Expressão imuno-histoquímica das metaloproteinases 2 e 9 não está associada à progressão do carcinoma de células escamosas de esôfago / Metalloproteinases 2 and 9 immunohistochemistry expression is not associated to esophageal squamous cell carcinoma progression

INTRODUÇÃO: O carcinoma de células escamosas do esôfago está entre os tipos mais agressivos de câncer e de pior prognóstico. As metaloproteinases de matriz (MMPs), especialmente as MMP-2 e MMP-9, vêm sendo utilizadas para avaliação prognóstica do câncer, associadas a invasão, tamanho e crescimento tumoral. OBJETIVO: O presente estudo visa investigar as expressões imuno-histoquímicas de MMP-2 e MMP-9, avaliando se existe correlação entre sua expressão e o estadiamento tumoral, invasão vascular, invasão local (pT) e diferenciação tumoral no carcinoma de células escamosas de esôfago. MATERIAL E MÉTODO: Foi realizado um estudo retrospectivo utilizando 31 blocos de parafina contendo tumores de carcinoma escamoso esofágico, obtidas por esofagectomias realizadas entre 1998 e 2003, no Hospital Universitário de Santa Maria (HUSM). Os cortes histológicos foram submetidos à reação imuno-histoquímica, com sistema de amplificação por polímero não-biotinilado Novolink para detecção de MMP-2 e MMP-9. RESULTADOS: A avaliação da MMP-2 apresentou positividade fraca em apenas cinco casos, não demonstrando correlação com as variáveis estudadas. Também não foram observadas associações significativas entre as variáveis do estudo e o grau de expressão imuno-histoquímica da MMP-9. CONCLUSÃO: A expressão imuno-histoquímica das MMP-2 e MMP-9 não parece ser influenciada pelos parâmetros investigados. Nesse sentido, estudos adicionais são necessários para melhor compreensão de sua associação aos fatores prognósticos do carcinoma de células escamosas de esôfago.

INTRODUCTION: Esophageal squamous cell carcinoma is an aggressive malignant neoplasia with poor prognosis. The expression of matrix metalloproteinases (MMPs), mainly 2 and 9, has been used for the prognostic evaluation of cancer in association with tumor invasion, size and tumoral growth analysis. OBJECTIVE: The aim of the present study was to investigate the immunohistochemical expression of MMP-2 and MMP-9 and evaluate if there is an association between their expression and tumor staging, vascular invasion, local invasion (pT) and tumoral differentiation in esophageal squamous cell carcinoma. MATERIAL AND METHODS: We conducted a retrospective study using 31 paraffin-embedded specimens of esophageal squamous cell carcinoma obtained by esophagectomies performed at Santa Maria University Hospital, Rio Grande do Sul State, Brazil between 1998 and 2003. The histological sections were immunohistochemically studied using a non-biotinylated Novolink system for MMP-2 and MMP-9 detection. RESULTS: MMP-2 immunohistochemical expression was detected only in 5 cases and did not demonstrate correlation with the variables analyzed. Furthermore, MMP-9 immunohistochemical expression was not significantly associated with the other variables. CONCLUSION: MMP-2 and MMP-9 immunohistochemical expression does not seem to be influenced by the variables reported in this study. Thus further investigations are required to a better understanding of their association with the prognostic factors of esophageal squamous cell carcinoma.

Expressão de p53, p16 E COX-2 em carcinoma escamoso de esôfago e associação histopatológica / p53, p16 E COX-2 expression in esophageal squamous cell carcinoma and histopathological association

