Efecto de un extracto etanólico de propóleos sobre Pseudomonas aeruginosa en estado planctónico y sésil / Effect of ethanol extract of propolis on Pseudomonas aeruginosa in planktonic and sessile

Pseudomonas aeruginosa es un bacilo Gram negativo no fermentador de glucosa comúnmente aislado en infecciones nosocomiales. El incremento de la resistencia a los antibióticos y la participación de este microorganismo en patologías que cursan con formación de biopelículas da como resultado la falla usual de los antimicrobianos, por lo que resulta interesante estudiar el extracto etanólico de propóleos (EEP) como alternativa terapéutica frente a este patógeno oportunista. En este sentido, el objetivo principal del estudio fue evaluar el efecto del EEP sobre Pseudomonas aeruginosa en estado planctónico y sésil. El estudio se enmarcó en una investigación de tipo descriptiva, cuasi-experimental. Se determinó la concentración mínima inhibitoria (CMI) y bactericida (CMB) en estado planctónico por el método de macrodilución en tubos y en estado sésil por microdilución sobre biopelículas formadas en placas de poliestireno. Los resultados mostraron que el EEP, posee actividad bacteriostática parcial pero no total a 4% y actividad bactericida a 8% sobre P. aeruginosa en estado planctónico. Mientras que en estado sésil no hubo efecto bacteriostático ni bactericida. Se concluye que el EEP del Edo. Táchira Venezuela es efectivo frente a P. aeruginosa en estado planctónico pero no tiene actividad antimicrobiana sobre biopelículas formadas por la misma especie.

Pseudomonas aeruginosa is a glucose non-fermenting Gram-negative bacillus that is commonly isolated in nosocomial infections. The usual antimicrobials failure is the result of the increase in antibiotics resistance and this microorganism’s involvement in pathologies with biofilm formation. Therefore, the ethanol extract of propolis becomes an interesting subject of study as a therapeutic alternative against this opportunist pathogen. In this regard, the main objective of this investigation was to evaluate the effect of ethanol extract of propolis (EEP) over Pseudomonas aeruginosa in planktonic and sessile state. This research was categorized as a descriptive quasi-experimental type of investigation. It was determined the minimum inhibitory (MIC) and bactericide (MBC) concentration by the macrodilution tubes method in planktonic state, and the microdilution over biofilms formed on polystyrene plates in sessile state. The results showed that whereas there wasn’t a bacteriostatic or bactericide effect in sessile state, the EEP possesses 4% of non total but partial bacteriostatic activity and 8% of bactericide activity over P. aeruginosa in planktonic state. It concludes that the EEP of the Venezuelan state of Táchira is effective against P. aeruginosa in planktonic state but it won’t have antimicrobial activity over biofilms formed by the same species.

Bacilos gramnegativos no fermentadores en agua embotellada: susceptibilidad antimicrobiana y formación de biopelículas / Non fermenting Gram negative bacilli in bottled water: antimicrobial susceptibility and biofilms formation

El agua puede ser un vehículo para agentes patógenos y oportunistas portadores de multiresistencia y con capacidad de formar biopelículas (CFB). Se evaluó la presencia de indicadores microbiológicos y bacilos gramnegativos no fermentadores (BGNNF) en agua potable envasada y se estudió la susceptibilidad antimicrobiana y la CFB de los mismos. Se seleccionaron al azar 50 muestras de 250 mL obtenidos de envases de agua potable (20 L), provenientes de igual número de hogares. A cada muestra le fue realizado recuento de heterótrofos aerobios (vertido en placa), coliformes totales y termotolerantes (filtración por membrana), CFB (microplaca) y susceptibilidad antimicrobiana (Kirby-Bauer). El 92% y el 84% de las muestras presentaron coliformes totales y termotolerantes respectivamente, valores por encima de lo establecido en la Gaceta Oficial Venezolana N.° 36.395, mientras que el 86% presentó heterótrofos aerobios con cuentas >100 UFC/mL. El mayor porcentaje de BGNNF aislados pertenecía al complejo Acinetobacter baumannii/calcoaceticus (29,3%), seguido de Pseudomonas aeruginosa (17,4%), con moderada capacidad de formar biopelículas. No hubo asociación significativa entre la resistencia antimicrobiana y la CFB (p>0,05). Un porcentaje elevado de las muestras, no se ajustó a los parámetros microbiológicos establecidos en Gaceta, por lo que no se garantiza la inocuidad de las mismas.

