Conservación de cultivos fúngicos de alto riesgo de Histoplasma y Cryptococcus / Preservation of high risk fungal cultures of Histoplasma and Cryptococcus

Introducción: las colecciones de cultivos microbianos son las encargadas de garantizar el material biológico requerido para el desarrollo de las ciencias biológicas. Entre los métodos de conservación de cultivos fúngicos, la inmersión en agua destilada, por su bajo costo y sencillez, constituye una ventajosa alternativa. Objetivo: evaluar la utilidad de este método de conservación en los cultivos fúngicos de Histoplasma y Cryptococcus. Métodos: se realizó una evaluación del estado de conservación de las especies de mayor riesgo biológico, pertenecientes a los géneros Histoplasma y Cryptococcus de la colección de cultivos de hongos del Instituto de Medicina Tropical "Pedro Kourí". Se analizaron 102 cepas conservadas en agua destilada, de las cuales 92 por ciento estaba preservado por más de 10 años. Resultados: los porcentajes de recuperación para H. capsulatum, C. neoformans y C. gattii fueron 64,3; 79,1 y 100 por ciento, respectivamente. Se demostró que este método de conservación resulta satisfactorio para cultivos fúngicos en laboratorios de recursos limitados. Se implementó sobre plataforma web una base de datos digital con la información de interés de la colección. Se hizo una valoración de la importancia del estricto cumplimiento de las medidas de bioseguridad para el trabajo de las colecciones, especialmente frente a patógenos de alto riesgo. Conclusiones: la conservación de cultivos de hongos en agua destilada es un método de gran utilidad en laboratorios de recursos limitados. El trabajo de las colecciones de cultivos debe considerarse una actividad imprescindible para enfrentar los nuevos retos del desarrollo de las ciencias biomédicas.

Introduction: culture collections are responsible for providing the microbial resources for development of biological sciences. Storage in distilled water is one of the easiest and least expensive method for long-term fungal preservation. Objective: to evaluate the usefulness of this preservation method in fungal culture of Histoplasma and Cryptococcus. Methods: the preservation condition of the highest biological risk species from Histoplasma y Cryptococcus genera, included in the fungal culture collection of "Pedro Kourí" Institute of Tropical Medicine in Havana, was evaluated in this study. One hundred and two strains stored in distilled water, 92 percent of which had been preserved for more than 10 years, were analyzed. Results: the percentages of recovered strains from H. capsulatum, C. neoformans and C. gattii were 64.3 percent; 79.1 percent and 100 percent respectively. This method of preservation proved to be satisfactory for fungal culture in labs with limited financial resources. A web-based database with interesting information about the collection was made. The importance of strict compliance with the biosafety measures in these collections, particularly with high risk pathogens. Conclusions: preservation of fungal cultures in distilled water is a very useful method for laboratories with limited resources. Culture collections should be assumed as an essential activity in order to solve increasing challenges in the development of biomedical sciences.

Una actualización acerca de histoplasmosis / Histoplasmosis updating

La histoplasmosis infección causada por el hongo Histoplasma capsulatum ha sido reportada en todos los continentes y se considera endémica en el continente americano, incluida Cuba. El hongo se desarrolla en el suelo con excretas de aves y murciélagos, donde es capaz de producir abundantes microconidios, que al ser inhalados por el hombre son capaces de causar la infección. El cuadro clínico puede variar, desde infecciones asintomáticas hasta cuadros diseminados graves que involucran a uno o varios órganos y sistemas y que afectan sobre todo a pacientes con sida, neoplasias hematológicas, con trasplantes u otras inmunodeficiencias. Los principales grupos de riesgo incluyen además, aquellos individuos que por razones ocupacionales se expongan los aerosoles contaminados con el hongo. El diagnóstico de laboratorio se basa en la observación de este en fluidos y tejidos orgánicos, en el cultivo de esos materiales y en la detección de anticuerpos y antígenos específicos. Los métodos moleculares, en especial mediante la reacción en cadena de la polimerasa, aunque no han sido suficientemente evaluados, pudieran representar un importante avance en el diagnóstico temprano de esta micosis. Para el tratamiento de las formas agudas moderadas, localizadas y respiratoria crónica se recomienda el itraconazol, mientras que para las formas graves y diseminadas la droga de elección es la anfotericina B, con preferencia en alguna de sus formulaciones lipídicas. La histoplasmosis representa hoy una de las micosis sistémicas más importante en las Américas, con una amplia distribución en todas las regiones de Cuba.

Histoplasmosis, an infection caused by the fungus Histoplasma capsulatum, has been reported all over the world and is considered endemic in the American continent, including Cuba. This fungus grows on the soils contaminated with bird and bat excreta, where it produces a great number of microconidia that could cause the infection when they are inhaled. The clinical spectrum varies from asymptomatic infections to serious disseminated diseases involving one or many organ systems and affects mainly AIDS patients, patients with hematological neoplasias, transplant recipients or other immunosuppressed patients. The main risk groups include those individuals whose working activities make them be exposed to aerosols contaminated with H. capsulatum. Lab diagnosis is based on the microscopic observation, isolation and identification of the fungus in fluid or tissue samples of patients, and on specific antigen and antibodies detection. The molecular methods based on polymerase chain reaction have not been sufficiently defined, and they could be an important advance in the early diagnosis of this mycosis. Itraconazole is recommended for treatment of moderate, localized and chronic infection whereas amphotericin B is the drug of choice for disseminated and serious manifestations, particularly in its lipidic formulations. At present, histoplasmosis is considered one of the most important systemic mycoses in the Americas, and it is widely spread over all regions of Cuba.

