Eficacia de un herpesvirus de pavo recombinante expresando la proteína VP2 del virus de la enfermedad de Gumboro ante un desafío experimental / Efficacy of a Recombinant Turkey Herpesvirus Expressing the Viral Protein 2 of the Gumboro Disease Virus Against an Experimental Challenge

La vacunación temprana contra el virus de la enfermedad infecciosa de la bolsa (por sus siglas en inglés IBDV) es una práctica muy común; sin embargo, el uso de vacunas de baja atenuación puede comprometer la integridad de la bolsa de Fabricio en aves jóvenes generando inmunosupresión y el fracaso de los planes de vacunación. Una alternativa es la utilización de vectores virales para la expresión transgénica de proteínas inmunogénicas que pueden proporcionar protección adecuada sin el potencial daño a la bolsa. El objetivo del presente trabajo fue evaluar la protección contra un desafío experimental con cepas clásicas conferida por la vacunación al día de edad con VAXXITEK®, un herpesvirus de pavo (por sus siglas en inglés HVT) expresando la proteína inmunogénica VP2 de una cepa clásica del IBDV. Aves libres de patógenos específicos fueron vacunadas al día de edad por la vía subcutánea y luego desafiadas a los 18 ó 28 días de edad con la cepa STC del virus de la enfermedad de Gumboro. El criterio de protección incluyó signos clínicos, índice peso bolsa/peso corporal y la histopatología de la bolsa. En las aves vacunadas con VAXXITEK®, no se observaron signos clínicos o lesiones asociadas al desafío con la cepa STC, ni en el desafío temprano ni en el tardío. El índice bursal resultó significativamente menor en las aves no vacunadas que fueron desafiadas. Estos resultados indican que una dosis de la vacuna HVT-IBDV recombinante protege a las aves contra un desafío con cepas clásicas.

Early vaccination against infectious bursal disease virus (IBDV) is a common practice; however, the use of live attenuated vaccines may sometimes compromise the bursal integrity in young birds generating immunosupression and failures in vaccination programs. An alternative is the use of viral vectors for transgenic expression of immunogenic proteins that can provide adequate protection without the potential bursal damage. The objective of this work was to assess the protection against a classical strain challenge conferred by day-one vaccination using VAXXITEK®, a recombinant herpesvirus of turkey expressing the immunogenic viral protein 2 from a classical IBDV. Specific pathogen free (SPF) one-day old birds were vaccinated by the subcutaneous route and challenged with the STC IBDV strain at 18 or 28 days of age. The protection criteria included: clinical signs, bursa/bodyweight ratio and bursal histopathology. No clinical signs or STC challenge related bursal lesions were observed in the VAXXITEK® vaccinated birds at both early and late challenge. The bursal index was significantly lower in the unvaccinated challenged birds. These results indicate that single dose recombinant HVT-IBDV vaccination protects chickens against a classical strain challenge.

Detección y caracterización molecular de cepas variantes del virus de la enfermedad infecciosa de la bolsa en el Estado Zulia, Venezuela / Molecular detection and characterization of infectious bursal disease virus variant strains from Zulia State, Venezuela

Las cepas clásicas del virus de la enfermedad infecciosa de la bolsa (por sus siglas en inglés IBDV) están presentes en la industria avícola venezolana desde el último tercio del siglo pasado, a pesar de la implementación de programas intensivos de vacunación. Recientemente, se ha reportado la presencia de cepas variantes del IBDV en varios países de Latinoamérica. El presente trabajo reporta la identificación, mediante técnicas moleculares, de cepas variantes en granjas avícolas venezolanas. En parvadas de pollos de engorde de cuatro semanas de edad se tomaron bolsas de Fabricio e improntas en la tarjeta Whatman Indicadora Clásica FTA® para evaluación histopatológica y detección molecular, respectivamente. Para la caracterización molecular se utilizó la prueba de reacción en cadena por la polimerasa-transcriptasa reversa (por sus siglas en inglés RT-PCR) acoplada a secuenciación directa de nucleótidos. El peso vivo del ave, el índice peso bolsa/peso corporal, así como el peso y diámetro de la bolsa se consideraron como indicadores de inmunocompetencia a la cuarta semana. Todas las aves muestreadas (n=113) resultaron positivas a IBDV. Los virus provenientes de 10 de las 13 granjas mostraron alta similitud con cepas variantes (A y E). En concordancia con los resultados de RT-PCR, los hallazgos histopatológicos mostraron lesiones relacionadas con IBDV. Los indicadores morfológicos de inmunocompetencia se afectaron significativamente en las granjas donde se detectaron cepas variantes. En Venezuela no se utiliza vacuna viva contra cepas variantes, lo que incrementa el riesgo de inmunosupresión, fallas en los programas de vacunación y la susceptibilidad a enfermedades endémicas.

