Haplotypes βs-globin and its clinical-haematological correlation in patients with sickle-cell anemia in Triângulo Mineiro, Minas Gerais, Brazil / Haplótipos da βs-globina e sua correlação clínica-hematológica em portadores de anemia falciforme no Triângulo Mineiro, Minas Gerais, Brasil

ABSTRACT Introduction: Sickle-cell anemia (SCA) is the most severe form of sickle-cell disease, and is characterized by homozygous hemoglobin S (α2βS2). Objective: Determine the haplotypes frequency in patients with SCA and their correlation with clinical and hematological profile. Method: We performed a retrospective descriptive study by reading the charts and a cross-sectional study for molecular analysis to determine the haplotypes of the gene βS globin in 61 patients with sickle-cell anemia (SS) by polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism (PCR-RFLP), using restriction endonucleases Xmn I, Hind III, Hinf I and Hinc II for analysis of six polymorphic sites in the beta cluster. Result: The genotypes were Central African Republic (CAR)/CAR (60.8%), CAR/Benin type (BEN) (13.1%), CAR/ Cameroon type (CAM) (1.6%), CAR/atypical (ATP) (13.1%), BEN/BEN (13.1%), BEN/ATP (4.9%) and ATP/ATP (3.3%). Among the analyzed chromosomes, 64.8% were CAR type, 22.1% were BEN, 12.3% ATP and 0.8% CAM. Levels of fetal hemoglobin (HbF) were significantly lower in CAR/CAR than in ATP/ATP, BEN/ATP and CAR/BEN. No association was observed between the different genotypes and clinical manifestations. Conclusion: Despite the lack of association between genotypes and clinical profiles, higher frequency of clinical events was observed in patients with at least one type of CAR chromosome. A significant association was also observed between lower average levels of HbF and CAR/CAR genotype compared to other genotypes.

RESUMO Introdução: A anemia falciforme (AF) é a forma mais grave da doença falciforme, sendo caracterizada por homozigotos de hemoglobina S (α2βS2). Objetivo: Determinar a frequência dos haplótipos de pacientes com AF e sua correlação com o perfil clínico e hematológico. Método Realizado estudo descritivo e retrospectivo, por meio da leitura dos prontuários, e estudo transversal para análise molecular a fim de determinar os haplótipos da globina do gene pS de 61 pacientes com AF (SS) por reação em cadeia da polimerase-polimorfismo de fragmentos de restrição (PCR-RFLP), utilizando endonucleases de restrição Xmn I, Hind III, Hinf I e Hinc II para análise de seis locais polimórficos no cluster beta. Resultado: Os genótipos foram Central African Republic (CAR)/CAR (50,8%), CAR/Benin type (BEN) (13,1%), CAR/Cameroon type (CAM) (1,6%), CAR/atypical (ATP) (13,1%), BEN/BEN (13,1%), BEN/ ATP (4,9%) e ATP/ATP (3,3%). Dos cromossomos analisados, 64,8% eram do tipo CAR; 22,1%, BEN; 12,3%, ATP; e 0,8%, CAM. Os níveis de hemoglobina fetal (HbF) foram significativamente menores no CAR/CAR em relação a ATP/ATP, BEN/ATP e CAR/BEN. Não houve associação entre os diferentes genótipos e as manifestações clínicas. Conclusão: Apesar da falta de associação entre genótipos e perfis clínicos, foi observada maior frequência de eventos clínicos em pacientes com pelo menos um tipo de cromossomo CAR. Observou-se também associação significativa dos níveis médios mais baixos de HbF em genótipo CAR/CAR, em comparação com outros genótipos.

