Acción biorreológica de extractos de Ascaris lumbricoides en eritrocitos humanos / Biorheological activity of Ascaris lumbricoides extracts in human erythrocytes

Experiencias previas han reportado que los extractos de A. lumbricoides captan ácido siálico del eritrocito humano modificando su carga. El objetivo fue evaluar in vitro las posibles alteraciones biorreológicas debidas al efecto de extractos del parásito adulto. Se analizó la acción de 8 extractos sobre eritrocitos Grupo O, incubando el sedimento globular con igual volumen de extracto y con PBS. Se determinó la distribución y morfología de los agregados (Análisis Digital de Imágenes), carga porcentual (método Azul de Alcian), cinética de agregación (eritroagregámetro) y viscoelasticidad (eritrodefórmetro). Los resultados mostraron que todos los extractos causaron una disminución del porcentaje de células aisladas y un aumento en el tamaño de los agregados, sin alterar su morfología. Los glóbulos tratados con 6 extractos mediaron una significativa alteración de la carga superficial y con 5 de ellos la velocidad de agregación fue menor que en el control. Se observó una correlación lineal entre los parámetros de cinética y la concentración proteica de los extractos. Uno de los tratamientos modificó la fluidez de membrana y dos disminuyeron la deformabilidad eritrocitaria, pero ninguno afectó la elasticidad. Estas experiencias in vitro permiten concluir que el contacto de los extractos con los eritrocitos produce alteraciones hemorreológicas.

Previous studies have reported that A. lumbricoides extracts capture sialic acid from human erythrocytes, modifying their charge. The purpose was to evaluate in vitro the possible biorheological alterations due to the effect of extracts from adult parasites. The activity of 8 extracts over Group O erythrocytes was analyzed incubating the globular sediment with an equal volume of extract and with PBS. The distribution and morphology of the aggregates was determined (Digital Image Analysis), percent of charge (Alcian Blue method), aggregation kinetics (erythroaggregameter), and visco-elasticity (erythroderformeter). The results showed that all the extracts produce a decrease of the percentage of isolated cells and an increase of the size of aggregates, without altering their morphology. Red cells treated with 6 extracts mediated a significant alteration of their superficial charge and with 5 of them the aggregation velocity was less than that of the control. A lineal correlation between the kinetic parameters and the protein concentration of the extracts occurred. One of the treatments modified the fluidity of the membrane and two decreased erythrocyte deformability, but none of them affected elasticity. These in vitro experiences allowed concluding that contact of the extracts with the erythrocytes produces hemorheological alterations.

Técnica de cuantificación de la agregación eritrocitaria por análisis digital de imágenes / Erythrocyte aggregation quantification technique using digital image analysis / Técnica de quantificagáo do agregado eritrocitário por análise digital de imagens

La caracterización de agregados eritrocitarios es importante para analizar las posibles alteraciones en la microcirculación observadas en ciertas patologías vasculares como la hipertensión y la diabetes. El objetivo de este trabajo fue estandarizar una técnica que pueda ser utilizada por cualquier operador con un equipamiento similar. Para ello se prepararon distintas suspensiones de glóbulos rojos de dadores sanos en plasma autólogo, que fueron observadas con un microscopio óptico invertido. Se registraron para su análisis las imágenes de los agregados con una cámara digital. Se realizaron los recuentos de células individuales, agregados de 2 a 4 células, agregados de 5 ó más células y amas (redes de agregados de gran tamaño). Se midió el perímetro y el área, obteniéndose un parámetro de forma (ASP) de cada agregado de 5 ó más células. Los resultados obtenidos permitieron estandarizar el protocolo de trabajo concluyendo que la dilución óptima de glóbulos rojos en plasma autólogo para esta técnica es 0,5%.

Characterization of erythrocyte aggregates is important in the analysis of the possible alterations observed in the microcirculation of certain vascular pathologies such as hypertension and diabetes. The objective of this work was to standardize a technique that can be used by any operator having similar equipment. For that purpose, different suspensions of red blood cells from healthy donors were prepared in autologous plasma and then observed with an inverted light microscope. The images of the aggregates were recorded with a digital camera in order to be later analyzed. Individual cell count was carried out, as well as 2 to 4 cell- aggregates, 5 or more cell- aggregate and amas (big aggregate networks). Measurement of perimeter and area of each of the aggregates made up of 5 or more cells was performed, getting a shape parameter (ASP). Due to the results obtained, this working protocol has been standardized and it can be concluded that the optimal dilution of red blood cells in autologous plasma is 0.5% for this particular technique.

A caracterizagáo de agregados eritrocitários é importante para analisar as possíveis alteragóes na microcirculagáo observadas em certas patologias vasculares como a hipertensáo e a diabetes. O objetivo deste trabalho foi padronizar uma técnica que possa ser utilizada por qualquer operador com um equipamento similar. Para isso foram preparadas diversas suspensóes de glóbulos vermelhos de doadores saudáveis em plasma autólogo, que foram observadas com um microscópio óptico invertido. Foram registradas para a sua análise as imagens dos agregados com uma camera digital. Realizaramse as recontagens de células individuais, agregados de 2 a 4 células, agregados de 5 ou mais células e amas (redes de agregados de grande tamanho). Foi medido o perímetro e a área, obtendo um parametro de forma (ASP) de cada agregado de 5 ou mais células. Os resultados obtidos permitiram padronizar o protocolo de trabalho concluindo que a diluigáo ótima de glóbulos vermelhos em plasma autólogo para esta técnica é de 0,5%.

Viscoelasticidad compleja de los eritrocitos por difractometría láser / Complex viscoelasticity of erythrocyte by laser difractometry

El objetivo de este estudio fue investigar las propiedades reológicas de los glóbulos rojos sometidos a tensiones pulsantes (reología completa), es decir, en condiciones más próximas a las fisiológicas. La reología compleja demostró su alta sensibilidad para detectar anormalidades estructurales en cuerpos viscoelásticos, tales como sangre o eritrocitos. En este trabajo, las propiedades viscoelásticas complejas eritrocitarias fueron evaluadas con un Erotrodefórmetro, construido en este laboratorio, el cual aplica el método difractométrico en suspensiones de glóbulos rojos cizalladas. Tensiones de corte sinusoidales de frecuencia y amplitud controladas, son aplicadas a la suspensión celular. La elongación de los eritrocitos sigue las variaciones de la tensión, pero con un desfasaje angular Ù que es función de la frecuencia y de las propiedades reológicas de las células. Las variaciones de elongación se reproducen en el patrón de difracción laser y son fotométricamente medidas, digitalizadas y almacenadas para su posterior procesamiento. El procesamiento numérico de los datos experimentales conduce a la evaluación de los parámetros viscoelásticos complejos (Ù, n', n", G', G"). Los resultados obtenidos demuestran que la ektacitometría es un excelente método para analizar la reología compleja eritrocitaria y puede ser aplicado con éxito en Hemorreología Clínica para detectar anormalidades celulares patológicas