Water can be a vehicle for multiresistant carrier pathogenic and opportunist agents with biofilm forming capacity (BFC). The presence of microbiological indicators and non fermenting Gram negative bacilli (NFGNB) was evaluated in bottled drinking water, as well as their antimicrobial susceptibility and BFC. Fifty 250 mL drinking water samples were randomly selected from 20 L drinking water bottles from the same number of homes. Each sample was tested for aerobic heterothrophics (discharged in a plate) counts, total and thermo tolerant coliforms (membrane filtration), BFC (microplate) and antimicrobial susceptibility (Kirby-Bauer). The results showed that 92% and 84% of the samples carried total and thermo tolerant coliforms respectively, values above those established in the Venezuelan Official Gazette N.o 36,395, while 86% presented aerobic heterothrophics with counts >100 CFU/mL. The highest percentage of isolated NFGNBs belonged to the Acinetobacter baumannii/calcoaceticus complex (29.3%), followed by Pseudomonas aeruginosa (17.4%) which has a moderate biofilm formation capacity. There was no significant association between antimicrobial resistance and the BFC (p>0.05). A high percentage of the samples were not adjusted to the biological parameters established in the Official Government Gazette; therefore, it is not possible to guarantee their safety.

Efecto de la temperatura de refrigeración y calentamiento de fórmulas lácteas Infantiles en el crecimiento de cronobacter sakazakii / Effect of temperature cooling and heating of powered infant formula on the growth of cronobacter sakazakii

Cronobacter sakazakii (C. sakazakii) es un microorganismo perteneciente a la familia Enterobacteriaceae asociado con patologías como meningitis y septicemia en recién nacidos. Las fórmulas lácteas infantiles (FLI) han sido reconocidas como el vehículo más importante de transmisión de C. sakazakii, por condiciones inadecuadas durante su producción o preparación. El objetivo de la presente investigación fue evaluar el efecto de la temperatura de refrigeración y el calentamiento de las FLI en el crecimiento de C. sakazakii. Las muestras de FLI reconstituidas se contaminaron con 102, 104 y 106 UFC/mL de C. sakazakii y se refrigeraron durante cuatro horas a 4°C, 6°C y 10°C, posterioriormente, se calentaron en baño hidrotérmico hasta 37°C. Las muestras fueron sembradas al tiempo “0” (postrefrigeración) y luego del calentamiento hasta 37°C en placas con agar cromogénico y se incubaron a 35°C por 24h. Para el análisis de los datos se utilizó la prueba de Wilcoxon. Según los datos obtenidos no hubo variación significativa en la población de C. sakazakii en las FLI luego de 4 horas en refrigeración a 4°C, 6°C y 10°C; sin embargo, al calentar las fórmulas hasta 37°C, hubo en todos los casos una reducción de un ciclo logarítmico en la población de C. sakazakii con un valor de p = 0.0056 y Z= 2.752. Se concluye que el calentamiento a 37°C post-refrigeracion de las muestras, disminuye la población de C. sakazakii en FLI (p<0,05)(AU)

Cronobacter sakazakii (C. sakazakii) is a microorganism belonging to the family Enterobacteriaceae associated with diseases such as meningitis and sepsis in newborns. The powdered infant formula (PIF) have been recognized as the most important vehicle of transmission of C. sakazakii, by inadequate conditions during production or during its preparation. The aim of this investigation was to assess the effect of the cooling temperature and the heating of PIF in the growth of C. sakazakii. For this, PIF reconstituted samples were contaminated with 102, 104 and 106 CFU / mL of C. sakazakii and refrigerated for four hours at 4 ° C, 6 ° C or 10 ° C after this hydrothermal bath heated to 37 ° C. Samples were cultured at time “0” (after- cooling) and then heating to 37 ° C in chromogenic agar plates and incubated at 35 ° C for 24h . For data analysis we used the Wilcoxon test. According to the data there was no significant variation in the population of C. sakazakii in PIF after 4 hours in the refrigerator at 4 ° C, 6°C and 10 ° C , however , by heating the formulas to 37 ° C , in all cases there was a reduction of one log cycle in population C. sakazakii with a value of p = 0.0056 and Z = 2.752 . We conclude that heating at 37°C post- cooling of the samples, decreases the population of C. sakazakii in FLI ( p < 0,05 )(AU)