RACIONAL: O câncer de esôfago representa cerca de 2 por cento dos tumores malignos e a terceira causa mais comum de câncer do trato gastrointestinal. A associação do prognóstico do câncer de esôfago com alguns marcadores imunoistoquímicos, como as proteínas p53, p16 e a ciclooxigenase 2 (COX-2) tem sido relatada. A detecção de marcadores moleculares através de imunoistoquímica pode ser utilizada para avaliação prognóstica. OBJETIVOS: Investigar a associação entre a expressão das proteínas p53, p16 e a COX-2 com o estádio do carcinoma escamoso de esôfago. MÉTODOS: Foram analisadas 31 amostras de ressecção cirúrgica por esofagectomia diagnosticadas como carcinoma de células escamosas de esôfago e 31 amostras não-tumorais referentes a cada caso. Realizou-se a revisão histopatológica e o estádio pTNM. Amostras tumorais e não-tumorais adjacentes foram submetidas a análise imunoistoquímica para avaliar o conteúdo das proteínas p53, p16 e COX-2. Foi considerada positiva a expressão nuclear para p53 em quantidade igual ou superior a 10,00 por cento das células e presença da expressão citoplasmática de acordo com três escores (1, 2, 3) de intensidade (leve, moderada, acentuada) de imunocoloração para COX-2. RESULTADOS: Em área tumoral, as análises revelaram 48,38 por cento de positividade para p53, 16,12 por cento de positividade para p16, e 100,00 por cento de positividade escores 1+, 2+ ou 3+ para COX-2. No entanto, quando se avaliou possível relação da expressão destes marcadores com o estádio, apenas a COX-2, escore 3+ intensidade acentuada mostraram associação significativa. CONCLUSÃO: O presente estudo demonstrou que existe relação positiva entre a expressão de COX-2, escore 3+ e estádio mais avançado no carcinoma de esôfago.

BACKGROUND: The esophageal carcinoma represents about 2 percent of malignant tumors and is the third most common cause of gastrointestinal cancer. The correlation between immunohistochemistry markers, such as p53, p16 and COX-2 proteins and cancer esophageal prognosis has been suggested. AIMS: To Investigate whether the expression of p53, p16 and COX-2 proteins are associated to tumor staging. METHODS: For this purpose we proceeded immunohistochemistry assays and TMN in 31 esophageal tumor and normal tissue samples. The p53 nuclear expression was considered positive when it appears in 10.00 percent or more cells. COX-2 expression was scored according to intensity in three scores (1+, 2+, 3+). RESULTS: On the tumor samples the results presented 48.38 percent positivity for p53, 16.12 percent for p16 and 100 percent with 1+, 2+ or 3+ scores for COX-2. However, when we investigated whether the expression of p53, p16 and COX-2 proteins are related to tumor staging, only COX-2 expression, score 3+, had shown statistical significant association. CONCLUSION: Therefore, in the present study we could see positive correlation between COX-2 protein and high grade tumor as well as advanced tumor staging in esophageal carcinoma.

Expressão das metaloproteinases 2 e 9 em adenocarcinoma colorretal / Metaloproteinases 2 and 9 expression in colorectal adenocarcinoma

Introdução: Os carcinomas da região colorretal representam o terceiro tipo mais comum de neoplasia maligna e a terceira causa de mortalidade relacionada ao câncer no mundo. Objetivos: Este estudo teve como objetivo verificar se existe associação entre estadiamento, invasão vascular, tamanho do tumor, classificações Duke's, Astler-Coller, grau de diferenciação tumoral e expressão das metaloproteinases 2 e 9 em células de adenocarcinoma intestinal. Métodos: Foi realizado um estudo retrospectivo de 40 blocos de parafina contendo amostras obtidas de ressecção cirúrgica de tecido intestinal anteriormente diagnosticado como adenocarcinoma de intestino humano. O material foi coletado no período entre 1998 e 2003 no Hospital Universitário de Santa Maria, RS, Brasil. Como controle, foram utilizadas amostras fígado humano para MMP-9 e células deciduais normais para MMP2. Foi realizada a técnica de imunohistoquímica e sistema de amplifica- ção por polímero não biotinilado Novolink (Novocastra, New Castle Upon Tyne, Inglaterra) para avaliar as metaloproteinases 2 e 9, por percentual de células neoplásicas coradas, semi-quantitativamente, considerando-se expressão citoplasmática. Resultados: Realizada análise estatística através do teste exato de Fisher, com nível de significância de 0,05, os testes não evidenciaram associação significativa para nenhuma das aplicações feitas. Conclusões: Os achados sugerem que não existe associação entre a expressão das metaloproteinases 2 e 9 com as variáveis deste estudo, sendo necessário estudos futuros (AU)

