A recurrent de novo mutation in ATP1A3 gene in a Mexican patient with alternating hemiplegia of childhood detected by massively parallel sequencing / Mutación de novo recurrente en el gen ATP1A3 en una paciente mexicana con hemiplejia alternante de la infancia detectada por secuenciación masiva en paralelo

Abstract Background: Pediatric movement disorders represent a diagnostic challenge for pediatricians and pediatric neurologists due to their high clinical heterogeneity and shared common features. Therefore, specific diagnoses require different approaches including metabolic work-up and specific tests for frequent genetic conditions. Alternating hemiplegia of childhood (AHC) is an ultra-rare pediatric movement disorder, characterized by paroxysmal alternating hemiplegia, dystonia, and seizure-like episodes that can be misleading during the evaluation of a child with a movement disorder. Case report: We present a Mexican patient with abnormal movements referred to the Genetics clinic because of hyperammonemia and a possible organic acidemia. Our assessment did not find clinical features compatible with an inborn error of metabolism. A massively parallel sequencing approach with targeted panel sequencing was used to get a final diagnosis. A missense variant c.2839G>A (p.Gly947Arg) located at exon 21 of ATP1A3 gene was demonstrated. This variant (rs398122887) has been previously reported as de novo producing alternating hemiplegia of childhood (AHC). Conclusions: AHC is an ultra-rare syndrome presented as a movement disorder with seizure-like episodes and a unique facial phenotype. Clinicians should be aware of this combination in order to diagnose this condition in a timely manner. Massive parallel sequencing panels are emerging as the best approach to diagnose rare movement disorders and simultaneously rule out metabolic disorders and common epileptic syndromes.

Resumen Introducción: Los trastornos pediátricos del movimiento representan un reto diagnóstico para pediatras y neurólogos pediatras debido a su gran heterogeneidad clínica y características comunes compartidas. Por lo tanto, los diagnósticos específicos requieren de diferentes abordajes que incluyen la búsqueda de desórdenes metabólicos y pruebas específicas para condiciones genéticas frecuentes. La hemiplejia alternante de la infancia (AHC) es un trastorno pediátrico del movimiento poco común, caracterizado por cuadros paroxísticos de hemiplejia alternante, distonía y episodios semejantes a crisis epilépticas, que pueden resultar desorientadores durante el abordaje diagnóstico de un infante con un desorden del movimiento. Caso clínico: Presentamos una paciente mexicana con movimientos anormales referida a la Clínica de Genética por hiperamonemia y una posible acidemia orgánica. Nuestro abordaje no identificó características clínicas compatibles con un error innato del metabolismo. Se utilizó un abordaje basado en secuenciación masiva en paralelo para obtener un diagnóstico final. Se demostró una variante de sentido equivocado c.2839G>A (p.Gly947Arg) localizada en el exón 21 del gen ATP1A3. Esta variante (rs398122887) ha sido previamente reportada como de novo, ocasionando AHC. Conclusiones: La AHC es un síndrome excepcionalmente raro que se presenta con un trastorno del movimiento con cuadros semejantes a crisis epilépticas y un fenotipo facial particular. Los médicos deben ser conscientes de esta combinación con el fin de diagnosticar oportunamente esta condición. Los paneles de secuenciación masiva están emergiendo como el mejor abordaje para diagnosticar trastornos del movimiento raros y, simultáneamente, descartar trastornos metabólicos y síndromes epilépticos comunes.