Queratitis fúngica: revisión actual sobre diagnóstico y tratamiento / Fungal keratitis: review of diagnosis and treament

La queratitis fúngica es una infección característica de zonas tropicales, asociada a trauma vegetal. Existen dudas respecto al método diagnóstico óptimo y la efectividad de los tratamientos disponibles. ¿Cuál es el manejo más apropiado en queratitis fúngica? y ¿Cuál es la mejor forma de establecer el diagnóstico? El cultivo para hongos es el gold standard diagnóstico de elementos fúngicos. Respecto al tratamiento, natamicina y anfotericina B fueron los más utilizados y no demostraron efectividad en estudios prospectivos. Voriconazol demostró efectividad en múltiples infecciones fúngicas. Pudiera ser la droga de elección en condiciones óptimas, dado su mejor penetración intraocular. Se ha reconocido su elevado costo dificultando su aplicación generalizada. Esta revisión entrega recomendaciones para el manejo y establece la necesidad de realizar estudios que evalúen la costo-efectividad de voriconazol para la queratitis fúngica.

Fungal keratitis is a characteristic infection upon tropical zones, associated with vegetal trauma. Doubt exists about the best diagnostic test and the effectiveness of available treatment. Which is the best diagnostic method for fungal keratitis? And, which is the best management? Fungal culture remains as diagnostic gold standard of fungal elements. As of treatment, natamycin and amphotericin B are the most popular drugs for fungal keratitis and they have not shown effectiveness in randomized controlled trials or systematic reviews. Voriconazole showed effectiveness and security in multiple fungal infections. It may be the drug of choice in optimal conditions, because of its better ocular penetration and wider coverage. However, its high price difficult general application. This review establishes management recommendations and the need to perform studies that address cost-effectiveness analysis of voriconazole for fungal keratitis.

Formación de biopelículas y susceptibilidad antimicrobiana entre coliformes aislados en agua potable embotellada en Carabobo, Venezuela / Biofilms formation and antimicrobial susceptibility among coliforms isolated in bottled drinking water in Carabobo, Venezuela

Bacterias indicadoras de contaminación tales como bacterias heterótrofas, coliformes totales y termotolerantes fueron enumeradas en agua potable embotellada usando métodos estándar y filtración a través de membrana. El desarrollo de biopelículas y la susceptibilidad antimicrobiana (método de Kirby-Bauer) fueron evaluados sobre sesenta aislados de coliformes seleccionados de forma aleatoria. De 50 muestras, en un elevado porcentaje (94), se observó niveles de bacterias heterotróficas por encima de 100 UFC/mL de agua, 38 % presentó al menos una UFC/100 mL de coliformes totales o termotolerantes, mientras que, 30 % y 28 %, presentaron más de diez UFC/100 mL para ambos indicadores, respectivamente. Las especies de coliformes identificadas en mayor proporción fueron, Klebsiella pneumoniae, Enterobacter cloacae, Enterobacter aerogenes, Escherichia coli y Klebsiella oxytoca. Usando un ensayo in vitro para detectar la formación de biopelículas se determinó que entre un 75,8 y 79,2 % de los coliformes totales y termotolerantes, respectivamente, fueron descritos como moderados o fuertes formadores de biopelículas. No se observaron diferencias significativas (P>0,05) con respecto a la capacidad de formación de biopelículas entre los dos grupos. La mayoría de los aislados resultaron susceptibles frente a los antimicrobianos evaluados, únicamente dos especies presentaron fenotipos de resistencia no naturales. Perfiles de multiresistencia, típicos de especies asociadas con actividades clínicas o veterinarias, fueron identificados en un aislado de Enterobacter cloacae (betalactamasas tipo AmpC derreprimida) y un aislado de Escherichia coli fue resistente a ampicilina. Este estudio sugiere que el agua potable en botellones plásticos que se expende en algunas áreas urbanas de Carabobo, Venezuela, puede representar un riesgo para la salud.