Classical infectious bursa disease virus (IBDV) has been present in the Venezuelan poultry industry since the last quarter of the past century despite intensive vaccination programs applied to control the disease. Lately, the presence of variant strains has been reported in several Latin-American countries. This work reports the molecular identification of variant IBDV strains in poultry farms from Venezuela. Bursal imprints in Whatman classic indicator FTA® cards and bursa tissues for histopathological analysis were collected from 4-week old broiler flocks. Reverse transcriptase polymerase chain reaction (RT-PCR) and direct nucleotide sequence were used for the virus molecular characterization. The bird´s body weight, the bursal index, the bursa weight and diameter were used to assess the immune status at four weeks of age. All the birds sampled (n =113) were IBDV positive. Viruses from 10 out of 13 farms showed high similarity with the IBDV variant strains (variants A and E). Histopathological findings where consistent with the RT-PCR, results showing IBDV related bursa damage in the infected birds. The immune status indicators were significantly affected in the farms where variant strains were detected. No variant strain live vaccination is currently used in Venezuela, increasing the risk of immunossupression, vaccine failure and susceptibility to endemic diseases.

Bursal restoration after intermediate and intermediate plus infectious bursal disease virus vaccination

Infectious bursal disease (IBD) is an acute, contagious, viral disease of young chickens characterized by diarrhea, ventpicking, trembling, incoordination, inflammation followed by atrophy of the bursa of Fabricius and by variable degrees of immunosuppression. The diseases is caused by the infectious bursal disease virus (IBDV) which upon its antigenic characteristics and pathogenicity has been classified as classic (mild, intermediate and intermediate plus) strains, very virulent IBDV (vvIBDV) and variant strains. With the widespread presence of vvIBDV, the poultry industry has resorted to the use of less attenuated vaccines raising the concern about bursal integrity after vaccination. IBD vaccination using intermediate plus vaccine strains can temporarily deplete the bursal follicles and interrupt the normal B-cell development; if the damage is reversible this process can be followed by B-cell repopulation and histological regeneration. In order to assess this bursal restoration process, specific pathogen free birds were vaccinated with intermediate and intermediate plus IBDV vaccine and bursas were evaluated by histopathology and immunohistochemistry. Both B and T cells were detected in the recovering bursas. At the end of the trial, signs of bursal regeneration and B cell repopulation were observed in the intermediate IBDV vaccinated birds. The bursal restoration process was impaired or delayed in the intermediate plus vaccine group. Relevance of B and T cell repopulation is discussed.

