron por la reacción de Feulgen modificada para ADN, para identificar sus cromosomas, Se usaron como testigos cromosomas de linfocitos humanos. Se observaron aproximadamente 6 a 20 cromosomas filamentosos, dificilmente discernibles individualmente dado el límite de la resolución óptica del microscopio, dispuesto en forma paralela, en círculos, en cúmulos polarizados o dispersos en el citoplasma, frecuentemente arrosariados con microesférulas, y en ocasiones con microvesículas integradas, en sus extremos o aisladas. Esto demuestra condensación de ADN con produccipon de cromosomas filamentosos, macronúcleos lobulados y micronúcleos. Esta tinción puede aplicarse a otros protozoarios ya que es la primera vez que se utiliza para identificar cromosomas en Entamoeba histolytica. la duplicación nuclear amibiana en cultivo axénico óptimo ocurre en forma continua y probablemente debido a que el género Estamoeba ocupa un espacio evolutivamente primitivo, su mitosis corresponde a una transición entre procariotes y eucariotes.