In vitro assessment for cytotoxicity screening of new antimalarial candidates

Abstract In antimalarial research there are no standard procedures to determine the toxicity of a drug candidate. Among the alternatives available, in vitro cytotoxicity assays are the most widely used to predict toxic effects of future therapeutic products. They have the advantage over the in vivo assays, in that they offer the possibility to restrain the number of experimental variables. The objective of the present study was to compare in vitro cytotoxic methods by testing various compounds currently used to treat malaria against different cell lines. Neutral red (NR) uptake and methylthiazoletetrazolium (MTT) colorimetric in vitro assays were used to determine preliminary toxicity of commercially available antimalarial drugs against tumor and non-tumor cells lines. Toxicity through brine shrimp lethality bioassay and hemolytic activity were also evaluated. Significant differences were observed in the tests measured by NR uptake. The tumor cell lines TOV-21G and HepG2 and non-tumor WI-26VA4 cells showed relatively uniform toxicity results, with TOV-21G being the most sensitive cell tested, presenting the lowest concentration to cause death to 50% of viable cells (CC50) values. The results of this study support the use of TOV-21G, HepG2 and WI-26VA4 cells lines as the choice for cytotoxicity tests to evaluate potential bioactive compounds.

High occurrence of Entamoeba histolytica in the municipalities of Ariquemes and Monte Negro, State of Rondônia, Western Amazonia, Brazil / Alta ocorrência de Entamoeba histolytica nos municípios de Ariquemes e Monte Negro, estado de Rondônia, Amazônia Ocidental, Brasil

Introduction: Entamoeba histolytica infections were investigated in residents of the Ariquemes and Monte Negro municipalities in Rondônia State, Brazil. Methods: Stool samples of 216 individuals were processed by the spontaneous sedimentation method and analyzed by microscopy for detection of the E. histolytica/E. dispar complex, followed by the immunoassay method using an enzyme-linked immunosorbent assay-based kit for the E. histolytica stool antigen. Results: E. histolytica/E. dispar cysts were present in 61% (50/82) and 44% (59/134) of the samples from Ariquemes and Monte Negro respectively, with a significant difference in the occurrence of infection between the two populations [p < 0.05; χ2 = 5.2; odds ratio = 2.0 (1.1 - 3.6)]. The E. histolytica antigen detection rate was 36.6% (30/82) for stool samples from Ariquemes, and 19.4% (26/134) for stool taken from the residents of Monte Negro. The rate of the occurrence of amoebiasis was significantly higher in the population from Ariquemes [p < 0.05; χ2 = 7.8; odds ratio = 2.4 (1.2 - 4.7)]. Discussion: Due to the high occurrence of E. histolytica infected residents diagnosed in the region and the unavailability in local clinics of a test to distinguish between the two Entamoeba species, physicians should consider treating E. histolytica/E.dispar infections. Conclusion: The results indicate that E. histolytica infection is highly endemic in the studied areas. .

Introdução: Infecções por Entamoeba histolytica foram investigadas em moradores dos municípios de Ariquemes e Monte Negro, Rondônia, Brasil. Métodos: Amostras de fezes de 216 indivíduos foram processadas por microscopia óptica para detecção de cistos do complexo E. histolytica/E. dispar, seguido pelo método de imunoensaio utilizando kit de ensaio imunoenzimático para detecção específica de antígeno de E. histolytica. Resultados: Cistos de E. histolytica/E. dispar estavam presentes em 61% e 44% das amostras de Ariquemes e Monte Negro, respectivamente com diferença significativa na ocorrência da infecção entre as duas populações [p < 0,05; χ2 = 5,2; Odds relativa = 2,0 (1,1 - 3,6)]. A taxa de detecção de antígenos de E. histolytica nas amostras provenientes de Ariquemes foi de 36,6% e de 19,41% nas amostras de Monte Negro, sendo a ocorrência de amebíase significativamente maior na população de Ariquemes [p < 0,05; χ2 = 7,8; Odds relativa = 2,4 (1,2 - 4,7)]. Discussão: A elevada frequência da infecção por E. histolytica em residentes na região, bem como a indisponibilidade de avaliação clínica por testes específicos para distinção entre as duas espécies de Entamoeba, deve promover uma reflexão sobre o tratamento de infecções pelo complexo E. histolytica/E. dispar. Conclusão: Nas populações avaliadas foram detectadas elevadas ocorrências de E. histolytica. .

