ABSTRACT
RESUMEN S. maxima y Kefir son conocidos y utilizados por sus propiedades antioxidantes e inmunoestimulantes. El objetivo en este estudio fue evaluar los extractos naturales de estos dos agentes con la técnica de manipulación de ovocitos incluidos en folículos preantrales (MFP), porque la técnica puede reemplazar el uso de animales de laboratorio y también podría armonizar las leyes que intentan reducir y mejorar el uso de animales para el estudio de nuevos fármacos y para integrar a las buenas prácticas de laboratorio. Los extractos naturales estudiados fueron obtenidos a partir de S. maxima y Kéfir, las dos sustancias son conocidas en el mercado por su actividad antioxidante e inmunoestimulante. Los dos extractos fueron evaluados en suspensiones de 10, 50, 100 and 200 µg.mL-1. Los resultados muestran que Spirulina produjo disminución en la sobrevivencia, el desarrollo y el diámetro folicular. Mientras que Kéfir no mostró influencias positivas o negativas sobre el crecimiento y desarrollo de los folículos preantrales, sólo la concentración de 200 µg.mL-1 disminuyó la sobrevivencia folicular. La técnica MFP demostró encajar en la política de las 3R (reemplazo, reducción y refinamiento) y permitió evaluar la citotoxicidad mostrando que la técnica puede ser usada como una prueba de seguridad en extractos naturales.
SUMMARY S. maxima and Kéfir are known and used for their antioxidant and immunostimulant properties. This study aimed to evaluate the natural extracts of these two agents with the technique of manipulation of oocytes included in preantral follicles (MFP), because the technique can replace the use of laboratory animals and could also harmonize the laws that try to reduce and improve the use of animals for the study of new drugs and to integrate good laboratory practices. The natural extracts studied were obtained from S. maxima and Kefir, both substances are known in the market for their antioxidant and immunostimulating activity. Both were evaluated in suspensions of 10, 50, 100 and 200 µg.mL-1. The results show that Spirulina produced a decrease in survival, development, and follicular diameter. While Kefir did not show positive or negative influences on the growth and development of preantral follicles, only the concentration of 200 µg.mL-1 decreased follicular survival. The MFP technique proved to fit into the 3R policy (replacement, reduction, and refinement) and allowed to evaluate cytotoxicity, showing that the technique can be used as a safety test in natural extracts.
ABSTRACT
SUMMARY This study aimed at evaluating effective methods for breaking the hard and insoluble spores of Ganoderma lucidum to recover functional biomolecules. Rupture techniques were evaluated such as manual maceration (RM), maceration with spheres of various materials (BR), and microwave exposure plus maceration with steel/ chrome spheres (MBR1). Spore rupture was evaluated using UV-Vis spectroscopy, which showed vibrations of 2955, 1642, 1240, 1080 and 1746 cm-1 corresponding to changes in spore walls. The MBR1 extract contained the largest amounts of carbohydrates (19.80 mg.g-1 spores) and polyphenols (2.21 mg.g-1 spores), whereas the BR extract had higher antioxidant activity (57.22%Inb DPPH). The MBR1 and BR extracts contained 62.2 and 73.5% glucose, respectively. Both methods also involved significant extraction of carbohydrates and proteins. The best way to extract biomolecules from spore walls is to perform a microwave heat treatment and break the walls with steel/chrome spheres; this produces large quantities of carbohydrates with antioxidant properties.
RESUMEN El objetivo de este estudio fue evaluar varios métodos de ruptura de las esporas de Ganoderma lucidum y extraer sus propiedades bioactivas. Para este propósito se evaluaron diferentes técnicas de rompimiento como: la maceración manual (RM), la maceración con esferas de diversos materiales (BR) y la exposición a microondas junto la maceración de las esporas con esferas de acero/cromo (MBR1). La ruptura de las esporas fue evaluada por espectroscopia UV-Vis, la cual mostró que las vibraciones 2955, 1642, 1240, 1080 y 1746 cm-1 correspondieron a cambios estructurales en las paredes de las esporas. El extracto MBR1 presento el mayor contenido de carbohidratos (19,80 mg.g-1) y polifenoles (2,21 mg.g-1), mientras que el extracto BR tuvo una mayor actividad antioxidante (57,22% Inb DPPH). Los extractos MBR1 y BR también presentaron en el análisis de monosacáridos un 62,2 y 73,5% de contenido glucosa. Como conclusión la mejor metodología para extraer biomoléculas de las paredes de las esporas de G. lucidum fueron el tratamiento térmico con microondas y la ruptura de las paredes con esferas de acero/cromo, porque este proceso permitió la extracción de una mayor cantidad de carbohidratos con posibles propiedades antioxidantes.