Esferocitosis hereditaria: experiencia clínica y diagnóstica en Argentina / Hereditary spherocytosis: clinical and diagnostic experience in Argentina / Esferocitose hereditária: experiência clínica e diagnóstica na Argentina

Los objetivos del presente estudio fueron: a) Analizar las características demográficas y clínicas de nuestra población al diagnóstico; b) Evaluar si las pruebas más recientes presentan ventajas sobre las tradicionales; c) Confirmar la frecuencia de las distintas deficiencias de proteínas de membrana; d) Establecer la relación entre severidad y resultado de las pruebas o tipo de deficiencia. Se analizaron 359 individuos estudiados desde 2007, cuando se incorporaron criohemólisis hipertónica (CH), citometría de flujo con eosina-5'- maleimida (5'EMA-CF), FOE por citometría de flujo (FOE-CF) y electroforesis de proteínas de membrana (SDS-PAGE) al estudio de laboratorio clásico, fragilidad osmótica eritrocitaria (FOE) y autohemólisis (AH). Criterios diagnósticos para Esferocitosis Hereditaria (ESH): esferocitos en frotis y dos pruebas positivas. Se identificaron 174 pacientes con ESH y 22 portadores sanos. El 74,9% eran menores de 12 años. La transmisión fue dominante en el 83,1% de los casos. Tuvieron manifestaciones neonatales 89,1%. Las pruebas con mayor sensibilidad fueron CH (92,0%), FOE diferida (91,1%) y 5'EMA-CF (88,5%). En los 125 pacientes en quienes se realizaron CH, 5'EMA-CF y FOE-CF se observó que todos tenían al menos una prueba positiva; 122 (97,6%) tuvieron dos o tres positivas. Las deficiencias más frecuentes fueron ankirina y espectrina. No hubo diferencia en el resultado de las pruebas entre los subgrupos de severidad. Se concluye que las deficiencias más frecuentes en Argentina son ankirina y espectrina, coincidiendo con otras poblaciones latinoamericanas. El uso simultáneo de CH, 5'EMA-CF y FOE-CF permite diagnosticar más del 97% de los casos. La incidencia de manifestaciones neonatales es elevada.

The aims of this study were (a) to assess demographic and clinical aspects of our population at diagnosis; (b) to evaluate diagnostic accuracy of hypertonic cryohemolysis (HC), eosin-5'-maleimide flow cytometry (EMA-FC) and flow cytometric osmotic fragility (OF-FC) in relation to standard screening tests osmotic fragility (OF) and autohemolysis (AH); (c) to confirm the previously reported prevalence of membrane proteins defects; and (d) to assess the relationship between severity of anemia and results of confirmatory tests. Since 2007, the following tests were available in our laboratory: OF, AH, HC, EMA-FC, OF-FC and SDS-PAGE of membrane proteins. Diagnostic criteria for hereditary spherocytosis were spherocytes in blood smear plus ≥2 positive tests. Data from 359 individuals were analyzed: 174 HS patients and 22 silent carriers were detected; 74.9% of patients were less than 12 years old; 83.1% of them showed a dominant inheritance pattern; antecedent of neonatal jaundice/anemia was registered in 89.1%. Tests with higher sensitivity were: HC (92.0%), incubated OF (91.1%), and EMA-FC (88.5%). HC, EMA-FC and OF-FC were simultaneously performed on 125 patients: each of them had at least 1 positive test; 122 (97.6%) had 2 or 3 positive tests. Ankyrin and spectrin were the most frequently found protein deficiencies. Comparison of test results in relation to severity of anemia showed no difference between groups. It can be concluded that compared toother Latin American countries, ankyrin and spectrin were the most frequent protein deficiencies. Simultaneous performing of HC, EMA-FC and OF-FC enabled diagnosing HS in more than 97% of patients. A high incidence of neonatal jaundice/anemia was observed.