Colestasis por deficiencia de 3β-Δ5-C27-hidroxiesteroide deshidrogenasa en un paciente con alteración en la síntesis de ácidos biliares / Cholestasis due to deficiency of 3β-Δ5-C27-hydroxysteroid dehydrogenase in a patient with altered bile acid synthesis

Resumen: Introducción: Los errores innatos en la síntesis de ácidos biliares son un grupo de defectos genéticos que representan del 1 al 2% de las enfermedades colestásicas crónicas en lactantes, niños y adolescentes. La deficiencia de 3β-Δ5-C27-hidroxiesteroide oxidoreductasa (3β-HSDH) es el defecto más comúnmente reportado. El cuadro clínico característico consiste en hepatitis neonatal, hepatomegalia, esplenomegalia, malabsorción, desnutrición y enfermedad hepática de aparición tardía. Caso clínico: Lactante masculino con antecedente de ictericia en escleras a los 4 meses que se resolvió espontáneamente; posteriormente, a los 18 meses, presentó enfermedad colestásica. Durante su abordaje se documentó gamma-glutamil transpeptidasa normal, hallazgo que es altamente sugestivo de alteración en la síntesis de ácidos biliares. El diagnóstico se realizó con espectrometría de masas en orina. Se inició tratamiento con ácido cólico oral, y presentó mejoría inmediata. Conclusiones: El resultado en los ácidos biliares urinarios es definitivo para el defecto genético y consistente con mutaciones homocigotas en el gen HSD3B7. Este padecimiento constituye un diagnóstico de exclusión en las enfermedades colestásicas de la infancia, particularmente el hallazgo de gamma-glutamil transpeptidasa normal o levemente aumentada, y responde adecuadamente al tratamiento oral, por lo que debe identificarse de forma temprana.

Abstract: Background: Inborn errors in bile acid synthesis are a group of genetic defects accounting for 1 to 2% of chronic cholestatic diseases in infants, children and adolescents. Deficiency of 3β-Δ5-C27-hydroxysteroid dehydrogenase (3β-HSDH) is the most common defect in this disease. Clinical features consist of neonatal hepatitis, hepatomegaly, splenomegaly, malabsorption, malnutrition, and late-onset liver disease. Case report: A male infant who presented jaundice in sclera at 4 months that resolved spontaneously, later presented cholestatic disease at 18 months. During his approach, normal gamma-glutamyl transpeptidase was documented, a finding that is highly suggestive of alteration in the synthesis of bile acids. The diagnosis was made using urine mass spectrometry. Oral colic acid treatment was started, presenting immediate improvement. Conclusions: The result in urinary bile acids is definitive for the genetic defect and consistent with homozygous mutations in the HSD3B7 gene. This condition is a diagnosis of exclusion in childhood cholestatic diseases, particularly in the presence of normal or mildly enlarged gamma-glutamyl transpeptidase, and responds adequately to oral treatment; it should be identified early.

Efecto de la aplicación de la hormona de crecimiento recombinante (rbST) sobre la respuesta superovulatoria y la viabilidad embrionaria en ovejas de pelo / Effect of recombinant growth hormone (rsST) application on supervolatory response and embyro viability in hair ewes

Se estudió el efecto del uso de una proteína de alto valor nutricional y su interacción con la hormona de crecimiento recombinante (rbST) sobre la respuesta superovulatoria y la viabilidad embrionaria en ovejas de pelo. Se utilizaron doce ovejas adultas de raza Pelibuey, distribuidas completamente al azar en dos tratamientos. TA : Control. TB : 100 mg de Somatotropina Bovina recombinante (rbST). La sincronización del estro en ambos grupos duró 14 días, utilizando esponjas vaginales impregnadas con 40 mg de FGA, con cambio a los 7 días. La superovulación se realizó con FSH ovina (oFSH) a intervalos de 12 h en dosis decrecientes, iniciando 72 h antes de la retirada de las esponjas. En la primera aplicación se les administró adicionalmente 2 mL de prostaglandina PGF2a las ovejas. La inyección de rbST en el TB se hizo junto con la octava aplicación de oFSH. Todas las ovejas se inseminaron vía intrauterina a las 56 ±1 h de la retirada de las esponjas, con semen refrigerado (10 a la 8 espermatozoides/pajuela). Los embriones se colectaron 5 días después de la inseminación y la viabilidad embrionaria se midió utilizando criterios morfológicos. Se observó un incremento en todas las variables de respuesta evaluadas por efecto de la aplicación de rbST: cuerpos lúteos (89 vs 119), cuerpos lúteos considerados (77 vs 117), embriones recuperados (64 vs 78), embriones viables (35 vs 64) y embriones viables por oveja (5,8 vs 10,6) siendo significativa la tasa de ovulación (86,52 por ciento vs 96,64 por ciento) y la tasa de viabilidad embrionaria (54,69 por ciento vs 82,05 por ciento) (P<0,01), esto probablemente se atribuye a que la rbST altera los componentes del sistema de factores de crecimiento insulínico estimulando la esteroidogénesis folicular. La hormona de crecimiento aplicada antes de la ovulación estimula la maduración de mayor cantidad de folículos e incrementa la cantidad recuperada de embriones y la viabilidadembrionaria.