Pollution indicator bacteria such as heterotrophic bacteria, total and thermotolerant coliforms were quantified in bottled drinking water using standard method and membrane filter procedure. Biofilm formation and antimicrobial susceptibility (Kirby-Bauer method) were tested on sixty randomly selected coliform strains. Among 50 water samples, a large percentage (94) were found with heterotrophic bacteria levels above 100 CFU/mL, 46 % showed at least one CFU/100 mL of thermotolerant or total coliformes whereas 28 % and 30 % showed more than ten CFU/100 mL for both indicators. Coliform species found in higher proportion were, Klebsiella pneumoniae, Enterobacter cloacae, Enterobacter aerogenes, Escherichia coli and Klebsiella oxytoca. Using an "in vitro" assay for biofilms formation it was determined that between 75.8 y 79.2 % of total and thermotolerant coliforms, respectively, were found to be moderate or strong biofilm formers. There were no significant differences (P>0.05) between both groups regarding the capacity for biofilm formation. Most of the isolates were susceptible against the antibiotics tested and only two species showed unnatural resistance phenotypes. Multiresistance profiles, typical of strains associated with human clinical or veterinary activities were identified in one Enterobacter cloacae isolated (derepressed AmpC beta-lactamases) and one Escherichia coli strain was ampicilin resistant. This study suggests that the water sold in some plastic bottles in some urban areas near by Carabobo, Venezuela, may be a risk to health.

Comparación de la técnica de Inmunoseparación Magnética y el Método Convencional para el aislamiento de Salmonella spp. en leche pasteurizada contaminada artificialmente / Comparison of Magnetic Immunoseparation technique and the conventional method for isolation of Salmonella spp. from artificially contaminated pasteurized milk

La leche pasteurizada es un excelente sustrato para Salmonella por lo que requiere un minucioso control de calidad que garantice la inocuidad para su consumo. El objetivo de la presente investigación fue comparar las técnicas de Inmunoseparación Magnética (ISM) y el Método Convencional (MC) para la detección de Salmonella spp. en leche pasteurizada contaminada artificialmente. Se trabajó con seis grupos de muestras de leche pasteurizada inoculadas con 50 cel/mL de Salmonella spp. más1x 10³ cel/mL de un “coctel” de Enterobacterias (Escherichia coli, Klebsiella oxytoca, Shigella boydii y Enterobacter cloacae). Se evaluó el crecimiento de Salmonella mediante el MC (COVENIN 1291-2004) e ISM, utilizando diferentes protocolos de esta última, variando el factor de dilución de la muestra (sin dilución y 10³) y el número de lavados (3 y 5). Resultados: Se logró recuperar Salmonella spp. mediante ISM a partir del caldo de enriquecimiento selectivo y pre-enriquecimiento del MC. La ISM redujo a tres días el tiempo de obtención de resultados con respecto al MC. Aplicando ISM directamente en leche pasteurizada inoculada, no se logró recuperación bacteriana. Se demostró que el factor dilución de la muestra no influyó en los resultados de la ISM, mientras que el número de lavados durante la técnica sí fue determinante. El MC logró recuperar Salmonella spp en 100% (n=30) de las muestras. Conclusión: La aplicación de la ISM para el aislamiento de Salmonella spp. en muestras de leche pasteurizada reduce significativamente el tiempo de obtención de resultados con respecto al MC.

Pasteurized milk is an excellent substrate for Salmonella and therefore requires a thorough quality control to ensure its safety for human consumption. The aim of this study was to compare the techniques of Magnetic Immunoseparation (MIS) and the conventional method (CM) for the detection of Salmonella spp. in artificially contaminated pasteurized milk. Six groups of pasteurized milk samples were artificially contaminated with 50 cells/mL of Salmonella spp. plus 1 x 10³ cells/mL of a "cocktail" of Enterobacteriaceae (Escherichia coli, Klebsiella oxytoca, Shigella boydii and Enterobacter cloacae). Salmonella growth by MC (COVENIN 1291-2004) and MIS was evaluated using different protocols of the latter, varying the dilution factor (without dilution and 10³) and the number of washes (3 and 5). Results: We succeeded in recovering Salmonella spp. by MIS from selective enrichment broth and pre-enrichment of CM. The MIS reduced the time for obtaining results down to three days with respect to CM. Bacterial recovery was not achieved by applying MIS directly into inoculated pasteurized milk. It was shown that the sample dilution factor did not influence MIS results, while the number of washings during the procedure greatly influenced them. The CM was able to recover Salmonella spp. in 100% (n=30) of the samples. Conclusion: The application of the MIS for the isolation of Salmonella spp. in samples of pasteurized milk significantly reduces the time for obtaining results with respect to CM.