Sensibilidad in vitro de cepas de Candida frente a fluconazol y anfotericina B / In vitro susceptibility of Candida strains to fluconazole and amphotericin B

Las pruebas de sensibilidad in vitro a los agentes antifúngicos se han convertido en una necesidad actual de los laboratorios de micología médica. Se determinó la concentración mínima inhibitoria de 210 cepas de levaduras del género Candida aisladas de pacientes VIH/SIDA que presentaban lesiones orales, con el objetivo de conocer la sensibilidad a fluconazol y anfotericina B. Fue utilizado un micrométodo de dilución según el protocolo M27A2 del CLSI. C. albicans fue la especie predominante (62,4 por ciento), seguida, en orden de frecuencia, de C. glabrata, C. parapsilosis, C. krusei y C. tropicalis. Frente a la anfotericina B el valor de la moda y la CMI50 fue de 0,125 µg/mL, lo que indica la efectividad in vitro de este fármaco. Solo una cepa (C. krusei) mostró una concentración mínima inhibitoria superior a 1 µg/mL. De las cepas, 8,1 por ciento resultó resistente al fluconazol y 8,1 por ciento sensible dependiente de la dosis. Las especies que se comportaron menos sensibles fueron C. krusei y C. glabrata. Los resultados obtenidos sentaron las bases para estudios más amplios en el medio cubano y sugirieron la necesidad de continuar la vigilancia del comportamiento de los aislamientos clínicos de levaduras frente a los agentes antifúngicos.

In vitro antifungal susceptibility testing is really necessary at present in medical mycology laboratories. Minimal inhibitory concentration of 210 Candida yeast strains isolated from HIV/AIDS patients with oral lesions was determined to find out susceptibility to fluconazole and amphotericin B. A CLSI´s M27A2 protocol-based dilution micromethod was used. C. albicans was predominant (62.4 percent)followed by C. glabrata, C. parapsilosis, and C. tropicalis. Regarding amphotericin B, the mode value and MIC50 were 0,125 µg/mL, which indicated the effectiveness of this drug in vitro conditions. Only C. krusei strain showed a minimal inhibitory concentration over 1 µg/mL. 8.1 percent of strains were resistent to fluconazole whereas 8.1 percent was dose- depending susceptible. The less susceptible species were C. krusei and C. glabrata. The achieved results laid the foundations for wider studies to be made in the Cuban context and indicated the need of keeping surveillance on the behaviour of clinical yeast isolates to antifungal drugs.

Obtención de antisueros específicos para la serotipificación de Cryptococcus neoformans var. neoformans / Obtention of specific antisera for the serotyping of Cryptococcus neoformans var. neoformans

Se propuso la obtención de antisueros en el Laboratorio de Micología del Instituto de Medicina Tropical ôPedro Kouríö, que permitiera la rápida identificación de las variedades y serotipos de Cryptococcus neoformans, dada la importancia clínico-epidemiológica que reviste su conocimiento. Mediante la inmunización de conejos con células enteras formalinizadas de los 4 serotipos de esta levadura, se obtuvieron antisueros que fueron adsorbidos con células de los serotipos heterólogos; lográndose 3 antisueros capaces de diferenciar a la var. neoformans (anti AD) y a sus respectivos serotipos (anti-A y anti-D). Este trabajo contribuirá al conocimiento de la epidemiología de esta importante enfermedad en el medio cubano, por ser la primera vez en Cuba que se logra la obtención de antisueros útiles para la identificación de los serotipos pertenecientes a la variedad neoformans, principal agente causal de la criptococosis

Utilidad de la D-prolina en la diferenciación de las variedades de Cryptococcus neoformans / Usefulness of D-proline in the differentiation of varieties of Cryptococcus neoformans

Se realizó un estudio comparativo entre la asimilación de la D-prolina y el crecimiento en medio canavanina-glicina-azul de bromotimol (CGB) utilizados para la clasificación de las variedades de Cryptococcus neoformans. En las 86 cepas estudiadas, 100 por ciento de coincidencia entre ambos métodos, permitió afirmar que 95,34 por ciento pertenecían a la var. neoformans y el resto (4,65 por ciento) a la var. gattii. Los resultados obtenidos corroboraronn que todos los aislamientos clínicos autóctonos, hasta el presente, corresponden a la var. neoformans y permitieron sugerir el uso de la D-prolina para la evaluación inicial de las cepas, como un método alternativo y sencillo que presentó, en estas condiciones, alta coincidencia con el método de referencia (crecimiento en CGB)