Introduction: Colorectal carcinomas are the third most common type of malignant neoplasia and the third leading cancer-related cause of death worldwide. Aims: This study aimed at determining if there is an association between staging, vascular invasion, tumor size, Duke and Astler-Coller classifications, tumor differentiation grade, and metalloproteinase 2 and 9 in intestinal adenocarcinoma. Methods: A retrospective study was carried out of 40 paraffin blocks containing samples from surgical resections of intestinal tissue previously diagnosed as colon adenocarcinoma. The material was collected from 1998 to 2003 in the School Hospital of Santa Maria, RS, Brazil. Human liver extracts for MMP9 and normal decidual cells for MMP2 were used as controls. Immunohistochemistry and non-tinylated polymer amplification system Novolink (Novocastra, New Castle Upon Tyne, England) were performed to evaluate metalloproteinases 2 and 9 by percentage of stained cytoplasmic neoplastic cells, semi-quantitatively, and considering the cytoplasmic expression. Results: In the statistical analysis, the Fisher's exact test was used with a level of significance of 0.05, which did not show any significant association for any of the applications done. Conclusions: The findings show that there is no association of metalloproteinases 2 and 9 expression with the variables studied here (AU)

Expressão das proteínas p53 e Cox-2 em adenocarcinoma intestinal e mucosa adjacente / Expression of p53 and Cox-2 proteins in intestinal adenocarcinoma and adjacent mucosa

Este estudo teve como objetivo verificar se existe associação entre o estadiamento do tumor e a expressão das proteínas p53 e Ciclooxigenase-2 (Cox-2) em adenocarcinoma de intestino. Foi realizado um estudo retrospectivo de 40 blocos de parafina contendo amostras obtidas de ressecção cirúrgica de tecido intestinal anteriormente diagnosticado como adenocarcinoma de intestino humano. O material foi coletado no período entre 1998 e 2003 no Hospital Universitário de Santa Maria, RS, Brasil. Como controle, foram utilizadas amostras de áreas não tumorais de mucosa adjacente, referentes a cada caso (n = 40). Utilizamos a imuno-histoquímica para analisar este material quanto à expressão das proteínas p53 e Cox-2. A expressão das proteínas p53 e Cox-2 foi significativamente maior em tecido tumoral quando comparada com mucosa adjacente. Detectamos positividade total para Cox-2 (100 por cento), e parcial (70 por cento) para p53 em tecido tumoral. Foi verificada associação significativa entre expressão da proteína p53 e estadiamento segundo Astler-Coller, mas não com a classificação TNM. Quanto à proteína Cox-2, não foi observada associação significativa com estadiamento do tumor de intestino. Os achados sugerem que existe uma tendência entre a expressão da proteína p53 e Cox-2 com o estadiamento do tumor, sendo necessária comprovação com estudos futuros.

The objective of this study is to establish a possible association between staging and the expression of p53 and cyclooxygenase-2 (Cox-2) proteins in intestinal adenocarcinoma. A retrospective study of 40 embedded paraffins with surgical specimens of intestinal Adenocarcinoma was performed. The samples were collected during 1998 and 2003 at Hospital Universitário de Santa Maria, RS, Brasil. Samples of non-tumoral tissues (n = 40) were used as a negative control. The expression of p53 and Cox-2 was immunohistochemically studied. The expression of p53 and Cox-2 proteins was significantly higher in the tumor material when compared to the normal adjacent mucosa. Cox-2 expression was found in 100 percent of tumoral cases, while p53 expression was noted in 70 percent of tumor blocks. There is significantly association between the expression of p53 protein and Astler-Coller staging, but no with TNM-stage. There was no significant correlation between Cox-2 expression and intestinal adenocarcinoma staging. Our findings suggest that the expression of p53 and Cox-2 proteins could have association with Astler-Coller staging.

Morte celular por apoptose / Apoptosis: programmed cell death

Apoptose, ou morte celular programada, é um processo essencial para a manutenção do desenvolvimento dos seresvivos, sendo importante para eliminar células supérfluas ou defeituosas. Durante a apoptose, a célula sofre alterações morfológicas características desse tipo de morte celular. Tais alterações incluem a retração da célula, perda de aderência com a matriz extracelular e células vizinhas, condensação da cromatina, fragmentação internucleossômicado DNA e formação dos corpos apoptóticos. Muitas são as moléculas envolvidas no controle das vias de ativaçãoda apoptose, dentre estas, as proteínas antiapoptóticas e pró-apoptóticas, além das caspases. Esse fenômeno biológico,além de desempenhar um papel importante no controle de diversos processos vitais, está associado a inúmeras doenças, como o câncer. A compreensão dos mecanismos apoptóticos permitiu o desenvolvimento de novas estratégias no tratamento do câncer. Tais estratégias são embasadas na indução da morte nas células tumorais e em uma maior resposta aos tratamentos com radiação e agentes citotóxicos.