Identificacion de flora fúngica en una empresa procesadora de alimentos del estado Carabobo / Identification of fungal flora in a food precessing company in the state of Carabobo

Los hongos se encuentran difundidos en el medio ambiente y son contaminantes frecuentes de los alimentos, siendo éste, el medio más fácil y rápido de transporte. Sus efectos nocivos dependerán de las condiciones externas que se brinden para que ellos puedan producir toxinas que afecten la salud del consumidor y el deterioro de los productos finales. El objetivo fue la identificación de la flora fúngica que pudiese estar presente en una empresa procesadora de alimento. La muestra estuvo constituida por áreas y superficies de interés para la empresa: áreas de empaque, rodillos de secado, piso 1, piso 2, piso 3 y la azotea, ubicada en el estado Carabobo, Venezuela. Se tomaron un total de 19 hisopados, para ser sembrados en agar Sabouraud y 49 placas empleando la técnica de sedimentación con el mismo agar, posteriormente fueron contabilizadas las UFC/mm3. Para la identificación por género y especie de los microorganismos se emplearon diferentes métodos y técnicas como: Cinta Adhesiva Transparente, Tubo Germinativo, Microcultivos y Pruebas API 20C. Los resultados obtenidos arrojaron que el mayor número de UFC/mm3 aisladas correspondieron a Cladiosporum oxysporum, Aspergillus níger, Rhizopus Spp y a Cándida albicans

Fungi are found spread throughout the environment and are frequent contaminants of food, since this is the fastest and easiest means for transport. Their injurious effects depend on the external conditions provided so that they can produce toxins affecting the health of the consumer and deterioration of the end products. The objective of this study was to identify the fungal flora that could be present in a food processing company. The sample consisted of areas and surfaces of interest to the company: packing areas, drying rollers, floor 1, floor 2, floor 3 and the roof, located in the state of Carabobo, Venezuela. A total of 19 swabs were taken, which were sown in Sabouraud agar and 49 plates, using the sedimentation technique with the same agar; later, the UFC/mm3 were counted. For identification of the microorganisms by genre and species, different methods and techniques were used, such as: transparent sticky tape, germinating tubes, microcultures and* API 20C tests. Results indicated that the greatest number of UFC/mm3 isolates corresponded to Cladiosporum oxysporum, Aspergillus níger, Rhizopus Spp and Cándida albicans

Viabilidad de un aislado de Escherichia coli O157: H7 en queso tipo guayanés usando separación inmunomagnética como herramienta de recuperación / The viability of an Escherichia coli O157: H7 strain in guayanés Ccheese using immunomagnetic separation as a tool for recovery

Se determinó la viabilidad de Escherichia coli O157:H7 en queso guayanés de manufactura artesanal, evaluando distintos esquemas de aislamiento basados en separación inmunomagnética (SIM). Unidades de queso (25 g) fueron inoculadas con 25 y 250 cel/g del patógeno y almacenadas a 4°C. Las piezas se analizaron los días 0, 2, 6, 8 y 10 post-inoculación a través de distintos esquemas de separación inmunomagnética (SIM) que incluían dos caldos de enriquecimiento: agua de peptona buferada sin inhibidores (APB-SI) y agua de peptona buferada con vancomicina, cefixime y telurito (APB-VCT) y dos agares de aislamiento del inmunoseparado: agar MacConkey sorbitol (MCS) y agar MacConkey sorbitol con telurito y cefixime (MCS-TC). Los resultados demostraron la viabilidad del patógeno hasta por 10 días post-inoculación y en el transcurso de este tiempo, para algunos de los esquemas aplicados sobre la base de SIM, se logró un incremento en los porcentajes de recuperación, lo que indica que el número de células inoculadas se elevó con el tiempo. En cuanto a la utilidad de la SIM para la recuperación del patógeno, se observó variaciones en los porcentajes de aislamiento en función del caldo de enriquecimiento y el nivel de células inoculadas. Los mayores porcentajes de recuperación se obtuvieron en las piezas inoculadas con 250 cel/g, con rangos del 35 al 85 por ciento (día 0 y 10 respectivamente) en el mejor de los esquemas SIM (APB-SI/SIM/MCS), mientras que para niveles de 25 cel/g, en el mejor de los casos (APB-SI/SIM/MCS), durante los primeros 6 días no superó el 15 por ciento. El caldo de enriquecimiento de mejor desempeño fue APB-SI (p <0,05) y no se observó diferencias en los porcentajes de recuperación (p>0,05) en función de los agares utilizados (MCS y MCS-TC) para la siembra del inmunoseparado

