ABSTRACT
Osteoarthritis is the more frequent cause of disability in adult people and it is associated to cartilage degeneration of affected joints. This cartilage has a limited ability to repair. Several treatments have been tested including the use of Mesenchymal Stem Cells. These cells are an attractive source for cartilage repair because of their availability to chodrogenic differentiation by progressing sequentially through the expression of cartilage specific extracelullar matrix molecules, as in the embryologic human development. The aim is to obtain, culture and differentiate rabbit Bone Marrow derived Mesenchymal Stem Cells in vitro to chondral lineage. By differential centrifugation the mononuclear cell level was obtained from rabbit bone marrow samples. This level was cultured until 70 percent confluence. Chondrogenic differentiation was performed in an aggregate culture system with TGF-b1. Sample quantity, culture efficiency, confluence time of cultures and differentiation quality were all evaluated. An average sample of 14.5 ml per side was obtained, culture efficiency was 80 percent, and average confluence time (70 percent) was 18 days. Differentiation culture had an 80 percent efficiency and optimal differentiation quality. Rabbit Bone Marrow derived Mesenchymal Stem Cells culture is a reproducible technique and by the use of an adequate methodology chondrogenic cells can be obtained in vitro. This model permits the study of chondral differentiation process and could have direct clinical application. This is the first successful Latin-American report in Mesenchymal Stem Cells culture and chondrogenic differentiation.
La osteoartritis es la causa más frecuente de discapacidad en personas adultas y se asocia a la degeneración de los cartílagos de las articulaciones afectadas. Este cartílago tiene una capacidad limitada a la reparación. Muchos tratamientos han sido probados, incluyendo el uso de células madre mesenquimáticas. Estas células son una fuente atractiva para la reparación del cartílago debido a su disponibilidad a la diferenciación condrogénica progresando de forma secuencial a través de la expresión de moléculas de la matriz del cartílago específicos extracelular, como en el desarrollo humano embrionario. El objetivo es obtener, el cultivo y la diferenciación células madre mesenquimáticas de conejo procedentes de médula ósea al linaje condral in vitro. Por centrifugación diferencial a nivel de células mononucleares se obtuvieron muestras de médula ósea de conejo. Este nivel se cultivó hasta su confluencia al 70 por ciento. La diferenciación condrógenica se realizó en un sistema de cultivo de agregado con el TGF-b1. La cantidad de muestra, la eficiencia cultura, el tiempo confluencia de cultivos y la calidad de la diferenciación fueron evaluadas. Una muestra media de 14,5 ml por lado fue obtenida, la eficiencia de cultivo fue del 80 por ciento, y el tiempo promedio de confluencia (70 por ciento) fue de 18 días. En la diferenciación del cultivo se obtuvo una eficiencia del 80 por ciento y con una calidad óptima de diferenciación. El cultivo de células madre mesenquimáticas derivadas de médula ósea de Conejo es una técnica reproducible y con el uso de una metodología adecuada células condrogénica se pueden obtener in vitro. Este modelo permite el estudio del proceso de diferenciación condral y podría tener una aplicación clínica directa. Este es el primer informe de éxito de América Latina en el cultivo de células madre mesenquimáticas y diferenciación condrogénica.