Socioepidemiological screening of serologically ineligible blood donors due to Chagas disease for the definition of inconclusive cases

Epidemiological screening combined with serological tests has become an important tool at blood banks for the characterization of donors with or without Trypanosoma cruzi infection. Thus, the objective of the present study was to describe the sociodemographic and epidemiological characteristics of blood donors with non-negative serology for T. cruzito determine possible risk factors associated with serological ineligibility. Sociodemographic and epidemiological data were collected by analysis of patient histories and interviews. The data were analyzed descriptively using absolute and relative frequencies and odds ratio (OR) evaluation. The frequency of serological ineligibility was 0.28 percent, with a predominance of inconclusive reactions (52 percent) and seropositivity among first-time donors (OR = 607), donors older than 30 years (OR = 3.7), females (OR = 1.9), donors from risk areas (OR = 4) and subjects living in rural areas (OR = 1.7). The risk of seropositivity was higher among donors who had contact with the triatomine vector (OR = 11.7) and those with a family history of Chagas disease (OR = 4.8). The results demonstrate the value of detailed clinical-epidemiological screening as an auxiliary tool for serological definition that, together with more specific and more sensitive laboratory methods, will guarantee a higher efficacy in the selection of donors at blood centres.

Perfil do doador de sangue autoexcluído no Hemocentro Regional de Uberaba-MG (HRU) no período de 1996 a 2006 / Self-exclusion profiles of blood donors of the Regional Blood Bank in Uberaba, Brazil (HRU) in the period of 1996 to 2006

Candidatos a doação são submetidos a triagem clínica e sorológica para minimizar o risco de transmissão de doenças via transfusão. Uma de suas limitações é a janela imunológica, que possibilita a transfusão de sangue contaminado. O objetivo deste trabalho foi avaliar o índice de autoexclusão de acordo com idade, gênero, estado civil, cor e tipo de doação, as variações anuais de autoexcluídos e sua eficácia em evitar a transfusão de sangue contaminado. Os dados foram analisados através do teste qui-quadrado, odds ratio e regressão linear. De 1996 a 2006, o Hemocentro Regional de Uberaba (HRU) coletou 176.097 bolsas de sangue, das quais 2,72 por cento foram desprezadas por autoexclusão, com significativo predomínio de homens, maiores de 29 anos, solteiros, não brancos e primeira doação (p<0,0001). Observou-se associação entre fidelização e autoexclusão, sugerindo que maior fidelização contribui para menor autoexclusão. A sorologia positiva para HIV1 (0,35 por cento) e HIV2 (0,23 por cento) foi significativamente maior nos autoexcluídos (p<0,0001), significância não observada para HCV (0,52 por cento) (p=0,24). Nos não autoexcluídos, estes percentuais foram de 0,15 por cento, 0,03 por cento e 0,41 por cento, respectivamente. A maior frequência de autoexclusão em homens maiores de 29 anos, solteiros e não brancos está de acordo, em parte, com o perfil do doador do HRU. O decréscimo de 1996 a 2001 é explicado por fatores comportamentais como criação do Centro de Testagem Anônima e maior fidelização dos doadores ao longo dos anos. A maior frequência de positividade nos autoexcluídos e três soroconversões em doações subsequentes reforçam a importância dessa ferramenta na diminuição do risco de janela imunológica.

Blood donor candidates are submitted to clinical and serological screening to minimize the risk of disease transmission. One of the limitations of this screening is the immunological window, a period that may contribute to the transfusion of contaminated blood. The aim of this study was to evaluate self-exclusion rates related to age, gender, marital status, race, type of donation, annual variations in self-exclusion and the efficacy of self-exclusion to prevent the transfusion of contaminated blood. A retrospective study was conducted and the data were analyzed using the chi-square test, odds ratio and linear regression. Of the 176,097 blood bags collected at the Uberaba Regional Blood Center (HRU) between 1996 and 2006, 2.72 percent were discarded due to self-exclusion. There was a predominance of first-time, unmarried, non-white male donors over the age of 29 years old (p<0.0001). An inverse association was observed between long-term commitment and self-exclusion, suggesting that the higher the return rate, the lower the incidence of self-exclusion. Positive serology for HIV1 (0.35 percent) and HIV2 (0.23 percent) was significantly higher among self-exclusion donors (p<0.0001), a fact not observed for HCV (0.52 percent) (p=0.24). The percentages of these three diseases were 0.15 percent, 0.03 percent and 0.41 percent, respectively among donors not initiating self-exclusion. The higher frequency of self-exclusion among unmarried, non-white male donors over the age of 29 partly agrees with the donor profile of HRU. The decline observed from 1996 to 2001 might be explained by behavioral factors, such as the creation of anonymous testing centers and an increase in the long-term commitment of donors over the years. The higher frequency of positivity among self-exclusion donors and only three seroconversions in subsequent donations support the importance of this tool to reduce the risk of contamination due to the immunological window.