The viability of an Escherichia coli O157:H7 strain in cottage-industry Guayanes cheese was determined by evaluating several isolation protocols based on immunomagnetic separation (IMS). Cheese units (25 g) were inoculated with 25 and 250 cel/g of this pathogen and stored at 4°C. The pieces were analized at 0, 2, 6, 8 and 10 days post-inoculation through several IMS protocols including two enrichment broths: buffered peptone water without inhibitors (BPW-WI) and buffered peptone water with vancomicyn, cefixime and telurite (BPW-VCT) and two immunoseparation isolation agars: MacConkey-sorbitol agar (MSA) and MacConkey-sorbitol agar with cefixime and telurite (MSA-CT). Results demonstrated the viability of the pathogen for up to 10 days post-inoculation, and during this time, for some of the schemes applied on the IMS base, an increase in recovery percentages was achieved, indicating that the number of inoculated cells increased with time. In terms of the utility of IMS for recovering the pathogen, variations in the isolation percentages were observed in terms of the enrichment broth and the level of inoculated cells. The biggest recovery percentages were obtained in pieces inoculated with 250 cel/g, with ranges between 35 and 85 percent (days 0 and 10 respectively) in the best IMS scheme (BPW-WI/IMS/MSA), while, at levels of 25 cel/g, in the best case (BPW-WI/IMS/MSA), 15 percent was not surpassed during the first six days. The best performing enrichment broth was BPW-WI (p<0.05) and differences in the recovery percentages (p>0.05) were not observed in relation to the agars (MSA and MSA-CT) used for sowing the immunoseparator

Evaluación de la técnica de inmunoseparación magnética para recuperación de Escherichia coli O157: H7 en cremas de leche / Evaluation of the technique of immunomagnetic separation for recovery of Escherichia coli O157:H7 in unpasteurized milk creams

La utilidad de la técnica de inmunoseparación magnética (ISM) para la recuperación de Escherichia coli O157:H7 en cremas de leche fue evaluada. Se determinó la eficiencia de distintos caldos de enriquecimientos previos a la ISM y se analizaron diferentes agares (diferenciales y/o selectivos) para la siembra del inmunoseparado. Porciones de crema de 25 g, fueron inoculadas con niveles bajos del patógeno (¼ 50, 10 y 1 células/g) para luego ser enriquecidas en agua de peptona buferada con vancomicina (APB-V), agua de peptona buferada con vancomicina y cefixime (APB-VC) y caldo soya tripticasa con vancomicina, cefixime y telurito (CST-VCT) incubándose a 35ºC. / 18 horas. Transcurrida la incubación se aplicó ISM y el inmunoseparado se sembró en agar MacConkey sorbitol (AMS), agar MacConkey sorbitol con telurito y cefixime (AMS-TC) y agar cromogénico con telurito y cefixime (ACRG-TC). Se observó diferencias estadísticamente significativas (p<0,05) en los porcentajes de recuperación según el caldo de enriquecimiento empleado, obteniéndose las mayores tasas de recuperación con el uso de CST-VCT para los tres niveles de inóculo. Los valores de recuperación no variaron significativamente (p<0,05) según el agar utilizado, mientras que el número de células inoculadas impacta los porcentajes de recuperación, siendo mayor según aumenta el inóculo. Se concluye la técnica de inmunoseparación magnética es un método sensible para la recuperación de Escherichia coli O157:H7 en cremas de leche, recomendándose como esquema de aislamiento el enriquecimiento en CST-VCT, aplicación de ISM, y siembra del inmunoseparado en medio no selectivo (AMS) y medio selectivo (AMS-TC o ACRG-TC)