ABSTRACT
Background & objectives: Insulin regulated aminopeptidase (IRAP) has been related to certain pathologies such as breast cancer, Alzheimer´s disease and septic shock. IRAP is encoded by the leucyl/cystinyl aminopeptidase (LNPEP) gene. The genetic variation in the LNPEP gene has been analyzed in relation with the mortality and vasopressin clearance in septic shock. The LNPEP rs4869317 SNP (single nucleotide polymorphism) was the most significantly associated SNP with vasopressinase activity, being TT genotype associated with increased mortality. The objective of the present study was to develop a simple method to allow a quick and affordable genotyping for the rs4869317 SNP of LNPEP gene. Methods: Blood DNA samples were obtained from randomly selected healthy volunteers (n=28). A pair of primers was designed to amplify an 834 bp region of the LNPEP gene containing the rs4869317 SNP. The two alleles (T or A) were detected by digestion of the PCR products with the PacI restriction endonuclease. This enzyme only cuts the PCR products when the adenine is present in the SNP. Results: All individuals showed RFPL (restriction fragment length polymorphism) fragments for the expected genotypes (TT, TA or AA). The methodology was validated by sequencing of the amplified DNAs from several ‘T/T’ and ‘A/A’ homozygotes and ‘T/A’ heterozygotes. The results from both methods showed agreement. Interpretation & conclusions: The PCR-RFLP is a simple and reliable method that allows a quick genotyping for the rs4869317 SNP of LNPEP gene. The study of this polymorphism could be useful in future investigations to analyze the role of genetic variants of IRAP in several physiological/pathological conditions.
ABSTRACT
Objetivo. Las dietas elevadas en grasa están asociada con el desarrollo de enfermedades cerebrovasculares de distinto tipo. Distintos estudios epidemiológicos ha demostrado que la población de los países mediterráneos tienen menor porcentaje de enfermedades cerebro vasculares que la población del norte de Europa o de Estados Unidos de Norteamérica. En los países mediterráneos, la dieta habitual contiene una gran proporción de ácidos grasos monoinsaturados, mientras que en los países mas industrializados, el componente graso está constituido principalmente por grasas saturadas. Las aminopeptidasas (AP) son especialmente importantes por que están implicadas en el metabolismo y regulación de hormonas circulantes y péptidos biológicamente activos de numerosos tejidos. Algunas aminopeptidasas están relacionadas con el metabolismo de las angiotensinas en el sistema renina-angiotensina (RAS), y por tanto participan en la regulación de la presión sanguínea, tanto a nivel sistémico como local. El sistema nervioso es, probablemente, uno de los órganos mas sensibles a las alteraciones de la presión arterial. El presente trabajo se ha diseñado para estudiar el comportamiento de la actividad angiotensinasa en astrocitos de corteza frontal de rata, cultivados en presencia de distintas concentraciones de ácido oleico en el medio de cultivo. Material y métodos. La actividad angiotensinasa (aspartato-glutamato-aminopeptidasa) se analizó en cultivos primarios de astrocitos de rata, utilizando b -naftilamidas como sustratos. Resultados y conclusiones. Las disminuciones observadas en la actividad aminopeptidasa ponen de manifiesto la posible influencia del ácido oleico sobre algunos de los factores implicados en la regulación del flujo sanguíneo local o la homeostasis de líquidos y electrólitos locales en el sistema nervioso. Se discute que esta acción puede ser debida a la modificación de los procesos de comunicación intercelular mediados por uniones de tipo GAP o bien, a la modulación de los sistemas de comunicación intracelular mediados por el fosfatidilinositol y posterior activación de la proteinkinasa C, entre otros