Análise da expressão do EGFR em glioblastoma multiforme / Expression of the EGFR in patients with glioblastoma multiform

Introdução: O receptor do fator de crescimento epidermal (EGFR) é um oncogene que está freqüentemente hiperexpresso em células de glioblastoma multiforme (GM), sugerindo que este receptor possa estar envolvido na progressão maligna destes tumores. Existem evidências de que a determinação da expressão do EGFR possa servir como marcador de comportamento biológico em pacientes com gliomas de alto grau de malignidade. O presente relato representa uma análise preliminar de amostras de tumor de dois pacientes com GM, com o objetivo de demonstrar a factibilidade da determinação da expressão do EGFR em nosso meio. Pacientes, métodos e resultados: Relato de dois casos de pacientes com GM submetidos a biópsia para coleta de tecido; os pacientes foram submetidos a tratamento seguindo protocolo terapêutico para esta neoplasia. Para determinação da expressão de EGFR foi feito extração de RNA total do tecido de biópsia, pela técnica de RT-PCR semiquantitativo. Um paciente apresentou hiperexpressão do gene e o outro foi considerado dentro dos limites da normalidade. Discussão: Embora a análise isolada de apenas dois casos não nos permita fazer correlação entre a taxa de expressão do gene do EGFR e o prognóstico, os achados descritos neste relato permitem concluir que é factível no nosso meio determinar a expressão do EGFR em amostras de neoplasias malignas do SNC e nos encoraja à continuidade de investigações em um maior número de pacientes com a finalidade de avaliar o papel da expressão do EGFR como marcador prognóstico nesses pacientes.

Introduction: The epidermal growth factor receptor (EGFR) is an oncogene that isfrequently overexpressed in patients with GM, suggesting that this receptor may play arole in the aggressive biologic behaviour of these tumors. There are suggestions that thedetermination of expression of EGFR may serve as a prognostic marker in patients withhigh grade gliomas.Patients, methods and results: The authors report 2 patients with GM and the resultsof the expression of EGFR. Following biopsy the patients were treated according to atherapeutic protocol for this tumor. Expression of EGFR was determined in RNA samplesusing RT-PCR methodology. One patient showed overexpression of EGFR and the othershowed normal level of expression.Discussion: Although the determination of expression of EGFR in only two patientsdoes not allow to assess the prognostic implication of this marker, it does show that theuse of this method in feasible in biopsy specimens of SNC tumors. The results of this studyencourage us to collect samples from future patients with high grade gliomas to furtherunderstand its role as a biologic marker of tumor progression.

Effects of irinotecan/5-fluorouracil combination on thymidylate synthase and cell cycle in human colon carcinoma cell line

Thymidylate synthase (TS) is responsible for the de novo synthesis of thymidylate,which is required for DNA synthesis and repair TS and is an important target for 5-fluorouracil (5-FU). In this study we investigated whether the greater cytotoxicity of irinotecan (CPT-11) followed by 5-FU in HT-29 and SNU-C4 cell lines was related to TSmRNA expression or activity. Thus, cells were exposed for 24 h to each drug, alone or in combination, and assessed for colony formation, TS catalytic activity, TS-mRNA expression and cell cycle distribution. Pre-treatment with CPT-11 at IC20 increased the 5-FU cytotoxicity in HT-29 and SNU-C4 cells. TS catalytic activity and TS-mRNA expression suggested that the differences in sensitivity to 5-FU among the cell lines were not correlated to TS profile. When we exposed cells to CPT-11 at IC20 and subsequently to 5-FU at IC50, the impact on TS activity and mRNA expression were the same as observed with 5-FU alone. CPT-11 induced G2/M arrest, while 5-FU arrested cells in S-phase in both cell lines. When cells were treated with CPT-11 followed by 5-FU we observed an increased in 5-FU-inducible S-phase arrest in both cell lines. Our findings suggested that the greater cytotoxicity of CPT-11/5-FU combination in HT-29 and SNU-C4 cell lines are not related to interference with thymidylate synthase.