Cargas virales en pacientes trasplantados y genotipificación de Citomegalovirus / Viral loads in transplant patients and Cytomegalovirus genotyping

Resumen Objetivo: Determinar el curso de infecciones virales por un periodo de un año, mediante la medición de la carga viral de Adenovirus, virus BK, virus Epstein-Barr, Citomegalovirus y Herpesvirus humano 6, en 30 pacientes del Hospital San Juan de Dios, sometidos a trasplante de riñón o células progenitoras hematopoyéticas. Métodos: Se determinaron las cargas virales en diez muestras de sangre por paciente: una muestra pretransplante, ocho muestras obtenidas cada dos semanas postrasplante y una última muestra a los seis meses posteriores al trasplante. La cuantificación de los virus se realizó por reacción en cadena de la polimerasa en tiempo real y, solo en el caso del Adenovirus, por reacción en cadena de la polimerasa de punto final. También se determinaron los genotipos de Citomegalovirus en los pacientes positivos para este virus, utilizando una reacción en cadena de la polimerasa dirigida al gen de la glicoproteína B y secuenciación de los fragmentos amplificados. Las secuencias obtenidas fueron comparadas y alineadas con una secuencia de referencia, utilizando el programa Clustal Omega. Resultados: Al 77 % de los pacientes se les detectó al menos uno de los cinco virus analizados y el virus con mayor prevalencia fue el Citomegalovirus, con un 57% de positividad del total de la población. El genotipo de Citomegalovirus que más se detectó fue el genotipo 3. Se monitoreó el comportamiento de las cargas virales para cada virus analizado y la proporción de su incidencia entre pacientes masculinos y femeninos. Conclusiones: La cuantificación y caracterización de virus en pacientes de trasplante, permite un mejor manejo clínico del paciente con infecciones oportunistas y también un manejo más adecuado de las terapias farmacológicas.

Summary Aim: The objective of this study was to determine the course of viral infections during a period of one year, by measuring viral loads for Adenovirus, BK virus, Epstein-Barr virus, Cytomegalovirus and Human herpesvirus 6, in 30 patients from the San Juan de Dios National Hospital, undergoing kidney or hematopoietic progenitor cell transplants. Methods: Viral loads were determined in ten blood samples from each patient: a pre- transplant sample, eight samples obtained at two-week intervals post-transplant and one last sample at six months post-transplant. Viral quantification was performed by real-time polymerase chain reaction and, only for Adenovirus, by end-point polymerase chain reaction. Also, Cytomegalovirus genotypes were determined in patients that tested positive for this virus, by polymerase chain reaction directed towards the glycoprotein B gene and sequencing of the amplified fragments. These sequences were compared and aligned with a reference sequence, using the Clustal Omega Program. Results: The results of the study indicated that 77% of the patients had at least one of the five viruses detected and the virus with the highest prevalence was Cytomegalovirus, exhibiting 57% positivity in the total population studied. The most frequent Cytomegalovirus genotype detected was genotype 3. The viral load behavior was monitored for each virus analyzed as well as the incidence proportion between male and female patients. Conclusions. Viral quantification and characterization in transplant patients allows for better clinical management of patients with opportunistic infections and also a better management of pharmacological therapies.

Cuantificación del virus de hepatitis B por la técnica PCR tiempo real / Quantification of viral hepatitis type B using the real-time PCR technique

La técnica de reacción en cadena de la polimerasa (PCR) ha determinado, en la cuantificación de virus, un avance especial para el manejo de infecciones crónicas por virus, en especial, para HIV, virus de hepatitis B y C. La cuantificación en tiempo real se realiza en el ABI PRISM Sequence Detection System. Se amplifica, específicamente, el fragmento pb del genoma del virus de hepatitis B. Se recomienda el HBV PCR kit para la toma de la muestra., determinándose un protocolo para el almacenamiento de la misma. Es importante saber que el congelar las muestras o el almacenamiento prolongado disminuyen la sensibilidad del método. Se puede almacenar por años si es a una temperatura de - 70º C. Tubos con heparina o pacientes heparinizado alteraran la determinación de la muestra. El limite inferior detectable del virus B es de 3.78 UI/ml y el mayor es 1.4 x 10¹¹ UI/ml, se determinan todos los genotipos desde A-H. Los pacientes HBeAg positivos, usualmente, tienen valores mayores a 1 x 10(6) UI/ml y los HBe negativos portadores inactivos por lo general, valores menores a 1 x 10(4).

The polymerase chain reaction technique (PCR) has determined a special advance in the virus quantification for the management of chronic viral infections, especially for HIV hepatitis virus type B and C. The real-time quantification is performed in the ABI PRISM Sequence Detection System. The fragment pb of the genome of the hepatitis type B virus is amplified. The HBV PCR kit is recommended for taking a sample and a protocol for storing it is determined. It is important to know that freezing the samples or keeping them for a long time decreases the sensitivity of the method. It may be stored for years if kept at a temperature of -70° C. Heparinized patients or tubes with heparin will alter the determination of the sample. The lower limit of detection of B virus is 3.78 Ul/ml and the higher limit is 1.4 x 10(11) Ul/ml. All genotypes from A-H are determined. The patients with HbeAg positive usually present higher values than 1 x 10(6) Ul/ml and the HBe negative inactive carriers usually get lower values than 1 x 10(4).