Use of two multiplex (PCR) reactions as an initial delection screening method for DMD and BMD patients

O gene da distrofina, localizado em Xp21, é um loco gênico enorme, ocupando uma regiäo de mais de 2,3 Mb. Mutaçöes neste gene resultam na distrofia muscular Duchenne (DMD) ou distrofia muscular Becker (DMB). Cerca de 60% das mutaçöes säo deleçöes com um tamanho médio de 200 kb e säo detectáveis por análise de Southern blot usando sondas cDNA. Em 1988 Chamberlain et al. descreveram uma reaçäo multiplex para uma amplificaçäo simultânea de 9 exons do gene da distrofina, o que permitiu detectar cerca de 80% de todas as deleçöes. Recentemente Beggs et al. descreveram um conjunto adicional de primers para um teste multiplex de mais 9 exons. Usamos no Rio de Janeiro ambas as reaçöes multiplex no estudo de 27 pacientes DMD e 4 DMB. A síntese dos primers e o preparo dos kits foram realizados em Leiden. Com a reaçäo multiplex de Vhamberlain detectamos 10 deleçöes. A segunda reaçäo multiplex (Beggs) confirmou 7 dessas deleçöes e detectou mais 2 pacientes com deleçöes, uma para o exon 50 e outra para o exon 52. A análise Southern blot e a hibridizaçäo cDNA foram usadas para confirmar as deleçöes e determinar-lhes a extensäo. As sondas cDNA confirmaram as 12 deleçöes detectadas usando as duas reaçöes multiplex. Nossa experiência é a de que a abordagem multiplex para triagem inicial de deleçöes é um método bom e confiável

Detection of carriers of Duchene muscular dystrophy gene using logistic discriminating analysis: creatine-kinase and pyruvate-kinase

Foram determinadas as atividades da creatino-cinase (CK) e da piruvato-cinase (PK) em 160 amostras de soro: 87 de mulheres normais e 73 de 30 portadoras certas do gene para a distrofia muscular Duchenne (DMD), da faixa etária de 19-54 anos. Todas as determinaçöes de CK e PK foram realizadas em alíquotas da mesma amostra de soro. Foi usada análise discriminante logística para determinar a eficácia de cada enzima isoladamente ou das duas em combinacäo na identificaçäo de portadoras do gene da DMD. A uma amostra de soro, com um certo nível de CK ou de PK, isoladamente ou em combinaçäo, é atribuída uma probabilidade de que, se tomada oa caso de um "pool" de soros de mulheres normais e portadoras, provenha de uma portadora. A CK e a PK, cada uma isoladamente, mostraram eficiências de detecçäo de 73 e 37% respectivamente. Quando as duas enzimas foram usadas em combinaçäo a eficácia foi também de 73%, mostrando, assim, que o uso combinado da CK com a PK näo melhora a detecçäo quando comparado com o uso da CK isoladamente. Quando os dois testes aplicados a 28 mäes de casos isolados, 13 foram detectadas pela CK isoladamente e foram as mesmas 13 mulheres detectadas pela combinaçäo da CK com a PK. A PK isoladamente detectou 4 mäes de casos isolados, das quais duas apenas foram detectadas pelo uso combinado da CK com a PK

Detection rates for Duchenne muscular dystrophy gene cariers using logistic discrimination: creatine-kinase and hemopexin

Foram determinados os níveis de creatino-cinase (CK) e de hemopexina ( H) em 117 amostras de soro: 59 de portadoras certas do gene da distrofia muscular Duchenne (DMD) e 58 de 30 mulheres adultas normais. Nosso objetivo foi determinar a eficácia de cada proteína isoladamente e das duas em combinaçäo na identificaçäo de portadoras do gene da DMD. Considerando as características de nossas duas amostras de mulheres quanto às medidas de CK e de YH, escolhemos o modelo logístico de análise discriminante como o mais adequado. A CK e a H, cada uma isoladamente, apresentaron 82 e 59%, respectivamente, de eficácia na detecçäo de heterozigotas para o gene da DMD, isto é houve 18 e 41% de erros de classificaçäo na identificaçäo de portadoras certas do gene da DMD quando estas duas proteínas foram consideradas separadamente. A combinaçäo da CK com a H mostrou uma eficácia de 88%, isto é, os erros de classificaçäo no grupo de heterozigotas para o gene da DMD foram reduzidos de 18 para 12%, mas esta diferença näo se mostrou estadisticamente significativa. Assim, a combinaçäo da CK com a H näo melhorou a detecçäo quando comparada com o uso da CK isoladamente