ABSTRACT
O Vírus Linfotrópico de Células T Humanas do tipo 1 (HTLV-1) é o agente etiológico da Leucemia da Células T do Adulto, da Paraparesia Espástica Tropical/Mielopatia associada ao HTLV-1 (TSP/HAM) e Uveítes. No Brasil, a infecção apresenta-se em todas as regiões. Entretanto, esta infecção não possui uma distribuição uniforme e sua origem não está totalmente esclarecida. A cidade do Salvador apresenta a maior taxa de soroprevalência (aproximadamente 1,8%). Além disso, a correlação entre o subgrupo/subtipo do HTLV-1 e o TSP/HAM foi verificada somente na população japonesa. O mecanismo da transcrição proviral da sequência do HTLV-1 depende da proteína viral transativadora Tax que se liga na sequência (enhancer) de três repetições de 21-bp da região U3-LTR. O objetivo do presente trabalho foi tentar elucidar melhor a origem do HTLV-1 no Brasil e investigar se os polimorfismos na região U3-LTR poderiam estar associados com a susceptibilidade à TSP/HAM. Foram estudadas 214 sequências obtidas de pacientes infectados pelo HTLV-1 (110 assintomáticos e 104 sintomáticos), por meio da técnica da PCR e utilizando o software BioEdit. O protótipo ATK1 foi usado como sequência padrão. Neighbor-joining e análise filogenética máxima verossimilhança (ML) foram realizadas com PAUP software. A análise filogenética da região LTR total das amostras dos doadores de sangue do Acre (2 isolados) e provenientes da cidade do Salvador (23 isolados) demonstrou que todas as amostras encontraram-se no subgrupo Transcontinental (A), subtipo Cosmopolita (a), com valores de bootstrap de 71% e 78% (p < 0.001 para ML), respectivamente. A maioria das sequências oriundas de Salvador (n=18) ficou no cluster maior da América Latina (denominado beta) e 4 sequências ficaram inseridas em um cluster monofilético com outras sequências da América do Sul (denominado cluster alfa), com valor de bootstrap de 93%. Além disso, a soroprevalência do HTLV-1 em doadores de sangue do Acre foi de 0,46% (1/219). Em relação à frequência das mutações pontuais da região U3-LTR destas cepas, nós identificamos uma inserção (C) entre as posições 8582 e 8583 que estava presente apenas no grupo assintomático (8/110, p=0.004). Ainda, a frequência de mutações significativas C maior que T na posição 8583 (14/110; p=0.001) e C maior que A na posição 8606 (9/110; p=0.012) foram observadas no grupo de assintomáticos. No grupo sintomático foi detectada uma inserção (g) entre as posições 8422 e 8423 (11/104, p=0.042), uma inserção (A), entre 8582 e 8583 (12/104, p=0.001) e uma deleção de um (C) na posição 8427 (17/104, p=0.002). Não foi observada correlação entre as mutações encontradas com a idade dos pacientes. Os resultados da análise filogenética sugerem que ocorreram introduções recentes, e que há uma relação mais próxima entre os isolados da América Latina com os do Sul da África do que em relação aos isolados do Oeste Africano e confirmam a introdução pós-colombiana do vírus em Salvador. Porém não exclui uma introdução pré-colombiana. As mutações pontuais encontradas não estão associadas com os subgrupos do HTLV-1 e podem ter um impacto na transcrição viral e no desenvolvimento da TSP/HAM.
Subject(s)
Humans , Spinal Cord Diseases/virology , Polymorphism, Genetic , Human T-lymphotropic virus 1 , Brazil/epidemiologyABSTRACT
O HIV-1 infecta células T CD4+ e macrófagos através da interação entre a glicoprotéina do envelope viral com a molécula CD4 e um receptor de quimiocina. O receptor de a-quimiocina CXCR4 é o correceptor para isolados de HIV-1 trópicos para células T CD4+ tumorais, enquanto cepas de HIV-l trópicos para macrófagos usam os receptores de β-quimiocina CCR2B, CCR3 e CCR5. Como vários polissacarídeos sulfatados apresentam atividade anti-HIV-1, in vitro, nós decidimos investigar se a condroitina sulfatada fucosilada (CSF), um polissacarídeo sulfatado natural derivado de um equinodermo, poderia neutralizar a infecção pelo HIV-1 mediada por isolados trópicos para CCR5 (R5), CXCR4 (X4) e CCR5/CXCR4 (R5X4), e comparar a atividade anti-HIV-l com a do dextran sulfato (DS). Para testar o efeito inibitório sobre isolados X4 e R5X4, realizamos ensaios de inibição da formação de sincícios entre células PM-l cronicamente infectadas por estes vírus com células T CD4+ tumorais (PM-l e MT-2) não-infectadas. A infecção pelo HIV-1 foi avaliada pela inibição do efeito citopático, o qual foi determinado pelo método colorimétrico XTT. Observamos que seis dos sete isolados X4 foram fortemente inibidos pelo CSF, enquanto quatro dos cinco isolados R5X4 foram neutralizados em ambas as células-alvo. Isolados R5 foram estudados infectando-se células U87 transfectadas com as moléculas CD4 e CCR5, na presença ou não do CSF. A replicação viral foi avaliada pela medida da atividade da enzima transcriptase reversa nos sobrenadantes de cultura. Vimos que cinco dos seis isolados testados foram fortemente bloqueados pelo CSF. Em conclusão, encontramos que o CSF foi mais eficiente quando a...