Cuantificación de Apo B con empleo de anticuerpos monoclonales como indicador precoz de riesgo aterogénico / Quantitation of Apo B with the use of monoclonal antibodies as early indicator of atherogenic risk

Niveles elevados de apolipoproteína B (Apo B) en sangre, se correlacionan con un mayor riesgo al desarrollo de enfermedades cardiovasculares. En este trabajo se describe un método inmunoenzimático (ELISA) no competitivo tipo sandwich, que emplea como anticuerpo de recubrimiento el anticuerpo monoclonal IA/CB-LDL-1 y anticuerpos policlonales de carnero anti Apo B humana, purificados por afinidad y conjugados a enzimas marcadoras. Este sistema se desarrolló a escala microanalítica y ultramicroanalítica empleando en este último caso el equipo SUMA desarrollado en Cuba. La sensibilidad de ambas variantes permite detectar concentraciones de Apo B menores de 50 ng/ml. Los coeficientes de variación intra e interensayo fueron menores de 5 y 10 % respectivamente. Pacientes con infarto agudo del miocardio entre 45 y 80 años y con aterosclerosis periférica entre 60 y 80 años, mostraron niveles significativamente más altos de Apo B respecto a sujetos controles de igual rango de edad. La medición de la concentración de Apo B en muestras de suero de sangre de cordón umbilical realizada con el SUMA, permitió evidenciar valores marcadamente elevados en algunos recién nacidos. Tomando en consideración el nivel de automatización del SUMA, que posibilita analizar un gran número de muestras de manera confiable y bajo costo, se propone este método para estudios de screening primario de recién nacidos y adultos jóvenes, con el fin de identificar aquellos con riesgo de trastornos genéticos del metabolismo de las lipoproteínas que contienen Apo B, lo cual puede corroborarse posteriormente con técnicas más "sofisticadas" y costosas

Ensayo diagnóstico para TSH humana por ultramicroELISA empleando anticuerpos monoclonales / Diagnostic assay for human TSH by ultramicroELISA using monoclonal antibodies

La cuantificación de las concentraciones séricas de la hormona estimulante del tiroides (TSH) en neonatos tiene gran importancia diagnóstica en el hipotiroidismo primario congénito, enfermedad que, de no ser tratada precozmente, evoluciona con complicaciones de retraso mental. En Cuba existe desde 1987 un programa nacional de diagnóstico de esta entidad, que emplea como elemento tecnológico fundamental un sistema ultramicroELISA (UME), con dos anticuerpos policlonales, anti ß-TSH como anticuerpo de captura, y anti subunidad * conjugado con ß-galactosidasa, para el revelado de la reacción. La introducción de anticuerpos monoclonales (AcM) en estos procedimientos puede proporcionar ventajas adicionales, especialmente en lo que se refiere a especificidad y producción del reactivo. Nosotros hemos obtenido hibridomas secretores de AcM contra ß-TSH mediante la fusión del mieloma P3/x63.Ag8.653, con linfocitos esplénicos de ratones inmunizados con TSH. El AcM CB-TSH,1 (IgG1) se estudió a mayor profundidad como anticuerpo de captura en UME. Se demostró que este AcM puede sustituir efectivamente el anticuerpo policlonal de referencia; el UME, que combina el AcM en la fase sólida, y el anticuerpo policlonal para el revelado fue evaluado con muestras de pacientes, ofreciendo 100% de coincidencia diagnóstica con el UME policlonal y buenas repetibilidad y reproducibilidad