La enfermedad infecciosa de la bolsa (por sus siglas en Inglés IBD) es una enfermedad viral aguda y contagiosa que afecta a los pollos jóvenes, caracterizada por diarrea, picado de la cloaca, temblores, incoordinación, inflamación seguida de atrofia de la bolsa de Fabricious y por grados variables de inmunosupresión. La enfermedad es causada por el virus de la enfermedad infecciosa de la bolsa (por sus siglas en Inglés IBDV) que basado en sus características antigénicas y de patogenicidad ha sido clasificado en cepas clásicas (virus suaves, intermedios e intermedios plus), IBDV muy virulento y cepas variantes. Debido a la amplia presencia de IBDV muy virulento, la industria avícola ha implementado la utilización de vacunas menos atenuadas, lo que genera preocupación por la integridad de la bolsa posterior a la vacunación. La vacunación contra IBD utilizando vacunas intermedias plus puede despoblar los folículos de la bolsa e interrumpir el desarrollo normal de las células B, si el daño es reversible este proceso puede ser seguido de la repoblación de la bolsa con células B y de regeneración histológica. Con la finalidad de evaluar este proceso de restauración, se vacunaron aves libres de patógenos específicos con vacunas intermedia e intermedia plus contra IBDV y se evaluaron las bolsas mediante histopatología e inmunohistoquímica. En las bolsas en recuperación se detectaron tanto células B como células T. Al final del experimento, en las aves vacunadas con la cepa intermedia se observaron signos de regeneración de la bolsa y repoblación de células B. El proceso de restauración de la bolsa se vio comprometido o retrasado en el grupo vacunado con la cepa intermedia plus. Se discute la relevancia de la repoblación de la bolsa con células T y B.

A recombinant avian adeno-associated virus as a vector factor for infectious bursal disease vaccination

El virus de la enfermedad infecciosa de la bolsa es una enfermedad de distribución mundial que afecta a aves jóvenes que debe ser controlada mediante vacunación y constituye una de las preocupaciones principales de la industria avícola mundial. Los virus adeno-asociados aviares son virus no patogénicos capaces de dar cabida a porciones relativamente largas de ADN y de infectar una amplia variedad de tipos celulares. Un miembro de esta familia, el virus adeno-asociado aviar ha sido caracterizado por completo y utilizado como un vector para entrega de genes en células y tejidos de embriones de pollo. En el presente estudio se demostró mediante inmunohistoquímica y microscopia electrónica la factibilidad de generar virus adeno-asociados recombinantes expresando la proteína viral 2 del virus de la enfermedad infecciosa de la bolsa. Luego de la inoculación in ovo o intramuscular de aves libres de patógenos específicos con el virus recombinante, se observó evidencia serológica de la expresión de la proteína VP2. La utilización de virus adeno-asociado aviar recombinantes para la entrega de genes es una opción interesante para la vacunación de aves domésticas.

Infectious bursal disease is a worldwide distributed immunosuppressive disease of young chickens that need to be controlled by vaccination; it represents one of the main concerns for the poultry industry. The adeno-associated viruses are non-pathogenic viruses, capable of accommodating relatively long pieces of DNA, and of infecting a wide variety of cell types. A member of this family, the avian adeno-associated virus has been fully characterized and successfully used for gene delivery in chicken embryo tissues and cells. In this study, it was demonstrated by electron microscopy and immunocitochemistry the feasibility of generating recombinant avian adeno-associated virus (rAAAV) virions expressing the immunogenic viral protein 2 of infectious bursal disease virus (IBDV). Serological evidence of VP2 protein expression measured as IBDV specific antibody response after in ovo or intramuscular inoculation of the recombinant virus in specific pathogen free (SPF) chickens was observed. The use of rAAAV virions for gene delivery in poultry is a promising approach to poultry vaccination.

Utilización de las tarjetas FTA® para el diagnóstico molecular del virus de la enfermedad de NEWCASTLE en muestras de fluido alantoideo / Utilization of FTA® Cards for the Molecular Diagnostic of Newcastle Disease Virus in Allantoic Fluid Samples