The objective of this study was measure the effect of using nutritional high quality protein and its interaction with recombinant growth hormone over the ovulatory response and embryo viability in hair ewes. Twelve adult multiparous Pelibuey ewes were used and randomly submitted to two different treatments. In treatment A (TA, Control group), the ewes received a superovulation treatment without the application of recombinant growth hormone (rbST) in treatment B (TB), the ewes received the same superovulation treatment with the addition of 100 mg of recombinant bovine somatotropin (rbST). The induction and synchronization of the estrous cycle was realized by the insertion of vaginal sponges impregnated with 40 mg of FGA during 14 days, with sponge change at the seventh day. To induce the superovulation follicle stimulating ovine hormone (oFSH) was used in decreasing doses levels (every 12 h) starting 72 h before the sponges withdrawal. In the first application 2 mL of prostaglandin PGF2a were additionally applied. The application of 100 mg of rbST was done during the eighth administration of oFSH. The ewes were inseminated 56 ± 1 h after the sponge withdrawal with refrigerated semen (108 sperm/ straw). The embryos were collected 5 days after the insemination and the embryo viability was measured by morphological evaluation. An increase was observed in all the variables evaluated in the rbST group: corporea lutea (89 vs 119), corporea lutea considered (77 vs 117), embryos recovered (64 vs 78), viable embryos (35 vs 64), and viable embryos by ewe (5.8 vs 10.6), with statistical significance, considered ovulation rate (86.52% vs 96.64%) and embryo viability rate (54.69% vs 82.05%) (P<0.01), this is probably due to the effect of rbST over the growing insuline factors that control the follicular esteroidogenesis. The rbST application before the ovulation influence the maturation of higher amount of follicles and increase the quantity and viability of the embryos obtained.

Genómica funcional en embriones y ovocitos humanos individuales / Functional genomics in single embryo and human oocytes

Durante tres décadas, el análisis de embriones y ovocitos humanos ha consistido principalmente, en su evaluación morfológica o citogenética; paulatinamente se han incorporado técnicas moleculares como FISH y PCR. Sin embargo, el desarrollo de nuevos métodos de amplificación de RNA, usando células individuales, ha permitido analizar la expresión génica en ovocitos, complejos cúmulo-ovocito y embriones de preimplantación. Estas técnicas revolucionarán el estudio de la biología reproductiva humana y la reproducción asistida, permitiendo un análisis objetivo y poderoso de los complejos procesos e interacciones del inicio de la vida, explicando las causas de la infertilidad humana y generando nuevas terapéuticas para ésta.

During three decades human embryo and oocyte analyses have been performed based on morphological or cytogenetical evaluations; molecular techniques, like FISH and PCR, have been gradually incorporated. However, the development of new techniques of individual cell RNA amplification has allowed the analysis of gene expression in oocytes, cumulus-oocyte complex and preimplantation embryos. These techniques will change radically the study of human reproductive biology and assisted reproduction, allowing a powerful and objective analysis of the complex processes and the interactions that may explain the causes of infertility and generate new therapeutics.