Influência da coleta, da produção e da estocagem na qualidade dos concentrados de plaquetas / Influence of collection, preparation and storage on the quality of platelet concentrates

Como o controle de qualidade dos concentrados de plaquetas (CP), feito na data de seu vencimento, não possibilita distinguir o momento e o procedimento que determina a eventual redução de sua qualidade, decidimos investigar, separadamente, a influênciada coleta, da produção e da estocagem sobre a qualidade deste hemocomponente. Foram avaliados, em 33 CP randômicos, diariamente, durante cinco dias, os seguintes parâmetros: a agregação, o número de plaquetas e leucócitos, a pO2 e pCO2, o pH, sódio e potássio, a presença de swirling, grumos, hemácias e lipemia e cultura para bactérias. Observamos maior queda da agregação plaquetária com pares de agonistas durante a produção dos CP (de 99,4% para 59,8%, p<0,01), seguida de queda gradativa durante a estocagem, atingindo 40,4% no quinto dia. Durante o período deestocagem observamos também: 1. queda gradativa da concentração de plaquetas (p<0,05), porém com valores sempre maiores que 5x1010/70 mL; 2. diminuição da concentração de leucócitos (p<0,05); 3. aumento da pO2 e queda da pCO2 (p<0,05); 4. aumento do pH (p<0,05 a partir do quarto dia) e da concentração de sódio e de potássio (em geral p<0,05); 5. swirling em todos os CP, grumos plaquetários em apenas um e ausência de hemácias e de lipemia em todos; e 6. negatividade das culturas para bactérias. Os resultados demonstram que as alterações foram mais evidentes no processo de produção e sugerem que o controle de qualidade dos CP deve contemplar da coleta ao final do período de estocagem.

As quality control of platelet concentrates obtained at the expirationdate does not distinguish between the different stages that may cause reductions in quality, such as collection and storage, we decided to separately investigate the influence of collection, processing and storage on the quality of these blood components. This study evaluated 33 random platelet concentrates daily for five days for the following parameters: aggregation, number of platelets and leukocytes, PO2and PCO2, pH, sodium and potassium, the presence of swirling, platelet clots, red blood cells and lipemia, and bacteria culture. We observed a greater decrease in platelet aggregation with pairs of agonists during the production of platelet concentrates (from 99.4%to 59.8%, p<0.05), followed by a gradual drop during storage reaching 40.4% on day five. During storage the following were also observed: 1. a gradual drop of platelet concentration (p<0.05) although the values always remained higher than 5x1010/70 mL; 2.a decrease in leukocyte concentration (p<0.05); 3. increases in pO2 and decreases in pCO2 (p<0.05); 4. increase in the pH (p<0.05 from day 4) and in concentrations of sodium and potassium (in general p<0.05); 5. swirling in all platelet concentrations, platelet clots in only one and absence of red blood cells and lipemia in all; and 6. negative cultures for bacteria. The results showed more apparent changes in the production process and suggest that the quality control of platelet concentrations should encompass allstages, from collection to the end of the storage period.

Freqüência de anticorpos irregulares em politransfundidos no Hemocentro Regional de Uberaba-MG, de 1997 a 2005 / Frequency of irregular antibodies in multiple-transfused patients at the Regional Blood Bank of Uberaba, from 1997 to 2005