Validity of the polymerase chain reaction in the diagnosis of clinically suspected cases of American visceral leishmaniasis

To test the validity of the polymerase chain reaction for diagnosing American visceral leishmaniasis, 88 suspected cases were studied. Diagnosis was confirmed in 47 (53.5%) and ruled out in 41 (46.5%) patients. Samples of bone marrow and peripheral blood were processed by polymerase chain reaction to evaluate the sensitivity and specificity of the test and its agreement beyond chance with microscopy examination. The polymerase chain reaction was positive in bone marrow of 100% of the patients with amastigotes seen with microscopy examination, and in 59.5% in those where no parasite were seen. Agreement beyond chance between visualization of the parasite in bone marrow aspirates and polymerase chain reaction was considered weak (Kappa = 0.41). Concordance between polymerase chain reaction of bone marrow aspirates and of peripheral blood was considered excellent (Kappa = 0.88). The test turned out positive in all bone marrow aspirates of those with the disease and whereas the positivity rate was 58.5% among those without the disease, with specificity rate of 41.5%.

Survey of Bancroftian filariasis infection in humans and Culex mosquitoes in the western Brazilian Amazon region: implications for transmission and control

Introduction The aim of this work was to identify possible lymphatic filariasis foci in the western Brazilian Amazonian that could be established from the reports of Rachou in the 1950s. The study was conducted in three cities of the western Brazilian Amazon region - Porto Velho and Guajará-Mirim (State of Rondônia) and Humaitá (State of Amazonas). Methods For human infection evaluation thick blood smear stained with Giemsa was used to analyze samples collected from 10pm to 1am. Polymerase chain reaction (PCR) was used to examine mosquito vectors for the presence of Wuchereria bancrofti DNA. Humans were randomly sampled from night schools students and from inhabitants in neighborhoods lacking sanitation. Mosquitoes were collected from residences only. Results A total 2,709 night students enrolled in the Program for Education of Young Adults (EJA), and 935 people registered in the residences near the schools were examined, being 641 from Porto Velho, 214 from Guajará-Mirim and 80 from Humaitá. No individual examined was positive for the presence of microfilariae in the blood stream. A total of 7,860 female Culex quinquefasciatus specimens examined were negative by PCR. Conclusions This survey including human and mosquito examinations indicates that the western Amazon region of Brazil is not a focus of Bancroftian filariasis infection or transmission. Therefore, there is no need to be included in the Brazilian lymphatic filariasis control program. .

Consumo alimentar de crianças e adolescentes residentes em uma área de invasão em Maceió, Alagoas, Brasil / Food consumption of children and adolescents living in an area of invasion in Maceio, Alagoas, Brazil

Objetivo: Avaliar o consumo alimentar de energia, macronutrientes e micronutrientes, relacionados ao crescimento e desenvolvimento, de indivíduos menores de 16 anos residentes numa área de invasão consolidada em Maceió, Alagoas. MÉTODOS: Estudo do tipo transversal, realizado com 272 indivíduos menores de 16 anos residentes numa área de invasão consolidada em Maceió, Alagoas. A avaliação do consumo alimentar foi realizada pelo método recordatório 24 horas, com auxílio de um álbum de registro fotográfico. Para a análise da composição nutricional das dietas utilizou-se o programa Virtual-Nutri 1.0. A estimativa da prevalência de inadequação foi baseada nas Ingestões Dietéticas de Referência (DRIs) com o ajuste da variabilidade intrapessoal. Para a análise dos dados utilizou-se o programa Statistical Package for Social Science (SPSS) versão 11.5. Resultados: Dos indivíduos avaliados, 5,6 por cento apresentavam ingestão energética excessiva e 3,7 por cento insuficiente. A frequência de ingestão energética excessiva foi superior no grupo de 1 a 3 anos (p<0,05), que também apresentou maiores frequências de ingestão inadequada para vitamina A, vitamina E e zinco, e foi a única faixa etária que teve consumo médio de cálcio superior à ingestão adequada. Conclusão: os dados demonstram que o padrão alimentar dos indivíduos avaliados necessita de ajustes.

Objective: To assess the food intake of energy, macronutrients and micronutrients related to growth and development in individuals under 16 years of age living in a consolidated invasion settlement in Maceió, Alagoas. METHODS: The assessment of food intake was carried out by the 24-hour recall method, using a food picture album. Nutritional composition of diets was analysed using the Virtual Nutri-1.0 software. The estimated prevalence of inadequate intake was based on the Dietary Reference (DRIs), adjusted to account for intra-individual variability. The Statistical Package for Social Science (SPSS) version 11.5 was used for data analysis. Results: 5.6 percent of the subjects studied presented excessive energy intake and for 3.7 percent it was inadequate. The frequency of excessive energy intake was higher in the 1 to 3 year-old age group (p <0.05), which also showed higher rates of inadequate intake of vitamin A, vitamin E and zinc, and it was the only group in which average consumption of calcium was higher than the adequate intake. Conclusion: Data show that dietary patterns of the individuals studied need adjustments.