Se evaluó la factibilidad de utilizar las tarjetas FTA® (Flinders Technology Associates) para la inactivación y transporte de fluido alantoideo infectado con el virus de la enfermedad de Newcastle (VEN). La tarjetas FTA® fueron impregnadas con diluciones seriadas de fluido alantoideo con un título inicial de 10(8,8) DL/50 del VEN cepa LaSota y analizadas mediante la prueba de reacción en cadena por la polimerasa transcriptasa reversa (por sus siglas en ingles RT-PCR) a las 24 horas, 7 y 14 días. La concentración más baja del virus detectada en el fluido alantoideo fue 10(5,8) DL/50. La detección del virus a partir de la tarjeta fue posible hasta 14 días después de su inactivación. El re-aislamiento viral en huevos embrionados a partir de las tarjetas resultó negativo. La inactivación del virus en las tarjetas no afectó la calidad de la secuencia de nucleótidos, permitiendo la determinación de su virulencia mediante la secuenciación de los nucleótidos que codifican la zona de corte de la proteína de fusión resultando ser lentogénico en concordancia con la cepa inicial de virus aplicada a las tarjetas. Se concluye que las tarjetas FTA® representan una alternativa válida para el muestreo, inactivación y diagnóstico molecular del VEN, con un alto grado de bioseguridad.

The feasibility of using FTA® cards (Flinders Technology Associates) for inactivation and transportation of allantoic fluid infected with Newcastle disease virus (NDV) was evaluated. Serial dilutions of allantoic fluid with a titer of 10(8.8) ELD/50 of LaSota strain NDV were loaded on the FTA® cards and analyzed after 24 hour, 7 and 14 days using reverse transcriptase-polimerase chain reaction (RT-PCR). The lowest virus concentration that could be detected from the FTA® cards was 10(5.8) ELD/50. The detection of the inactivated virus was possible after 14 days of virus inactivation. No virus re-isolation in embryonating eggs was possible from the cards. No negative effects of the FTA® card inactivation on the nucleotide sequences were observed, allowing the determination of its virulence by direct nucleotide sequencing of the F protein cleavage site, resulting in a lentogénic strain in concordance with the initial virus applied on the cards. It can be conclude that FTA® cards are a valid alternative for NDV sampling, inactivation and molecular diagnostic with a high degree of biosecurity.

Evaluación de dos planes de vacunación contra la enfermedad de newcastle en pollos de engorde de la línea ross criados bajo condiciones de campo en el estado Zulia Venezuela / Evaluation of two vaccination programs against newcastle disease in ross line broiler chickens reared under field conditions in Zulia state Venezuela

Bajo condiciones de campo del estado Zulia, se probó el efecto de dos planes de vacunación contra la enfermedad de Newcastle (ENC). Se usaron tres grupos de 200 pollos Ross de un día de edad. el primer día se evaluaron serológica e histopatológicamente 20 pollos provenientes del lote a ser utilizado para determinar la calidad inicial y los anticuerpos maternales (AM) contra ENC. Los tratamiento aplicados fueron: T1 Control sin vacunación contra ENC; T2 Hitchner B1B1 por aspersión; T3 cepa enterotrópica (VG/GA) por aspersión + Oleosa subcutánea al día 1, ambos con refuerzos al día 7 y 14 con cepa La Sota en spray y agua respectivamente. En 16 aves de cada tratamiento se estudiaron semanalmente los anticuerpos posvacunales contra ENC a través de Inhibición de la Hemoaglutinación (HI), la respuesta al desafío (día 37) con una cepa velogénica viscerotrópica de ENC (RD) y el grado de alteracción histopatológica en las aves (GL). La data se analizó a través de ANOVA y LS means del paquete estadístico SAS. Los AM promediaron una media geométrica del título (MGT) de 120, no se observaron lesiones hitopatológicas previas al ensayo. Para el T1, T2 y T3 los resultados promediaron una MGT de 7,5/10,7/13,5. En la variable GL no hubo diferencias entre tratamientos, sin embargo se observaron lesiones compatibles con Marek, Gumboro y Micotoxicosis; la RD fue 0 por ciento, 60 por ciento y 90 por ciento de protección respectivamente. La respeuesta serológica a las primeras vacunciones fue inhibida probablemente debido a los altos AM, mientras que la respuesta inmune primaria fue inducida por la tercera vacunación y afectadas por las condiciones de campo. La respuesta inmune humoral y la resistencia al desafío fueron mayores en el T3. Se concluye que bajo condiciones de campo se debe utilizar el plan de vacunación correpondiente al T3