Os objetivos do presente estudo foram: a) analisar as características demográficas e clínicas de nossa população ao diagnóstico; b) Avaliar se as provas mais recentes apresentam vantagens sobre as tradicionais; c) Confirmar a frequência das diversas deficiências de proteínas de membrana; d) Establecer a relação entre severidade e resultado das provas ou tipo de deficiência. Foram analisados 359 indivíduos estudados desde 2007, quando se incorporaram crio-hemólise hipertônica (CH), citometria de fluxo com eosina-5'-maleimida (5'EMA-CF), FOE por citometria de fluxo (FOE-CF) e eletroforese de proteínas de membrana (SDS-PAGE) ao estudo de laboratório clássico - fragilidade osmótica eritrocitária (FOE) e auto-hemólise (AH). Critérios diagnósticos para ESH: esferócitos em esfregaço e duas provas positivas. Foram identificados 174 pacientes com ESH e 22 portadores sadios. 74,9% eram menores de 12 anos. A transmissão foi dominante em 83,1%. Tiveram manifestações neonatais 89,1%. As provas com maior sensibilidade foram CH (92,0%), FOE diferida (91,1%) e 5'EMA-CF (88,5%). Nos 125 pacientes aos quais lhes realizaram CH, 5'EMA-CF e FOE-CF se observou que todos tinham no mínimo uma prova positiva; 122 (97,6%) tiveram duas ou três positivas. As deficiências mais frequentes foram anquirina e espectrina. Não houve diferença no resultado das provas entre os subgrupos de severidade. Conclui-se que as deficiências mais frequentes na Argentina são anquirina e espectrina, as quais coincidem com outras populações latinoamericanas. O uso simultâneo de CH, 5'EMA-CF e FOE-CF permite diagnosticar mais de 97% dos casos. A incidência de manifestações neonatais é elevada.

Esferocitosis hereditaria: Revisión. Parte I. Historia, demografía, etiopatogenia y diagnóstico / Hereditary spherocytosis. Review. Part I. History, demographics, pathogenesis, and diagnosis

La esferocitosis hereditaria es la anemia hereditaria más frecuente en nuestro país luego de la talasemia menor. En este artículo, se revisan aspectos históricos, demográficos, genéticos y etiopatogénicos de la enfermedad, y se describen las pruebas de laboratorio para su diagnóstico. Se remarca el comportamiento de la enfermedad en nuestra población y se detallan las deficiencias proteicas predominantes en nuestro país. Se enfatiza sobre las nuevas técnicas de laboratorio actualmente disponibles, con alta sensibilidad y especificidad, que permiten realizar un diagnóstico más temprano con volúmenes de muestra mucho menores que los necesarios para las pruebas convencionales.

Hereditary spherocytosis is the most frequent hereditary anemia excluding beta thalassemia in Argentina. Historical, demographic, genetic and pathogenic aspects of the disease are reviewed, and confirmatory laboratory tests are described. Special characteristics on the outcome of the disease in our population and prevalent protein deficiencies in our country are described. Emphasis is given on new available laboratory tests, which allow an earlier diagnosis using volume of blood samples significantly smaller than required for conventional tests.

Neutropenia inmune - aloinmune neonatal IgG serica reactiva y fenotipo especifico de los neutrofilos evaluados por citometria de flujo / Autoimmune-alloimmune neonatal neutropenia. Serum reactive IgG and neutrophil-specific

La neutropenia inmune se diagnostica por la presencia de auto o aloanticuerpos reactivos con losneutrófilos. La neutropenia aloinmune neonatal es consecuencia de la sensibilización materna alos antígenos específicos de los neutrófilos paternos que afectan al neonato al atravesar la barrera placentaria. Se presentan 4 casos de niños, 2 de ellos hermanos consanguíneos con doble vínculo. Se estudiaron los sueros de los pacientes y sus padres. Por citometría de flujo se establecen los valores de referencia de la IgG sérica reactiva con los neutrófilos en voluntarios sanos, para 3 diluciones (1/2, 1/5 y 1/20) en reacción autóloga(suero y células de un mismo individuo) y heteróloga (suero y células de diferentes individuos). Los resultadosse expresan por un índice definido como el cociente entre la mediana de la intensidad de fluorescencia media del suero incógnita y la de un suero utilizado como referencia. Por leucoaglutinación se evaluó la dilucióndel suero 1/20. Se determinó el nivel de complejos inmunes circulantes. Se determinó el fenotipo, para los epitopes HNA-1a, HNA-1b y HNA-2a. En los 4 niños se encontró IgG reactiva y/o factores aglutinantes; 2/3 sueros maternos fueron reactivos con los neutrófilos del cónyuge y de los hijos. Los complejos inmunes circulantes fueron positivos en 2/4 sueros negativos en 3/3 sueros maternos. Se encontró incompatibilidad materno-infantil en los 4 casos. Las 3 madres tenían igual fenotipo: homocigotos NA1/NA1, NB1+. En síntesis, se presenta el hallazgo de 4 casos con neutropenia inmune: 3/4 auto-inmune, 1/3 se asocia a complejos inmunes circulantes y 1/4 con neutropenia neonatal aloinmune