Aspectos clínicos e epidemiológicos da leishmaniose visceral em menores de 15 anos procedentes de Alagoas, Brasil / Clinical and epidemiological aspects of visceral leishmaniasis in children up to 15 years of age in Alagoas, Brasil

Com o objetivo de investigar características epidemiológicas e clínicas da leishmaniose visceral, em menores de 15 anos, foi realizado um estudo prospectivo em Alagoas no período de 1981 a 1995. Dos 530 casos diagnosticados clinicamente, procedentes em sua maioria da zona rural do Estado de Alagoas, 58 por cento eram do sexo masculino e 42 por cento do sexo feminino, sendo 55,3 por cento abaixo dos 5 anos de idade. As manifestações clínicas mais frequentes na admissão foram: hepatoesplenomegalia, febre e palidez. A média de tamanho do fígado e baço dos pacientes com menor tempo de duração da doença (<30 dias) era menor que naqueles doentes há mais tempo (> 360 dias). Independente da duração da doença, houve redução do fígado e do baço ao término do tratamento. No entanto, o percentual de redução do baço foi maior nos pacientes que adoeceram há menos tempo. Com relação ao fígado essa diferença não foi observada.

Influência do tratamento específico na prevalência de enteroparasitoses e esquistossomose mansônica em escolares do município de Barra de Santo Antônio, AL / Influence of specific treatment of intestinal parasites and schistosomiasis on prevalence in students in Barra de Santo Antônio, AL

De 1.020 estudantes submetidos a exame coproparasitológico (método de Lutz), 938 (92 por cento) apresentaram positividade para pelo menos uma espécie de enteroparasito. Seis meses pós-tratamento, 383 (37,5 por cento) estudantes foram reavaliados e 347 (90,6 por cento) apresentaram exames positivos. Näo houve diferença significativa nas prevalências antes e após tratamento específico, entretanto poliparasitismo foi significativamente menor na segunda análise

Prevalência da filariose canina causada por Dirofilaria immitis e Dipetalonema reconditum em Maceió, Alagoas, Brasil / Prevalence of canine filiariasis by Dirofilaria immitis and Dipetalonema e reconditum in Maceió, Alagoas State, Brazil

A prevalência da filariose canina causada por Dirofilaria immitis e Dipetalonema reconditum, foi estimada após a realizaçäo de inquérito hemoscópico em 1.519 cäes domiciliados. Foram examinados 1.097 cäes nos sete distritos sanitários da cidade de Maceió, Alagoas, 204 na Ilha de Santa Rita e 218 na cidade de Paripueira. Em Maceió, foram detectados 15 (1,3 por cento) cäes com microfilárias (MF) de D.immitis e 15 (1,3 por cento) com MF de D.reconditum. Todos os casos positivos foram considerados autóctones. As MF de D.immitis e de D. reconditum mediram 298,1µm e 249,2µm de comprimento e 7,3µm e 4,4µm de largura, respectivamente. Além do diagnóstico parasitológico pela técnica de gota espessa (100µL), foi utilizado o teste imunológico Witness, para detecçäo de antígeno filarial circulante, o qual confirmou os dados parasitológicos e permitiu a detecçäo de casos de infecçäo oculta. De um total de 6.579 fêmeas examinadas, pertencentes a seis espécies de mosquitos, oito (0,1 por cento) fêmeas de Culex quinquefasciatus foram encontradas naturalmente infectadas com larvas de D.immitis. Estes resultados demonstram a presença simultânea de D.immitis e D. reconditum na mesma área geográfica.

Desenvolvimento larvário de Culex quinquefasciatus (Say) (Diptera: culicidae) sob três diferentes dietas / Larval development of Culex quinquefasciatus (Say) (Dipetera: Culicidae) under three different diets

Três diferentes dietas, com leite desnatado, com raçäo para cäo e com raçäo para camundongo, foram testadas para manutençäo da colônia de mosquitos Culex quinquefasciatus do insetário da Universidade Federal de Alagoas. As diferenças observadas entre o tamanho das larvas de 3§ e 6§ dias, alimentadas com as três dietas testadas, näo foram estatisticamente significativas (p> 0,05). O tempo de desenvolvimento das larvas foi semelhante nos três grupos testados com as diferentes dietas. Os resultados sugerem, portanto, que as três dietas sä igualmente adequadas para a criaçäo em massa de larvas de .quinquefasciatus a partir de ovos.