ABSTRACT
The validation of the analytical technique for the determination of polyamines in cerebral tissue using HPLC based on o-phthalaldehyde post-column derivatization is described. The polyamines were separated in a LiChrospher100 RP18 column. Elution gradient was formed with two mobile phases: A (sodium acetate 0.1 M + sodium octanesulphonate 0.01 M, pH = 4.5) and B (sodium acetate 0.2 M + sodium octanesulphonate 0.01 M)/acetonitrile (10:3), pH = 4.5) in a 1.2 ml/min flow rate. The derivative eluent was monitored by fluorescence (excitation, 345 nm; emission, 455 nm). Besides excellent linearity (putrescine, r = 0.9816; spermidine, r = 0.9920; spermine, r = 0.9901), the technique demonstrated intra and inter-day precision (< 20 percent) as well as recovery (spermidine = 92.56 percent; spermine = 84.47 percent). Quantification limits were 0.22 pM for putrescine, 76.44 pM for spermidine and 51.44 pM for spermine. The method demonstrated to be robust, simple and highly reproducible for polyamine determination in tissues.
A validação técnica analítica para determinação de poliaminas em tecido cerebral utilizando cromotografia líquida de alta eficiência (HPLC) e derivação pós-coluna com o-ftaldialdeído é descrita. A separação das poliaminas deu-se em coluna LiChrospher 100 RP18. O gradiente de eluição foi formado por duas fases móveis A (acetato de sódio 0,1M + octanossulfonato de sódio 0,01 M) e B (acetato de sódio 0,2 M + octanossulfonato de sódio 0,01 M)/acetonitrila (10:3), fluxo de 1,2 ml/min. O eluente foi monitorado por fluorescência (excitação, 345 nm; emissão, 455 nm). Além da excelente linearidade (putrescina, r = 0,9816; espermidina, r = 0,9920; espermina, r = 0,9901), a técnica demonstrou adequada precisão intra e interdia (< 20 por cento) e recuperação (espermidina = 92,56 por cento; espermina = 84,47 por cento). Os limites de quantificação foram 0,22 pM para putrescina, 76,44 pM para espermidina e 51,44 pM para espermina. O método demonstrou ser consistente, simples e altamente reprodutível para a determinação proposta.
ABSTRACT
Os métodos de investigaçäo do metabolismo protéico no homem, de uso clínico, incluem desde a avaliaçäo da proteína até a determinaçäo específica da capacidade de síntese protéica total. Na presente revisäo, säo discutidos aspectos práticos relacionados ao teor protéico, digestibilidade e composiçäo, em aminoácidos, de alimentos; excreçäo urinária de produtos nitrogenados; balanço nitrogenado; nível de aminoácidos plasmáticos; níveis de substâncias específicas; relacionadas ao metabolismo protéico, incluindo técnicas de biologia molecular, e, por fim, determinaçäo da taxa corpórea de síntese protéica. O método a ser utilizado e/ou recomendado vai variar de acordo com as necessidades e objetivos específicos de cada situaçäo clínica. A avaliaçäo da ingestäo protéica, sua correlaçäo com o estado geral do paciente, bem como a forma de oferta, resultam em melhora da qualidade geral do atendimento médico bem como beneficiam a própria recuperaçäo do paciente.