A fenotipagem eritrocitária pré-transfusional é um importante procedimento para aumentar a segurança das transfusões sangüíneas, sendo realizada rotineiramente no Hemocentro Regional de Uberaba-MG (HRU) desde 1996. O presente trabalho tem como objetivo geral avaliar a freqüência de anticorpos antieritrocitários irregulares em politransfundidos, de 1997 a 2005. Através de estudo retrospectivo foram levantados dados no arquivo do HRU de todos os pacientes aloimunizados, realizou-se análise estatística descritiva e comparam-se as proporções pelo teste "Z". Dos 23.220 transfundidos no período, com média de 5,7 transfusões por paciente, observou-se a ocorrência de aloimunização em 173 (0,75 por cento). Os sistemas Rh e Kell juntos tiveram freqüência superior a 70 por cento. A proporção do anti-D foi significativamente maior nas mulheres (p<0,05) e não houve diferença no sistema Rh entre brancos e não-brancos. Quanto à faixa etária, 70 por cento tinham mais de 30 anos. Dos 73 pacientes que tiveram a doença de base registrada, 39,73 por cento eram portadores de anemias agudas, 31,51 por cento de anemias crônicas e 28,77 por cento de doenças oncológicas ou onco-hematológicas. Aproximadamente 70 por cento dos anticorpos foram identificados até a décima transfusão. A baixa ocorrência da aloimunização no HRU reforça a importância da fenotipagem eritrocitária para todos os pacientes dependentes de transfusões crônicas, bem como da sua implantação na rotina de todos os serviços de hemoterapia.

Testing of the pre-transfusional blood phenotype, which has been carried out at the Regional Blood Bank in Uberaba since 1996, is an important procedure to improve safety of blood transfusions. This study aims to describe the frequency of irregular red blood cell antibodies in multiple-transfused patients from 1997 to 2005. In a retrospective study, data from all alloimmunized patients were collected from the blood bank files. Descriptive statistical analysis was performed and a comparison of proportions was made using the Z test. Alloimmunization was observed in 173 (0.75 percent) of the 23,220 transfused patients, with an average of 5.7 transfusions per patient. The frequency of the Rh and Kell systems jointly was over 70 percent. The proportion of anti-D was significantly higher in women (p<0.05) and no difference was noted in the Rh system between Caucasians and non-Caucasians. Seventy percent (70 percent) of the patients were over 30 years of age. Out of the 73 patients with registered diseases, 39.73 percent had acute anemias, 31.51 percent chronic anemias and 28.77 percent oncological or onco-hematologic diseases. Approximately 70 percent of antibodies were discovered before the 10th transfusion. The low frequency of alloimmunization observed at the Regional Blood Bank of Uberaba reinforces the importance of pre-transfusional blood phenotype screening for all multiple-transfused patients as well as its adoption as a common practice in all hemotherapy center.

Importância dos testes sorológicos de triagem e confirmatórios na detecção de doadores de sangue infectados pelo vírus da hepatite C / Importance of screening and confirmatory tests to detect blood donors infected by the hepatitis C virus

A triagem sorológica de doadores de sangue com baixos índices de prevalência de infecção, como no caso da hepatite C (HCV), gera um percentual considerável de resultados falso-positivos e descarte de bolsas de hemocomponentes freqüentemente não infectados. O objetivo deste estudo foi pesquisar o perfil sorológico e, com base no teste confirmatório, a ocorrência de hepatite C nos doadores com sorologia positiva ou indeterminada do Hemocentro Regional de Uberaba (HRU). Os testes confirmatórios foram realizados por meio da detecção do RNA do HCV no plasma, utilizando-se o método RT-PCR qualitativa. Foram realizadas, no período de 1992 a 2005, 171.027 doações de sangue no HRU, sendo 24,3 por cento de doadores iniciais e 75,7 por cento de retorno. O índice de inaptidão para HCV foi de 0,3 por cento (561 doações), sendo que 53,0 por cento destas eram de doadores iniciais e 47,0 por cento de retorno, com prevalências de 0,5 por cento e 0,2 por cento, respectivamente (p<0,0001). O índice de reações inconclusivas foi significativamente maior nos doadores de retorno (p=0,0214). Noventa e oito candidatos foram submetidos à PCR qualitativa e apenas 34 (34,7 por cento) apresentaram resultados positivos, com índice de positividade significativamente menor nos doadores de retorno (p=0,0184) e quase três vezes menor nos inconclusivos. Assim, verificamos que grande número de doadores, tanto anti-HCV positivos quanto indeterminados, não tiveram confirmada a presença da infecção pelo HCV, levando-nos a concluir que a inaptidão sorológica para hepatite C no HRU, na maioria das vezes, não correspondeu à presença de infecção viral no doador.