Auto or alloantibodies reactive with neutrophils define immune neutropenia. Alloimmune neonatal neutropenia is caused by maternal sensitization to paternal neutrophil antigens, resulting in IgG antibodies that are transferred to the fetus through the placenta. We present the studies in 4 children from 3 families with neutropenia of unknown origin (two of them were brothers). Theywere evaluated by flow cytometry in parallel with leukoagglutination. Reference values were established forserum reactive IgG in healthy volunteers for three dilutions (1/2, 1/5 and 1/20), both for the autologous reaction (serum and cells of the same individual) and for the heterologous reaction (serum and cells of differentindividuals). Results were expressed by an index defined by the quotient of the mean fluorescence intensityof the patient’s serum divided by that of the reference serum. Serum reactive/agglutinant factors and circulating immune complexes were evaluated in patients and parents serum. Neutrophil specific phenotypes weredetermined for HNA-1a, HNA-1b and HNA-2a. Reactive IgG/agglutinant factors were found in 4 children. Twomaternal sera were reactive against paternal and/or children neutrophils. Circulating immune complexes weredetected in 2/4 children sera and were negative in 3/3 maternal sera. Maternal/children incompatibility wasdetected in the four cases. The three mothers had the same phenotype: homozygous NA1/NA1, NB1+

Niveles inadecuadamente Bajos de eritropoyetina sérica en niños con insuficiencia renal aguda secundaria a síndrome urémico-hemolítico endémico / Erythroprotein deficiency in children with acute renal insufficiency due to hemolytic uremic syndrome

Realizamos dosaje de eritropoyetina (EPO) sérica en niños con Síndrome Urémico-Hemolítico (SUH) para evaluar si sus niveles son adecuados. Se incluyeron diez pacientes que no había sido aún transferidos, realizando al ingreso y a los 7, 14, 21, 28 y 60 días de evolución, los siguientes controles: hemogramas, reticulocitos, plaquetas, dosaje de EPO sérica, ferritina, ferremia, capacidad total y porcentaje de saturación de transferrina, ionograma, estado ácido base, urea y creatinina. El análisis de los valores fue determinado, para cada paciente, en las muestras de sangre correspondientes a tres etapas diferenciadas. A) Previo a la primera transfusión; B) Luego de la misma, y mientras persistiera el fallo renal (creatinina > 0,7 mg/dl); C) Fase de recuperación. Presentaron oligoanuria ocho pacientes, y seis necesitaron diálisis. Todos requirieron transfusiones: siete al ingreso, y los restantes a las 24 hs, 6 y 10 días de internación, respectivamente; seis niños necesitaron transfusiones adicionales posteriormente; el promedio total fue de 1,8 +- 0,8 (1-3) por niño. El valor del cociente O/P (logaritmo de EPO observada/logaritmo de EPO previsto) al ingreso fue bajo (0,70 +- 0,08), disminuyó aún más en la etapa B (0,57 +- 0,03) y se elevó posteriormente, pero sin alcanzar valores normales (0,78 +-0,07); los valores del índice de Producción Reticulocitaria (recuento reticulocitario corregido/tiempo de maduración)siguieron un curso paralelo (0,74 +- 0,14, 0,54 +- 0,11 y 0,60 +- 0,10 respectivamente). La correlación entre valores absolutos de EPO y hematocrito mostró un comportamiento opuesto al normal, mostrando valores positivos en las tres etapas (r: 0,53, 0,36 y 0,12, respectivamente). Al comparar los resultados observados con los esperados de EPO (en términos de LogEpo), 9 de las 11 (81,8 porciento) muestras pretransfusionales presentaron valores inferiores a los esperados; en la segunda etapa todas las muestras estuvieron por debajo de los normal; en fase de recuperación, la mayoría (77,8 porciento) siguió mostrando valores bajos. En conclusión, hemos demostrado una síntesis inadecuada de EPO en niños con SUH, no comunicada previamente, que podría jugar un papel fisiopatogénico de importancia al agravar la severidad de la anemia hemolítica existente; esta síntesis inadecuada se intensifica al sumarse el efecto inhibitorio secundario a las repetidas transfusiones recibidas. La potencial utilización terapéutica de EPO recombinante en estos niños ...