Serological screening of blood donors with low indexes of infection, including hepatitis C virus (HCV), accounts for a substantial percentage of false-positive results with consequent loss of non-infected blood components. The aim of this study was to evaluate the occurrence of hepatitis C using confirmatory tests for blood donors with positive or inconclusive results at Hemocentro Regional de Uberaba (HRU). Confirmatory tests were performed by the detection of HCV RNA in plasma using qualitative RT-PCR. The study was carried out from 1992 to 2005 for 171,027 blood donors, 24.3 percent first-time and 75.7 percent repeat donors. The ineligibility rate to HCV was 0.3 percent (561 donors) with 52.9 percent of them being first-time donors and 47.0 percent repeat donors with prevalences of 0.5 percent and 0.2 percent respectively (p<0.0001). The rate of inconclusive results was significantly higher among repeat donors (p=0.0214). Ninety-eight samples were subjected to qualitative PCR and only 34.7 percent (34) had positive results, with a significantly lower rate of positiveness for repeat donors (p = 0.0184) and almost a threefold lower rate of inconclusive results for the same donors. These results showed that, for a large number of donors with positive and inconclusive tests for anti-HCV, the infection was not confirmed. We concluded that serological ineligibility for hepatitis C of donors at HRU was not always associated with the presence of viral infection.

Perfil sorológico para doença de Chagas dos doadores de sangue do Hemocentro Regional de Uberaba / Serological profile concerning Chagas' disease of blood donors at Uberaba Blood Center

Atualmente, um dos maiores problemas na triagem sorológica de doadores de sangue para doença de Chagas é a alta freqüência de reações indeterminadas, o que faz com que muitos indivíduos sadios sejam rotulados como portadores de uma doença grave. O presente trabalho tem o objetivo de analisar o comportamento sorológico para doença de Chagas dos doadores do Hemocentro Regional de Uberaba, MG e propor mecanismos para reduzir o índice de inaptidão sorológica para essa doença. Através de estudo retrospectivo, foi analisado o resultado sorológico de 79.729 amostras obtidas de doações de sangue realizadas neste Serviço entre janeiro de 2000 e dezembro de 2004. Os resultados foram analisados quanto às variáveis: tipo de doador (novo e de retorno), gênero e idade (inferior ou igual a 30 anos e superior a 30 anos). Para a análise estatística foram realizados os testes do Qui-Quadrado e de comparação de proporções (Z). A ocorrência de doações com sorologia não negativa para doença de Chagas entre doadores novos foi significativamente superior aos de retorno, com p< 0,0001. Quanto à idade, a proporção de positivos no grupo maior de 30 anos foi significativamente superior à do grupo com idade igual ou inferior a 30 anos (p< 0,0001). O elevado número de reações indeterminadas nesse Serviço está de acordo com estudos recentes, reforçando a necessidade da implementação de testes sorológicos 100 por cento específicos ou de exames confirmatórios práticos e rápidos, passíveis de serem introduzidos nas rotinas dos serviços de hemoterapia, reduzindo o descarte desnecessário de bolsas de sangue.

Currently one of the major problems in the serological selection of blood donors in respect to Chagas' disease is the high incidence of indeterminate reactions, making a large number of healthy individuals incorrectly diagnosed as seriously ill. This paper aims at evaluating the serological pattern of Chagas' disease of donors of the Uberaba Blood Center and also to propose mechanisms to reduce the rate of serological ineligibility due to suspicion of this disease. A retrospective study of the serological results of 79,729 samples of blood was carried out between January 2000 and December 2004. The results were analyzed according to the following variables: type of donor (first-time and multiple), gender and age (less than or equal to 30 or more than 30 years old). The statistical analysis was made using the chi-square test and a comparison of proportions (Z). Indeterminate results in respect to Chagas' disease among first-time donors were significantly higher than those of multiple donations with p < 0.0001. As for age, the proportion of positivity in the over 30-year-old group was significantly higher to that of the under or equal to 30-year-old group (p < 0.0001). The high number of indeterminate reactions at this center is in accordance with recent studies, highlighting the need of implementing serological tests with 100 percent specificity or the use of practical and fast confirmation tests to be routinely introduced in hemotherapy services, reducing the unnecessary rejection of blood bags.